劉慧清，王國凱，林彬彬，黃 珺，秦民堅

(中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院中藥資源學(xué)教研室教育部現(xiàn)代中藥研究重點實驗室，江蘇南京211198)

荔枝草(Salvia plebeia R.Br.)為唇形科(Lamiaceae)鼠尾草屬(Salvia Linn.)植物，別名為蛤蟆草、雪見草和癩蛤蟆草等，其味苦、辛，性涼，具有清熱解毒、利尿消腫和涼血止血的作用。作為中藥始載于《本草綱目》，曾收載于《中華人民共和國藥典》(1977年版)。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果表明［1－8］:荔枝草具有保肝、止咳、平喘、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、止血、抗炎和抗氧化等多種作用。目前從荔枝草全草中已分離得到黃酮類、木脂素［9－10］、二萜類［11］、三萜類［12］以及甾醇和揮發(fā)油類［13］等多類化學(xué)成分。荔枝草分布區(qū)域極為廣泛，除青海、新疆和西藏外，中國各省區(qū)均有分布。

為了充分利用這一豐富的藥用植物資源，并尋找與其藥效及生物活性相吻合的有效成分，作者對荔枝草全草乙醇提取物中所包含的化學(xué)成分進行了系統(tǒng)研究。

1 材料和方法

1.1 材料

供試的荔枝草全草購自安徽省亳州藥材市場，經(jīng)中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院秦民堅教授鑒定為唇形科鼠尾草屬荔枝草的干燥全草，憑證標(biāo)本號SP20110729，保存于中國藥科大學(xué)中藥資源學(xué)教研室。

主要儀器:Bruker ACF－300和500核磁共振儀(德國Bruker公司)、X－4型顯微熔點測定儀(上海精密科學(xué)儀器有限公司);Sephadex LH－20(50 μm)和RP C18色譜柱均為美國Pharmacia公司生產(chǎn)，MCI gel(CHP 20P，75 ～150 μm)為日本三菱公司生產(chǎn)，薄層和柱層析硅膠(100～200目和200～300目)為青島海洋化工廠生產(chǎn)，實驗所用其他試劑均為分析純(江蘇漢邦科技有限公司生產(chǎn))。

1.2 方法

取荔枝草全草10 kg，用體積分數(shù)95%乙醇以固液比(W/V)1∶10進行滲漉提取，回收乙醇，使用回收的乙醇加熱回流提取2次，合并提取液，減壓回收乙醇后得到浸膏530 g。將浸膏上100目硅膠柱，用三氯甲烷和甲醇混合液〔V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=100∶0 ～0∶100〕進行梯度洗脫，得到不同極性的洗脫流分F1～F14。然后反復(fù)用硅膠柱色譜法、Sephadex LH－20柱色譜法、MCI gel柱色譜法、RP C18柱色譜法及重結(jié)晶法等方法得到單體化合物。

從F5流分得到化合物Ⅰ(20 mg)、化合物Ⅱ(15 mg)和化合物Ⅵ(90 mg);從F6流分得到化合物Ⅷ(4.9 mg)和化合物Ⅻ(8.3 mg);從F8流分得到化合物Ⅲ(約142 mg)、化合物Ⅳ(40 mg)和化合物Ⅺ(約68 mg);從F9流分得到化合物Ⅴ(5.5 mg)、化合物Ⅶ(13 mg)和化合物ⅩⅢ(3 mg);從F12流分得到化合物Ⅸ(3.4 g);從F13流分得到化合物Ⅹ(900 mg)。

采用理化方法、薄層層析法以及NMR等波譜分析方法鑒定化合物Ⅰ～ⅩⅢ的結(jié)構(gòu)。

2 結(jié) 果

化合物Ⅰ:無色針狀結(jié)晶(石油醚－乙酸乙酯)，mp:142℃ ～144℃。與β－谷甾醇對照品共同薄層層析并用多種溶劑系統(tǒng)展開，Rf值一致且顯色斑點相同，混合熔點不下降，故確定該化合物為β－谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物Ⅱ:白色固體(三氯甲烷)，mp:174℃ ～176℃。1H－NMR(300 MHz，CDCl3)δ:6.58(4H，s，H－2，6，2'，6')，5.53(2H，s，4，4'－OH)，4.73(2H，d，J=4.1 Hz，H－7，7')，4.28(2H，dd，J=6.7，9.1 Hz，H－9e，9'e)，3.91(2H，m，H－9a，9'a)，3.89(12H，s，OMe－3，3'，5，5')，3.10(2H，m，H－8，8')。以上數(shù)據(jù)與文獻［14］報道的丁香脂素一致，故確定該化合物為丁香脂素(syringaresinol)。

