馬貴范，楊鳳，郭文學(xué)，趙海麗，梁澤楠，閆喜武

(1.大連海洋大學(xué) 遼寧省貝類良種繁育工程技術(shù)研究中心，農(nóng)業(yè)部北方海水增養(yǎng)殖重點實驗室，遼寧 大連116023;2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院 黑龍江水產(chǎn)研究所，黑龍江 哈爾濱150000)

灘涂貝類在運輸、灘涂放養(yǎng)以及潮間帶生長過程中，經(jīng)常遭遇干露和雨水浸泡，研究貝類對干露和淡水浸泡的耐受性，有助于科學(xué)判定運輸時間和放養(yǎng)方式，降低貝類在運輸、灘涂放養(yǎng)以及生長過程中的死亡率。采用干露和淡水浸泡等方法還有助于清除貝類苗種繁育過程中的敵害生物和病原菌［1］，提高稚貝的存活率［2］。因此，研究貝類對干露和淡水浸泡的耐受性具有重要的意義。關(guān)于毛蚶Scapharca subcrenate［3］、長竹蟶Solen stritus［4］、海灣扇貝Argopecten irradians［5］、硬殼蛤Mercenaria mercenaria［2］、太平洋牡蠣Crassostrea gigas［6］、橄欖蚶Estellarca olivacea［7］和菲律賓蛤仔Ruditapes philippinarum［8］等對干露和淡水浸泡的耐受性已有一些報道，但目前尚未見關(guān)于中國蛤蜊和四角蛤蜊的相關(guān)研究報道。

中國蛤蜊Mactra chinensis和四角蛤蜊Mactra veneriformis 同屬瓣鰓綱、簾蛤目、蛤蜊科、蛤蜊屬，分布于中國的遼寧、山東沿海以及日本等地，其營養(yǎng)價值較高，四角蛤蜊還具有降糖保肝和增強(qiáng)免疫力等藥用保健價值［9］，是具有廣闊養(yǎng)殖前景的埋棲貝類［10-13］。目前，國內(nèi)外關(guān)于中國蛤蜊和四角蛤蜊的研究主要集中在基礎(chǔ)生物學(xué)方面［10-25］。本研究中，作者進(jìn)行了中國蛤蜊和四角蛤蜊稚貝、成貝對干露和淡水浸泡的耐受性研究，以期為中國蛤蜊和四角蛤蜊的苗種培育、敵害防治以及安全運輸?shù)忍峁┛茖W(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗用中國蛤蜊稚貝(4.19 mm ± 0.83 mm)和四角蛤蜊稚貝(2.62 mm± 0.19 mm)為2011年8月通過人工繁育及中間育成培育至60日齡的稚貝;成貝分別為2011年11月和2012年5月采自大連黃海海區(qū)的中國蛤蜊和四角蛤蜊。稚貝試驗在莊河市海洋貝類育苗場進(jìn)行，成貝試驗在大連海洋大學(xué)遼寧省貝類良種繁育技術(shù)工程研究中心完成。

1.2 方法

干露協(xié)迫時先用紗布吸去貝殼表面水分，然后平放在無水的桶底或水槽里;淡水浸泡協(xié)迫時將貝類直接放在淡水中。試驗開始后按照設(shè)定的時間段隨機(jī)從受試樣本中抽取一定量的貝類測定死亡率。稚貝抽樣數(shù)量一般為20 ～30 枚，成貝一般為8 ～10 枚。由于受干露和淡水浸泡脅迫后貝的死亡很難準(zhǔn)確判斷，因此，在各個時間組的干露或淡水脅迫完成后依次將隨機(jī)取出的貝放入相近溫度的沙濾海水中培養(yǎng)24 h，以其在正常海水中培養(yǎng)24 h 的累計死亡率作為脅迫后的實際死亡率。

死亡標(biāo)準(zhǔn)為雙殼不能正常閉合或水管、足和內(nèi)臟團(tuán)無活動跡象、受到針刺等刺激無應(yīng)激性反應(yīng)。每個試驗均設(shè)3 個平行。死亡率計算公式為

