劉連連 孔 敏 王 虹 馬曉艷 (吉林大學(xué)第二醫(yī)院婦產(chǎn)科，吉林 長春 3004)

卵巢癌是女性生殖器常見的三大惡性腫瘤之一，由于缺乏早期診斷方法及有效的治療手段，其死亡率最高〔1〕。轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)/Smads信號(hào)傳導(dǎo)通路主要是由 TGF-β1配體及其受體、胞內(nèi)信號(hào)分子Smads蛋白以及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的靶基因構(gòu)成的一條腫瘤抑制通路。Smads蛋白是TGF-β信號(hào)通路關(guān)鍵的信號(hào)傳導(dǎo)分子，存在于細(xì)胞質(zhì)中，可將信號(hào)從胞膜直接轉(zhuǎn)至胞核〔2〕。Smad4在 TGF-β/Smads信號(hào)傳導(dǎo)通路中處于中樞地位〔3〕，其蛋白表達(dá)缺失或水平下降可能是一些腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、生物學(xué)行為及預(yù)后不良的重要因素。目前罕見有關(guān)卵巢腫瘤患者血清Smad4水平的相關(guān)研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)擬探討血清Smad4水平作為卵巢癌生物學(xué)標(biāo)志物的可能性，并為卵巢癌的診斷、監(jiān)測(cè)及預(yù)后提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 隨機(jī)選取2010年1月至2011年1月在吉大二院婦科住院診斷為“卵巢腫瘤”患者的術(shù)前血清。患者術(shù)前均未行放療或化療并經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)，卵巢癌38例，年齡34～82〔平均(56.2±20.2)〕歲;組織學(xué)分級(jí)分類按WHO分類法，高、中分化16例，中-低、低分化22例;漿液性癌22例，黏液性癌7例，其他類型癌9例;腹水量≥500 ml者16例。卵巢交界性腫瘤9例，卵巢良性上皮性腫瘤14例，卵巢性索間質(zhì)腫瘤8例，因子宮內(nèi)膜息肉、宮頸原位癌原因手術(shù)切除的正常卵巢8例。患者于入院當(dāng)日采集外周靜脈血2 ml，分離血清待檢。

1.2 檢測(cè)方法 ELISA試劑盒購自美國GBD公司，操作步驟嚴(yán)格按照Smad4 ELISA試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，t′檢驗(yàn)及方差分析。

2 結(jié)果

2.1 各組卵巢病變患者術(shù)前血清Smad4水平 卵巢癌38例，Smad水平(11.10±4.12);卵巢交界性腫瘤9例，Smad水平(12.35±6.35);卵巢良性上皮性腫瘤 14例，Smad水平(9.84±2.79);卵巢性索間質(zhì)腫瘤8例，Smad水平(10.25±4.8)(P＜0.05)，四組差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但均明顯高于正常對(duì)照組水平(5.19±2.02)。

2.2 卵巢癌患者術(shù)前血清Smad4水平與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

卵巢癌患者術(shù)前血清Smad4水平與組織學(xué)分級(jí)、組織學(xué)分類、腹水量有關(guān)(P＜0.05)，即高、中分化卵巢癌(16例，9.20±4.53)低于中-低、低分化者(22例，12.48±3.24);黏液性癌(7例，10.86±2.26)低于其他類型卵巢癌(9例，13.26±2.14);腹水量≥500 ml者(16例，9.28±3.77)低于腹水量＜500 ml(22例，12.4±3.94)，而與患者年齡 ＜50歲(13例，11.71±4.9)、≥50歲(25例，10.78±3.95)，腫塊大小 ＜10 cm(18例，10.99±4.43)，≥10 cm(20例，11.19±3.94)，臨床分期Ⅰ ～Ⅱ期(6例，12.47±5.14)、Ⅲ ～Ⅳ期(32例，10.84±3.95)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(無:8例，10.24±4.75，有:7例，11.82±1.98)無關(guān)(P＞0.05)。

3 討論

Smad4是TGF-β/Smads信號(hào)傳導(dǎo)通路中將細(xì)胞外的信號(hào)傳導(dǎo)至細(xì)胞質(zhì)內(nèi)并激活轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的關(guān)鍵元件〔2〕，在腫瘤的發(fā)生過程中起重要作用。它在所有的成人組織中廣泛表達(dá)。Dunfield等〔4〕研究顯示在人類卵巢癌細(xì)胞中TGF-β/Smads信號(hào)通路仍然有功能，如果細(xì)胞內(nèi)存在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)異常，可能是位于Smads蛋白的下游。劉景波等〔5〕采用Western、RT-PCR及流式細(xì)胞術(shù)對(duì)前列腺增生患者組織中的Smad4蛋白和mRNA進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果提示Smad4雖是腫瘤抑制因子，但同時(shí)也具有促進(jìn)生長的作用。以往研究表明TGF-β/Smads信號(hào)傳導(dǎo)通路與炎癥密切相關(guān)。Fiocchi〔6〕研究發(fā)現(xiàn)慢性炎性腸病的發(fā)生與TGF-β/Smads傳導(dǎo)通路存在缺陷有關(guān)。