化合物Ⅲ:淡黃色針狀結(jié)晶(三氯甲烷－甲醇)，mp:284 ℃ ～285 ℃。1H－NMR(500 MHz，DMSO－d6)δ:13.08(1H，s，5－OH)，7.92(2H，d，J=9.0 Hz，H－2'，6')，6.92(2H，d，J=9.0 Hz，H－3'，5')，6.79(1H，s，H－8)，6.60(1H，s，H－3)，3.75(3H，s，OMe－6)，10.70(OH－7)，10.36(OH－4')。以上數(shù)據(jù)與文獻［12］報道的粗毛豚草素基本一致，故確定該化合物為粗毛豚草素(hispidulin)。

化合物Ⅳ:黃色粒狀結(jié)晶(三氯甲烷－甲醇)，mp:255℃ ～257 ℃。1H－NMR(500 MHz，DMSO－d6)δ:13.07(1H，s，OH－5)，7.92(2H，d，J=5.3 Hz，H－2'，6')，6.92(1H，d，J=5.3 Hz，H－5')，6.77(1H，s，H－8)，6.59(1H，s，H－3)，3.76(3H，s，OMe－6)。以上數(shù)據(jù)與文獻［15］報道的澤蘭黃酮基本一致，故確定該化合物為澤蘭黃酮(nepetin)。

化合物Ⅴ:深紅色粉末(丙酮)。1H－NMR(500 MHz，acetone－d6)δ:6.72(1H，d，J=2.4 Hz，H－2)，7.37(1H，d，J=2.4 Hz，H－4)，7.26(1H，s，H－5)，2.38(3H，s，CH3－3)。以上數(shù)據(jù)與文獻［16］報道的7－羥基大黃素基本一致，故確定該化合物為7－羥基大黃素(7-hydroxy emodin)。

化合物Ⅵ:白色粉末(三氯甲烷－甲醇)，mp:277℃ ～278 ℃。1H－NMR(500 MHz，C5D5N)δ:5.50(1H，m，H－12)，3.21(1H，dd，J=5.8，5.4 Hz，H－3)，2.19(1H，d，J=11.1 Hz，H－18)，1.26，1.08，0.98，0.86，0.78(5×3H，s，Me－23，24，25，26，27)，0.94(6H，d，J=6.5 Hz，Me－29，30)。以上數(shù)據(jù)與文獻［17］報道的熊果酸基本一致，故確定該化合物為熊果酸(ursolic acid)。

化合物Ⅶ:黃色粉末(三氯甲烷－甲醇)，mp:328℃ ～330 ℃。1H－NMR(300 MHz，DMSO－d6)δ:12.95(1H，s，OH－5)，10.02(3H，brs，H－3'，H－4'，H－7)，7.41(1H，t，J=2.2，8.0 Hz，H－6')，7.39(1H，s，H－2')，6.89(1H，d，J=8.0 Hz，H－5')，6.66(1H，s，H－3)，6.44(1H，d，J=2.0 Hz，H－8)，6.19(1H，d，J=2.0 Hz，H－6)。以上數(shù)據(jù)與文獻［18］報道的木犀草素基本一致，故確定該化合物為木犀草素(luteolin)。

化合物Ⅷ:白色粉末(三氯甲烷－甲醇)，1H－NMR(500 MHz，C5D5N)δ:5.50(1H，s，H－12)，4.29(1H，m，H－2)，3.75(1H，d，J=2.1 Hz，H－3)，2.61(1H，d，J=11.4 Hz，H－18)，1.27(3H，s，H－23)，1.19(3H，s，H－24)，1.12(3H，s，H－26)，1.05(3H，s，H－27)，0.97(3H，d，J=5.1 Hz，H－29)，0.94(3H，s，H－25)，0.90(3H，d，J=5.1 Hz，H－30)。根據(jù)文獻［12］確定該化合物為 2α，3β－二羥基－12－烯－28－烏蘇酸(2α，3βdihydroxy-12-en-28-ursonic acid)。

化合物Ⅸ:黃色粉末(甲醇)，mp:241℃ ～242℃。1HNMR(500 MHz，DMSO－d6)δ:12.95(1H，s，5－OH)，10.37(1H，s，OH－4')，7.92(2H，d，J=8.8 Hz，H－2'，H－6')，7.01(1H，s，H－8)，6.94(2H，d，J=8.8 Hz，H－3'，H－5')，6.85(1H，s，H－3)，5.05(1H，d，J=4.4 Hz，H－1″)，3.77(3H，s，OMe－6)，3.17 ～3.75(5H，m，H－2″～6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻［12］報道的高車前苷基本一致，故確定該化合物為高車前苷(homoplantaginin)。