死亡率=(死亡貝數(shù)/抽樣貝數(shù))×100%。

1.2.1 干露脅迫試驗 稚貝試驗在2 L 的紅色塑料桶中進(jìn)行，氣溫為25 ℃，相對濕度為59.2% ±3.8%，每個時間梯度的樣本數(shù)為100 枚。其中中國蛤蜊時間梯度設(shè)置為0、12、15、18、21、27、30 h;四角蛤蜊設(shè)置為0、8、12、16、20、24、28、32 h。成貝試驗在70 L 塑料桶中進(jìn)行，氣溫為15 ℃，相對濕度為46.8% ±2.9%。其中中國蛤蜊(殼長43.84 mm ±3.17 mm，濕質(zhì)量14.68 g±3.03 g)樣本總數(shù)為70 枚，時間梯度設(shè)置為0、12、24、30、48、54、60 h;四角蛤蜊(殼長33.04 mm ±2.28 mm，濕質(zhì)量12.44 g ±2.31 g)樣本總數(shù)為120 枚，時間梯度設(shè)置為0、36、44、52、60、68、76、90、100、110、115、120 h。

1.2.2 淡水浸泡脅迫試驗 淡水浸泡期間足量充氣，不投餌。試驗前所用淡水充分曝氣。稚貝試驗在裝有10 L 淡水的塑料桶中進(jìn)行，水溫為23 ℃，兩種稚貝的總樣本數(shù)為1 萬枚。其中中國蛤蜊時間梯度設(shè)置為0、4.00、5.33、6.67、8.00、9.33、10.67、12.00 h;四角蛤蜊時間梯度設(shè)置為0、4、8、12、16、20、24、32 h。成貝試驗在裝有60 L淡水的方形塑料槽中進(jìn)行，水溫為15 ℃。其中中國蛤蜊(殼長43.81 mm±2.26 mm，濕質(zhì)量16.12 g±2.61 g)樣本總數(shù)為70 枚，時間梯度設(shè)置為0、4、8、12、16、20、24、28 h;四角蛤蜊(殼長37.90 mm ±1.81 mm，濕質(zhì)量17.58 g ±2.71 g)樣本總數(shù)為130 枚，時間梯度設(shè)置為0、6、12、18、24、30、36、42、48、54 h。

1.3 數(shù)據(jù)處理

用0 死亡的最長脅迫時間到100%死亡的最短脅迫時間內(nèi)的死亡率(y)與脅迫時間(x)進(jìn)行回歸分析，建立回歸方程，并根據(jù)回歸方程求得90%致死時間(LT90)、半致死時間(LT50)和10%致死時間(LT10)。

2 結(jié)果與分析

2.1 稚貝的耐干露能力

取中國蛤蜊稚貝0 死亡的最長干露時間(12 h)和100%死亡的最短干露時間(30 h)內(nèi)的數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，得到死亡率與干露時間直線相關(guān)顯著(P＜0.05，圖1)，由回歸方程求得中國蛤蜊稚貝耐干露的LT90、LT50和LT10依次為26.4、20.4、14.4 h。

同理，在12 ～32 h 干露脅迫時間內(nèi)，四角蛤蜊稚貝的死亡率與干露時間直線相關(guān)顯著(P＜0.05，圖1)，由回歸方程求得四角蛤蜊稚貝耐干露的LT90、LT50和LT10依次為29.2、21.9、14.6 h。平均數(shù)差異顯著性檢驗結(jié)果表明:中國蛤蜊稚貝和四角蛤蜊稚貝的LT10無顯著性差異(P ＞0.05)，兩種稚貝的LT90和LT50均有顯著性差異(P＜0.05)。

2.2 成貝的耐干露能力

在12 ～60 h 干露脅迫時間內(nèi)，中國蛤蜊成貝的死亡率和干露時間直線相關(guān)極顯著(P＜0.01，圖1)，由回歸方程求得中國蛤蜊成貝耐干露的LT90、LT50和LT10依次為53.2、35.8、18.3 h。

圖1 中國蛤蜊和四角蛤蜊稚貝和成貝在不同干露時間的死亡率Fig.1 The mortality rate of clams Mactra chinensis and Mactra veneriformis juveniles and adults in different air exposure periods