本研究推測(cè)可能是卵巢腫瘤組織能產(chǎn)生多量的Smad4而導(dǎo)致其血清水平增高，這一結(jié)果也提示了血清Smad4水平可作為診斷卵巢腫瘤的生物學(xué)指標(biāo)之一。

年齡大、腫塊直徑大、中-低分化、漿液性癌、臨床分期晚、腹水量多、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是評(píng)估卵巢癌不良預(yù)后的臨床病理指標(biāo)。本研究結(jié)果是否與中-低、低分化卵巢癌組織中不完整的新生血管數(shù)量增多，Smad4進(jìn)入血循環(huán)的量增加有關(guān)尚待進(jìn)一步研究。Baldus等〔7〕發(fā)現(xiàn)有Smad4染色體缺失的宮頸癌臨床預(yù)后較差;結(jié)直腸癌、乳腺癌、肺癌和胃癌等〔8〕一些腫瘤也可見Smad4的失活或缺失;Ji等〔9〕的研究顯示原發(fā)性卵巢黏液性癌和來自其他部位的轉(zhuǎn)移性卵巢黏液腺癌有Smad4蛋白表達(dá)缺失，這可能影響了血清中Smad4的水平。本研究推測(cè)結(jié)果可能與下列因素有關(guān):有研究表明癌性腹水中一些炎性介質(zhì)或生物因子，如血管內(nèi)波生長因子(VEGF)水平高于其血清水平〔10〕，而VEGF可以使毛細(xì)血管生成并使毛細(xì)血管的通透性增加及功能性損害淋巴回流而促進(jìn)腹水形成〔11〕，Smad4也屬于炎性介質(zhì)或生物因子，推測(cè)其可能與VEGF等炎性介質(zhì)在新生血管及腹水形成等方面有協(xié)同作用。因此，大量腹水中高水平的Smad4可能影響其在血清中的水平。但是，以上推論尚需同時(shí)進(jìn)行腹水和血清Smad4的水平測(cè)定加以證實(shí)。

綜上所述，卵巢腫瘤患者血清中Smad4水平升高有可能作為診斷卵巢上皮性腫瘤和卵巢性索間質(zhì)腫瘤的生物學(xué)指標(biāo)，也有可能成為判定卵巢癌預(yù)后不良的指標(biāo)。

1 樂 杰.婦產(chǎn)科學(xué)〔M〕.北京:人民衛(wèi)生出版社，2008:278.

2 Savage C，Das P，F(xiàn)inelli AL，et al.Caenorhabditis elegans genes sma-2，sma-3，and sma-4 define a conserved family of transforming growth factor beta pathway components〔J〕.Proc Natl Acad Sci USA，1996;93(2):790-4.

3 Miyazono K.TGF-beta/SMAD signaling and its involvement in tumor progression〔J〕.Biol Pharm Bull，2000;23(10):1125-30.

4 Dunfield LD，Dwyer EJ，Nachtigal MW.TGF beta-induced Smad signaling remains intact in primary human ovarian cancer cells〔J〕.Endocrinology，2002;143(4):1174-81.

5 劉景波，孔垂?jié)?，朱育焱，?Sma和Mad 4型同源體在前列腺增生中的表達(dá)及對(duì)前列腺細(xì)胞增殖和凋亡的影響〔J〕.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2005;22(5):629.

6 Fiocchi C.TGF-β/Smad signaling defects in inflammatory bowel disease:mechanisms and possible novel therapies for chronic inflammation〔J〕.J Clin Invest，2001;108(4):523-6.

7 Baldus SE，Schwarz E，Lohrey C，et al.Smad4 deficiency in cervical carcinoma cells〔J〕.Oncogene，2005;24(5):810-9.

8 Kim SK，F(xiàn)an Y，Papadimitrakopoulou V，et al.DPC4，a candidate tumor suppressor gene，is altered infrequently in head and neck squamous cell carcinoma〔J〕.Cancer Res，1996;56(11):2519-21.

9 Ji H，Isacson C，Seidman JD，et al.Cytokeratins 7 and 20，Dpc4，and MUC5AC in the distinction of metastatic mucinous carcinomas in the ovary from primary ovarian mucinous tumors:Dpc4 assists in identifying metastatic pancreatic carcinomas〔J〕.Int J Gynecol Pathol，2002;21:391-400.

10 李海霞，馬曉燕，劉 超，等.卵巢癌患者血清、腹水上清中VEGF表達(dá)及在卵巢癌診斷中的意義〔J〕.中國婦幼保健，2008;23(19):2709-11.

11 孫曉敏，董衛(wèi)國.惡性腹水的研究進(jìn)展〔J〕.國外醫(yī)學(xué)·消化系疾病分冊(cè)，2003;23(6):375-7.