袁 振 蔣雷鳴 王 松 (桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科，廣西 桂林 541001)

腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移受多種因素影響，有研究〔1〕發(fā)現(xiàn)多種腫瘤細胞可表達趨化因子受體(CCR)7，而其配體CCL19/CCL21則高表達于癌細胞轉(zhuǎn)移相關(guān)部位，且他們與多種腫瘤的遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。血管內(nèi)皮生長因子C(VEGF-C)被認為是特異性很強的新生淋巴管刺激因子，在腫瘤微環(huán)境中，腫瘤細胞、基質(zhì)成纖維細胞可分泌VEGF-C，其通過激活受體促進內(nèi)皮細胞增生，亦可增強淋巴管的通透性，有利于逃逸的腫瘤細胞通過淋巴管道發(fā)生轉(zhuǎn)移〔2〕。但CCR7和VEGF-C在前列腺腫瘤中的研究甚少，兩者在前列腺腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移中是否具有協(xié)同作用也罕見報道，本實驗采用快捷免疫組化方法檢測前列腺癌組織中CCR7和VEGF-C蛋白的表達情況，探討其與前列腺癌臨床病理因素和淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 標(biāo)本取自桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2007～2009年手術(shù)切除并經(jīng)病理檢查確診且術(shù)前未經(jīng)任何抗癌和激素內(nèi)分泌治療的前列腺癌組織蠟塊45例，年齡56～85歲，平均72歲。按修訂的Gleason評分系統(tǒng)(2004年)進行病理分期:2～4分為高分化癌，10例;5～7分為中分化癌，16例;8～10分為低分化癌，19例。按TNM分期(2002年)標(biāo)準(zhǔn)進行臨床分期:T1～T225例，T3～T420例;經(jīng)臨床客觀檢查、影像檢查及手術(shù)資料判斷其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移15例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例。對照組15例石蠟標(biāo)本均取自前列腺電切術(shù)且經(jīng)病理證實為良性前列腺增生。

1.2 主要試劑及方法 兔抗人CCR7多克隆抗體是加拿大PLLABS公司產(chǎn)品(購自深圳華拓生物技術(shù)公司 PL031305R，rabbit IgG)。兔抗人VEGF-C多克隆抗體(ZA-0266)購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。DAB顯色劑購于福州邁新生物技術(shù)有限公司。嚴(yán)格按照二步快捷免疫組化法試劑盒使用說明書進行操作，行CCR7和VEGF-C免疫組化染色，DAB顯色。以PBS代替一抗行陰性染色，用已知陽性切片做陽性對照。

1.3 結(jié)果判定 根據(jù)染色的深度及陽性細胞的數(shù)量分別記分，無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細胞數(shù)＜5%為0分，5% ～25%為1分，26% ～50%為2分，51% ～75%為3分，＞75%為4分。二項結(jié)果相加，＜2分陰性，2～3分弱陽性，4～5分中等陽性，6～7分強陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行 χ2檢驗;CCR7和VEGF-C相關(guān)性采用Spearman秩相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 CCR7和VEGF-C在不同前列腺組織中的表達 CCR7和VEGF-C蛋白在前列腺癌組織中陽性表達率分別為64.45%和68.89%，CCR7和 VEGF-C蛋白主要定位于細胞膜與胞質(zhì)。CCR7和VEGF-C蛋白在良性前列腺增生組織中表達率分別為13.33%、26.67%，癌組織與正常組織比較差異顯著(P＜0.01)。在高、中組和低分化組中CCR7和VEGF-C蛋白陽性表達率分別為50.00%和84.21%，53.85%和89.47%，組間比較差異顯著(P＜0.05);在不同TNM分期中，T1～T2組的CCR7和VEGF-C蛋白陽性表達率分別為44.00%和52.00%，明顯低于T3～T4組的90.00%和90.00%，差異顯著(P＜0.01);轉(zhuǎn)移組的CCR7和VEGF-C蛋白陽性表達率分別為93.33%和100%，明顯高于無轉(zhuǎn)移組50.00%和53.33%，同樣差異顯著(P ＜0.01)。