四角蛤蜊成貝干露60 h 內(nèi)未出現(xiàn)死亡;從干露60 h 開始，死亡率隨著干露時間的延長直線升高(P＜0.01，圖1)，由直線回歸方程求得四角蛤蜊成貝耐干露的LT90、LT50和LT10依次為124.6、95.7、66.8 h。平均數(shù)差異顯著性檢驗結(jié)果表明，兩種成貝的LT90、LT50和LT10均有極顯著性差異(P＜0.01)。

2.3 稚貝的耐淡水浸泡能力

取中國蛤蜊稚貝0 死亡的最長淡水浸泡時間(4 h)和100%死亡的最短淡水浸泡時間(10.7 h)內(nèi)的數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析(圖2)，得到死亡率(y)與淡水浸泡時間(x)的回歸直線方程為

由回歸方程求得中國蛤蜊稚貝耐淡水浸泡的LT90、LT50和LT10依次為9.0、6.6、4.2 h。

同理，取四角蛤蜊稚貝浸泡4 ～16 h 的數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析(圖2)，得到死亡率(y)與淡水浸泡時間(x)的回歸直線方程為

由回歸方程求得四角蛤蜊稚貝耐淡水浸泡的LT90、LT50和LT10依次為15.3、10.8、6.4 h。平均數(shù)差異顯著性檢驗結(jié)果表明，中國蛤蜊稚貝和四角蛤蜊稚貝的LT90、LT50和LT10均有極顯著性差異(P＜0.01)。

2.4 成貝的耐淡水浸泡能力

將中國蛤蜊成貝0 死亡的最長淡水浸泡時間(4 h)和100%死亡的最短浸泡時間(28 h)內(nèi)的數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析(圖2)，得到死亡率(y)和淡水浸泡時間(x)的回歸方程為

由回歸方程求得中國蛤蜊成貝耐淡水浸泡的LT90、LT50和LT10分別為29.4、17.0、4.6 h。

同理，取四角蛤蜊浸泡6 ～54 h 的數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析(圖2)，得到死亡率(y)與淡水浸泡時間(x)的回歸直線方程為

由回歸方程求得四角蛤蜊成貝耐淡水浸泡的LT90、LT50和LT10依次為52.3、28.9、5.6 h。平均數(shù)差異顯著性檢驗結(jié)果表明，四角蛤蜊成貝的LT90和LT50極顯著高于中國蛤蜊成貝(P＜0.01)。

圖2 中國蛤蜊和四角蛤蜊稚貝在不同淡水浸泡時間的死亡率Fig.2 The mortality rate of clams Mactra chinensis and Mactra veneriformis juveniles and adults in the different freshwater bathing periods

3 討論

3.1 中國蛤蜊和四角蛤蜊耐干露能力的比較

雖然中國蛤蜊和四角蛤蜊親緣關(guān)系較近(同一屬)，但是二者對干露的耐受性卻有明顯差異。除了稚貝100%存活的最長時間和LT10相近以外，其他各項指標(biāo)(LT90、LT50)均是中國蛤蜊低于四角蛤蜊，并且差異顯著(P＜0.05)甚至極顯著(P＜0.01)。表明不論是稚貝還是成貝，耐干露能力均為四角蛤蜊＞中國蛤蜊，并且成貝的表現(xiàn)更明顯(圖1、圖2)。

表1 列出了幾種貝類對干露的耐受性研究結(jié)果。由于引起個別生物死亡的最小致死劑量(LC0、LC5、LC10等)或最小致死時間(LT0、LT5、LT10等)和絕對致死劑量(LC90、LC100等)或絕對致死時間(LT90、LT100等)受個體差異的影響很大，所以生物對環(huán)境脅迫的耐受能力通常用半致死劑量(LC50)或半致死時間(LT50)來反映。因此，以LT50為依據(jù)，將文獻(xiàn)中的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計求得幾種貝類的LT50，得出對干露的耐受能力由大到小依次為:氣溫為25 ～27 ℃時，橄欖蚶成貝(110.2 h)＞ 硬殼蛤稚貝(44.4 h)＞四角蛤蜊稚貝(21.9 h)＞中國蛤蜊稚貝(20.4 h)＞毛蚶稚貝(9.7 h);干露氣溫為15 ℃時，橄欖蚶成貝(145.7 h)＞四角蛤蜊成貝(95.7 h)＞中國蛤蜊成貝(35.8 h)＞毛蚶稚貝(28.4 h)。由此看出，四角蛤蜊和中國蛤蜊有較強(qiáng)的耐干露能力。

