李青　董兆稀　趙冰清

摘要目的探討白首烏粗多糖對(duì)小白鼠的抗疲勞及耐缺氧、耐高溫能力的影響。方法從白首烏（耳葉牛皮消）中提取粗多糖，將動(dòng)物隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為對(duì)照組，高、中、低劑量組，連續(xù)給小鼠灌胃8d后，觀察不同劑量對(duì)小鼠負(fù)荷游泳時(shí)間、耐缺氧時(shí)間、耐高溫時(shí)間的影響。結(jié)果白首烏粗多糖能顯著地延長小鼠負(fù)荷游泳時(shí)間、耐缺氧時(shí)間及耐高溫時(shí)間。結(jié)論白首烏粗多糖對(duì)小白鼠抗疲勞及耐缺氧、耐高溫能力具有明顯的作用。

關(guān)鍵詞白首烏；多糖；抗疲勞；耐缺氧；耐高溫

中圖分類號(hào)R2855 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A 文章編號(hào)10002537（2012）05007604

白首烏（CynanchumauriculatumRoyleexWight）系蘿摩科（Asclepiadaceae）馬利筋亞科（Asclepioideae）鵝絨藤屬（Cynanchumlinn）植物，又名耳葉牛皮消、飛來鶴（《植物名實(shí)圖考》）、老牛凍（湖南，四川［1］）．在我國資源豐富，山東、江蘇等地有人工栽培，其塊根藥用，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、益精血、健脾消食、解毒療瘡等功效［12］．白首烏總苷對(duì)預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成有一定的作用［34］．研究表明，白首烏具有養(yǎng)血益肝、固腎益精、烏須黑發(fā)和延年益壽的功效［2，5］．現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)白首烏中含有多種有效成分，具有抗腫瘤、保肝護(hù)肝降血脂等多方面的藥理活性［68］．國外的研究也證實(shí)了這些藥理活性［910］． 1材料和試劑

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種雄性和雌性小鼠各半（120只，體重（20±2）g），湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物飼養(yǎng)基地提供．

1.2實(shí)驗(yàn)試劑與設(shè)備

實(shí)驗(yàn)所用試劑與設(shè)備的名稱、廠商及型號(hào)見表1．

1.3實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理軟件

對(duì)所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用t檢驗(yàn)來分析組間差異的顯著性．

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1多糖的提取分離

2.1.1前處理取白首烏飲片，使用植物粉碎機(jī)將其粉碎，得到白色白首烏粉末．將所得白首烏粉末裝入圓底燒瓶，按料液體積比1∶3加入85%無水乙醇，90℃水浴加熱1h，提取2次，過濾，將所得濾渣風(fēng)干，得到黃色干粉．

2.1.2提取稱取適量上述白首烏黃色干粉，置于圓底燒瓶中，按料水質(zhì)量比1∶20加入蒸餾水，在100℃的熱水浴中冷凝回流浸提2h．冷卻后使用離心機(jī)3000r/min離心10min，將所得上清液合并．將上清液倒入圓底燒瓶，于90℃溫度下使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮．濃縮所得試液加入3倍體積95%乙醇溶液，靜置1h后，使用離心機(jī)3000r/min離心10min，棄去溶液，將沉淀抽濾．抽濾所得沉淀干燥后即得白首烏粗多糖．

2.2藥理實(shí)驗(yàn)

2.2.1動(dòng)物分組120只小白鼠，分為三大組，高劑量組，劑量為150μg/g；中劑量組，劑量為100μg/g；低劑量組，劑量為50μg/g．給藥方式為灌胃給藥．每一大組小白鼠40只，雌雄各半，體重（20±2）g．并將小白鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和3個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組10只，實(shí)驗(yàn)組按劑量用生理鹽水稀釋，白首烏粗多糖按25μL/g量給藥；對(duì)照組按等量生理鹽水灌胃．此4組連續(xù)灌胃8d，于末次灌胃2h后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)．

2.2.2負(fù)荷游泳實(shí)驗(yàn)小白鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)均分4組，每組10只按高劑量組、中劑量組、低劑量組連續(xù)給小鼠灌胃8d，實(shí)驗(yàn)組按劑量用生理鹽水稀釋白首烏粗多糖，以25μL/g灌胃，1次/d；對(duì)照組按等量生理鹽水灌胃．于完成灌胃的小白鼠尾部束一重物（約2g）放入一水深20cm，水溫（30±1）℃的玻璃缸內(nèi)，以小鼠體力耗竭（小鼠頭部沉入水中10s不能浮出水面）為指標(biāo)，記錄小鼠生存時(shí)間．