化合物Ⅹ:黃白色粉末(甲醇)。1H－NMR(500 MHz，DMSO－d6)δ:12.97(1H，s，5－OH)，9.93(2H，s，3'，4'－OH)，7.43(2H，m，H－2'，6')，6.97(1H，s，H－8)，6.91(1H，m，H－5')，6.73(1H，s，H－3)，5.14(1H，d，J=3.8 Hz，H－1″)，3.77(3H，s，OMe－6)，3.17 ～ 3.74(5H，m，H－2″～ 6″)。根據(jù)文獻［15］確定該化合物為假荊芥屬苷(nepitrin)。

化合物Ⅺ:白色結(jié)晶(三氯甲烷－甲醇)。1H－NMR(500 MHz，C5D5N)δ:0.81，1.02，1.03，1.09，1.25，1.30，1.67(each 3H，s，H－23，24，25，26，27，28，30)，4.84(1H，d，J=2.3 Hz，H－29b)，4.59(1H，d，J=1.0 Hz，H－29a)，4.12(1H，m，H－1)，3.97(1H，m，H－11)，3.57(1H，m，H－3)，8.69(2H，s，1，11－OH)，8.48(1H，s，3－OH)。13C－NMR(125 MHz，C5D5N)δ:66.9(C－1)，36.6(C－2)，75.5(C－3)，40.4(C－4)，58.6(C－5)，19.2(C－6)，36.2(C－7)，43.1(C－8)，53.9(C－9)，46.7(C－10)，76.9(C－11)，35.5(C－12)，36.7(C－13)，43.4(C－14)，30.6(C－15)，38.4(C－16)，43.6(C－17)，49.1(C－18)，48.6(C－19)，151.0(C－20)，28.4(C－21)，40.5(C－22)，29.1(C－23)，14.8(C－24)，16.1(C－25)，18.2(C－26)，14.7(C－27)，18.7(C－28)，110.7(C－29)，19.8(C－30)。根據(jù)文獻［19］確定該化合物為nepetidin。

化合物Ⅻ:白色粉末(三氯甲烷)。1H－NMR(500 MHz，C5D5N)δ:0.87(3H，m，－Me)，1.25(34H，m，17×－CH2)，1.56(4H，m，－CH2－CH2)，3.63(2H，t，J=6.6 Hz，－CH2－OH)。根據(jù)文獻［20］確定該化合物為正二十一烷醇(n-heneicosanol)。

化合物ⅩⅢ:黃白色粉末(三氯甲烷－甲醇)，mp:345℃ ～350 ℃。1H－NMR(500 MHz，C5D5N)δ:7.93(1H，d，J=1.9 Hz，H－2')，7.92(1H，d，J=1.9 Hz，H－6')，7.23(2H，d，J=1.9 Hz，H－3'，H－5')，6.91(1H，s，H－3)，6.82(1H，d，J=2.0 Hz，H－8)，6.75(1H，d，J=2.0 Hz，H－6)，13.76(1H，s，5－OH)，13.06(1H，brs，7－OH)，12.56(1H，brs，4'－OH)。以上數(shù)據(jù)與文獻［21］報道的芹菜素基本一致，故鑒定該化合物為芹菜素(apigenin)。

上述實驗結(jié)果表明:從荔枝草全草的乙醇提取物中共分離得到13個化合物，分別為β－谷甾醇(Ⅰ)、丁香脂素(Ⅱ)、粗毛豚草素(Ⅲ)、澤蘭黃酮(Ⅳ)、7－羥基大黃素(Ⅴ)、熊果酸(Ⅵ)、木犀草素(Ⅶ)、2α，3β－二羥基－12－烯－28－烏蘇酸(Ⅷ)、高車前苷(Ⅸ)、假荊芥屬苷(Ⅹ)、nepetidin(Ⅺ)、正二十一烷醇(Ⅻ)和芹菜素(す)，其中化合物Ⅺ為首次從鼠尾草屬植物中分離獲得，化合物Ⅱ、Ⅴ、Ⅺ、Ⅻ和ⅩⅢ為首次從荔枝草中分離獲得。在13個化合物中有6個黃酮類化合物，其中粗毛豚草素、澤蘭黃酮、高車前苷和假荊芥屬苷含量較高。本研究結(jié)果為尋找與荔枝草生物活性相吻合的有效成分奠定了一定的實驗基礎(chǔ)，對于更全面開發(fā)荔枝草這一藥用植物資源具有重要的理論和實踐意義。

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