表1 幾種貝類對干露的耐受能力Tab.1 The tolerance to air exposure in molluscs

綜合LT0和LT10值，在氣溫為25 ℃下，干燥運輸60日齡的中國蛤蜊稚貝(4.19 mm ± 0.83 mm)和四角蛤蜊稚貝(2.62 mm ±0.19 mm)，時間最好在12 h 以內(nèi)，最長不要超過14 h(會有10%的死亡)。在氣溫為15 ℃下，干燥運輸中國蛤蜊成貝，最好在12 h 以內(nèi)，最長不要超過18 h(會有10%的死亡)，而四角蛤蜊成貝則可以在60 h 以內(nèi)安全生存。

3.2 中國蛤蜊和四角蛤蜊耐淡水浸泡能力的比較

由平均數(shù)差異顯著性檢驗得到:除兩種成貝的LT10無顯著性差異(P ＞0.05)外，四角蛤蜊的LT50、LT90均顯著高于中國蛤蜊(P＜0.05)，說明四角蛤蜊耐淡水浸泡能力強(qiáng)于中國蛤蜊。關(guān)于其他貝類耐淡水浸泡的文獻(xiàn)不多，且沒有LT50值的相關(guān)報道，因此，以100%存活的最長時間為依據(jù)與其他文獻(xiàn)進(jìn)行初步比較(表2)，結(jié)果表明:水溫為15 ℃時，耐淡水浸泡能力由大到小依次為菲律賓蛤仔稚貝＞四角蛤蜊成貝＞中國蛤蜊成貝＞硬殼蛤稚貝。

生產(chǎn)中用淡水浸泡處理貝類，可以達(dá)到清除敵害和病原菌的目的［2］。本研究中，綜合LT0和LT10值，在水溫為15 ～23 ℃條件下，四角蛤蜊稚貝及中國蛤蜊稚貝和成貝淡水浸泡以不超過4 h 為宜，四角蛤蜊成貝不要超過6 h。

貝類耐干露能力受種類、個體大?。?，7，10］、溫度［3，8］和濕度［5，7］等多種因素影響;耐淡水浸泡能力也與個體大小和發(fā)育階段有關(guān)［10］。因此，在生產(chǎn)實際中應(yīng)用本試驗結(jié)果時要加以權(quán)衡。關(guān)于兩種貝類不同發(fā)育階段的耐受能力以及確切的生物學(xué)機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

表2 幾種貝類對淡水浸泡的耐受能力Tab.2 The tolerance to freshwater immersion bathing in molluscs

［1］張國范，閆喜武.蛤仔養(yǎng)殖學(xué)［M］.北京，科學(xué)出版社，2010.

［2］李忠泓，王國棟.硬殼蛤稚貝對淡水浸泡、干露和低溫的耐受能力［J］.水產(chǎn)科學(xué)，2004，23(6):14 -16.

［3］曹琛，匡少華，姜超，等.干露及鹽度變化對毛蚶苗的影響試驗［J］.河北漁業(yè)，2007，16(5):38，51.

［4］孫虎山.長竹蟶苗的潛沙及耐干露能力研究［J］.煙臺師范學(xué)院學(xué)報:自然科學(xué)版，1992，8(1 -2):67 -73.

［5］于瑞海，辛榮，趙強(qiáng)，等.海灣扇貝不同發(fā)育階段耐干露的研究［J］.海洋科學(xué)，2007，31(6):6 -9.

［6］于瑞海，王昭萍，孔令峰，等.不同發(fā)育期的太平洋牡蠣在不同干露狀態(tài)下的成活率研究［J］.中國海洋大學(xué)學(xué)報，2006，36(4):617 -620.