2.2 CCR7和VEGF-C在前列腺癌中表達的相關(guān)性 CCR7和VEGF-C蛋白在前列腺癌中同時表達陽性57.78%，同時陰性24.45%，二者正相關(guān)(rs=0.616，P ＜0.01)。

3 討論

CCR7/CCL21主要與腫瘤向淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移相關(guān)，而CXCR4/CXCL12則主要與腫瘤向肺、肝臟、骨髓和腦等遠端器官轉(zhuǎn)移相關(guān)〔3，4〕。更多研究進一步證實〔5，6〕，多種腫瘤細胞均可表達趨化因子受體CCR7，且CCR7陽性的腫瘤細胞優(yōu)先轉(zhuǎn)移至其配體CCL21和/或CCL19富集的淋巴結(jié)內(nèi)從而促進腫瘤的轉(zhuǎn)移。近年來，關(guān)于黑色素瘤、頭頸部腫瘤、乳腺癌及胃癌的研究，都表明了CCR7在促進腫瘤特異性地向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中的重要作用。在小鼠移植瘤實驗中發(fā)現(xiàn)，鼠黑色素瘤高表達CCR7，且能明顯提高其向區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的速度和效率，而且通過其單克隆抗體可阻斷CCL21的作用，能阻止淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生，這表明CCL21/CCR7的確可介導(dǎo)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移〔7，8〕。本研究說明CCR7在前列腺癌淋巴轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用;同時CCR7表達還與腫瘤病理分化程度及臨床分期密切相關(guān)，且隨腫瘤惡性程度增加CCR7表達有逐漸增強趨勢。

新的淋巴管生成是腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移的始動因素〔9〕。淋巴管生長因子VEGF-C作為VEGF家族成員之一，是促進淋巴道新生的關(guān)鍵因子。在成人，VEGF-C通過結(jié)合并激活淋巴內(nèi)皮細胞表面的受體VEGFR-3，能促進淋巴內(nèi)皮細胞的增殖、存活與遷移〔10〕。在動物模型中發(fā)現(xiàn)，VEGF-C的過表達可誘導(dǎo)腫瘤新生淋巴管生成，促進淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。VEGF-C通過旁分泌的形式結(jié)合表達于微淋巴管內(nèi)皮的特異性受體VEGFR-3，導(dǎo)致受體酪氨酸磷酸化，誘導(dǎo)微淋巴管的生成并影響淋巴管內(nèi)皮的通透性，從而促進腫瘤轉(zhuǎn)移〔11〕。還有文獻報道VEGF-C還可以促進腫瘤新生血管的形成，腫瘤血管生成促使腫瘤的體積增加，腫瘤邊緣部位的腫瘤細胞易通過靜脈-淋巴管吻合處從血循環(huán)中進入淋巴管，并且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的概率隨血循環(huán)中腫瘤細胞的增加而增高，因此腫瘤血管生成對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有間接的促進作用〔12〕。Valtola等〔13〕對乳腺癌的研究結(jié)果也證實，VEGF-C 陽性表達者的淋巴轉(zhuǎn)移率和死亡率均高于陰性表達者。本研究說明VEGF-C在前列腺癌淋巴轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用;VEGF-C表達還與腫瘤病理分化程度及臨床分期密切相關(guān)，且隨腫瘤的發(fā)生、發(fā)展VEGF-C表達有逐漸增強之勢;VEGF-C在取自尸檢的4例正常前列腺組織均也呈陰性表達?？傊?，VEGF-C在前列腺癌的發(fā)生、進展和轉(zhuǎn)移中起著重要作用，因此檢測其表達對腫瘤進展程度、有無淋巴轉(zhuǎn)移有一定臨床意義。

CCR7和VEGF-C在前列腺癌的疾病進程中有一定協(xié)同作用，Cassella等〔14〕研究認為，VEGF-C激活的淋巴管可促進淋巴管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生更多的趨化因子CCL21，這樣更方便CCR7表達陽性的腫瘤細胞進入淋巴管內(nèi)。本研究提示在前列腺癌的疾病進程中CCR7與VEGF-C的表達正相關(guān)，兩者之間具有某種協(xié)同促進作用，但具體機制還不十分清楚。有研究認為〔15〕靶器官趨化因子及腫瘤細胞中受體的表達在決定腫瘤細胞轉(zhuǎn)移部位上起著關(guān)鍵作用。腫瘤細胞可能發(fā)生了基因突變或翻譯異常致表達CCR7，并通過趨化因子調(diào)節(jié)淋巴細胞歸巢的機制而形成轉(zhuǎn)移。腫瘤組織中VEGF-C表達增高，促進淋巴管生成和通透性增強，淋巴內(nèi)皮表達的趨化因子也相應(yīng)增多。CCR7陽性的腫瘤細胞受到來自淋巴管內(nèi)皮和淋巴結(jié)中趨化因子的吸引，最終侵入淋巴管而發(fā)生轉(zhuǎn)移。

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