2.2.3耐缺氧實(shí)驗(yàn)小白鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)均分4組，每組10只按高劑量組、中劑量組、低劑量組連續(xù)給小鼠灌胃8d.實(shí)驗(yàn)組按劑量用生理鹽水稀釋白首烏粗多糖，以25μL/g灌胃，1次/d；對(duì)照組按等量生理鹽水灌胃．將小鼠放入250mL的廣口瓶?jī)?nèi)，每瓶1鼠，瓶?jī)?nèi)裝有10g無水氯化鈣，用凡士林涂抹瓶口，蓋嚴(yán)密封，立即記時(shí)，以呼吸停止（小鼠胸部不起伏）為指標(biāo)，記錄小鼠存活時(shí)間．

2.2.4耐高溫實(shí)驗(yàn)小白鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)均分4組，每組10只按高劑量組、中劑量組、低劑量組連續(xù)給小鼠灌胃8d.實(shí)驗(yàn)組按劑量用生理鹽水稀釋白首烏粗多糖，以25μL/g灌胃，1次/d；對(duì)照組按等量生理鹽水灌胃將小鼠放入50±1℃的恒溫箱中的玻璃缸內(nèi)，以小鼠呼吸停止（小鼠胸部不起伏）為指標(biāo)，記錄小鼠存活時(shí)間．

2.2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用t檢驗(yàn)來分析組間差異的顯著性．P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義．

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1負(fù)荷游泳實(shí)驗(yàn)

將實(shí)驗(yàn)所得高中低劑量組與對(duì)照組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，得出白首烏粗多糖對(duì)小白鼠負(fù)荷游泳能力的影響結(jié)果，見表2．

4結(jié)果與討論

白首烏多糖對(duì)小白鼠的實(shí)驗(yàn)研究表明：白首烏多糖能明顯提高小白鼠耐力，延長耐缺氧、負(fù)荷游泳和耐高溫時(shí)間，且中劑量組、高劑量組與對(duì)照組比較有顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01），其作用與劑量大小有關(guān).高、中、低3個(gè)劑量組中，存在劑量效應(yīng)關(guān)系，以高劑量組效果最為明顯．結(jié)果表明，白首烏粗多糖具有抗疲勞、耐缺氧等作用，顯示其對(duì)延長小白鼠的壽命有著積極意義．今后的研究中，如果能進(jìn)行增強(qiáng)小白鼠記憶能力等指標(biāo)的藥理實(shí)驗(yàn)研究，在白首烏多糖抗衰老作用研究中必將有新的發(fā)現(xiàn)．

參考文獻(xiàn)：

［1］趙冰清，張為，周源，等.瑤藥白首烏的研究進(jìn)程［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥雜志，2006，17（12）：68826886．

［2］徐凌川，梁傳東.白首烏糖類的提取及含量測(cè)定［J］.山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，27（3）：215216．

［3］FRIEDWALDWT．Estimationofconantrationoflowdensitylipoproteincholesterolinplasmawithoutuseofthereparativeultracentrifuge［J］．ChinChen，1992，18（3）：499．

［4］饒穎竹，陳蓉，莫錦堅(jiān)，等.仙人掌對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性高血脂癥的降脂作用［J］．中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2004，19（7）：523525．

［5］宋俊梅.C21甾甙在白首烏保健功能中的地位［J］.食品科學(xué)，2002，23（7）：100103．

［6］尹家樂，李心.白首烏C21甾體酯苷對(duì)小鼠急性四氯化碳肝損傷的保護(hù)作用［J］.安徽醫(yī)藥，2007，11（3）：198199．

［7］楊小紅，袁江，周遠(yuǎn)明，等.白首烏粗多糖對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用研究［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥雜志，2009，20（11）：27042705．

［8］楊小紅，周遠(yuǎn)明，張瑜，等.白首烏粗多糖降血脂作用研究［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥雜志，2010，21（6）：13811382．

［9］LEEMK，YEOH，KIMJ，etal.ProtectionofrathepatocytesexposedtocchinvitrobyCynandioneA，abiacetophenonefromCynanchumwirdii［J］.JPharmPharmacol，2000，52（3）：341343．

［10］SPRINGERRF，WURZELHA，MCNEALGM，etal.Isolationofanticoagulantfractionsfromcrudefucoidan［J］.ProcSocExpBiolMed，1957，94：404409．