［7］周化斌，張永普，肖國強(qiáng)，等.幾種環(huán)境因子對橄欖蚶成貝存活的影響［J］.溫州大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版，2010，31(2):30 -35.

［8］楊鳳，譚文明，閆喜武，等.干露及淡水浸泡對菲律賓蛤仔稚貝存活和生長的影響［J］.水產(chǎn)科學(xué)，2012，31(3):143 -146.

［9］王令充，張坤，鄭文文，等.四角蛤蜊提取物的降血糖、保肝和免疫活性研究［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2010，26(4):283 -285.

［10］楊林，李琪，閆紅偉，等.山東沿海中國蛤蜊的繁殖生物學(xué)［J］.中國水產(chǎn)科學(xué)，2010，17(3):514 -519.

［11］閆喜武，王琦，霍忠明，等.中國蛤蜊人工育苗技術(shù)的初步研究［J］.大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報，2010，25(1):41 -44.

［12］劉相全，方建光，包振民，等.中國蛤蜊繁殖生物學(xué)的初步研究［J］.中國海洋大學(xué)學(xué)報，2007，37(1):89 -92.

［13］王子臣，劉吉明，沈永忱，等.鴨綠江口中國蛤蜊生物學(xué)初步研究［J］.水產(chǎn)學(xué)報，1984，8(1):33 -44.

［14］閆喜武，王琰，郭文學(xué)，等.四角蛤蜊形態(tài)性狀對重量性狀的影響效果分析［J］.水產(chǎn)學(xué)報，2011，35(10):1513 -1517.

［15］閆喜武，張躍環(huán)，左江鵬，等.北方沿海四角蛤蜊人工育苗技術(shù)的初步研究［J］.大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報，2008，23(5):348 -352.

［16］項福椿.遼寧沿海四角蛤蜊生殖與生長及其開發(fā)養(yǎng)殖技術(shù)的探討［J］.水產(chǎn)科學(xué)，1991，10(4):16 -19.

［17］趙越，王金海，張叢堯，等.培育密度及餌料種類對四角蛤蜊幼蟲生長、存活及變態(tài)的影響［J］.水產(chǎn)科學(xué)，2011，30(3):160-163.

［18］Chung E Y，Kim Y G，Lee T Y.A study on sexual maturation of hen clam Mactra chinensis Philipi［J］.Bulletin of the Korean Fisheries Society，1987，20(6):501 -508.

［19］丁鑒鋒，楊霏，閆喜武，等.不同殼色菲律賓蛤仔免疫機(jī)能的比較研究［J］.大連海洋大學(xué)學(xué)報，2012，27(5):411 -416.

［20］Nakajima K，Okumura H，Takabatake S I.Effect on growth and survival of reared larvae of sunray surf clam，Mactra chinensis Philippi of single and mxed feeds of Pavlova lutheri and Chaetoceros gracilis［J］.Scientific Reports of the Hokkaido Fisheries Experimental Station，1997，50:27 -33.

［21］馬悅欣，王穎，楊鳳，等.應(yīng)用PCR-DGGE 技術(shù)研究四角蛤蜊的細(xì)菌多樣性［J］.大連海洋大學(xué)學(xué)報，2011，26(3):243 -246.

［22］Lee J Y.Study on the oxygen consuption of surf calm Mactra veneriformis Reeve［J］.Journal of the Korean Fisheries Society，1996，29(5):614 -619.

［23］郭文學(xué)，閆喜武，馬貴范，等.兩種蛤蜊(Mactra venefiformis)殼內(nèi)色品系選育初探［J］.海洋與湖沼，2012，43(2):262 -267.

［24］趙文，王雅倩，魏杰，等.體重和鹽度對中國蛤蜊耗氧率和排氨率的影響［J］.生態(tài)學(xué)報，2011，31(7):2040 -2045.

［25］楊鳳，劉丹，于倩，等.環(huán)境因子對毛蚶排遺和泥沙凈化的影響［J］.大連海洋大學(xué)學(xué)報，2012，27(6):523 -527.