?

雞大腸桿菌病病原的分離鑒定

于鵬杰 （山東省諸城市畜牧局 262200）

無菌采取某雞場(chǎng)送檢的疑似大腸桿菌病的病死雞的心血、肝、脾、腎，進(jìn)行病原菌的分離、鑒定、生化試驗(yàn)，動(dòng)物試驗(yàn)和藥敏試驗(yàn)。結(jié)果顯示引起該雞場(chǎng)雞只發(fā)病的病原為大腸桿菌，并且該菌對(duì)小白鼠和雞有較強(qiáng)的致病力，對(duì)阿米卡星、鏈霉素、慶大霉素、氟苯尼考敏感，對(duì)環(huán)丙沙星、痢特靈中度敏感；諾氟沙星不敏感；新諾明、紅霉素、青霉素、氨芐西林、頭孢唑啉鈉則對(duì)其沒有抑菌作用。表明該雞場(chǎng)出現(xiàn)了耐藥的致病性大腸桿菌。

大腸桿菌 分離鑒定 致病性 藥敏試驗(yàn)

大腸桿菌病是由大腸桿菌某些血清型菌株引起的一類疾病的總稱。各個(gè)品種和日齡的雞均可發(fā)病，但肉仔雞最易感。該病一年四季均可發(fā)生，尤以冬季及夏季多發(fā)。在臨床上可表現(xiàn)為敗血癥、氣囊炎、肝周炎、心包炎、臍炎、關(guān)節(jié)炎、腦炎等，發(fā)病率高，死亡率高，且因與其他呼吸道疾病如慢性呼吸道病混合或并發(fā)感染而使死亡率升高。隨著養(yǎng)禽業(yè)的迅速發(fā)展與高度集約化飼養(yǎng)，雞大腸桿菌病已成為雞群重要的疾病之一。為了控制雞大腸桿菌在雞群中的傳播，筆者對(duì)送檢的疑似大腸桿菌病例進(jìn)行病原的分離鑒定，并對(duì)分離菌的培養(yǎng)特性、致病力及抗菌藥物的敏感性進(jìn)行了研究，為有效防制雞大腸桿菌病提供了依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病料來源 2010年10月諸城市市某雞場(chǎng)送檢的疑似大腸桿菌病的病、死雞若干只，已死亡雞只死亡時(shí)間不超過12h。

1.2 細(xì)菌分離培養(yǎng) 無菌采集病、死雞的肝臟、心血等組織，接種在普通瓊脂平板及普通肉湯，37 ℃培養(yǎng)20 h，抹片，革蘭氏染色后鏡檢。挑取表面光滑，邊緣整齊，灰白色半透明的單個(gè)小菌落劃線接種于麥康凱瓊脂平板，于37 ℃培養(yǎng)20 h[1]。

1.3 細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察 取在麥康凱瓊脂平板上培養(yǎng)20h的新鮮菌落，抹片進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。

1.4 生化試驗(yàn) 糖發(fā)酵及生化反應(yīng)按常規(guī)進(jìn)行[2]。

1.5 致病力測(cè)定 （1）菌液制備：將分離菌接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯，于37 ℃培養(yǎng)20 h，4 ℃保存?zhèn)溆?。?）動(dòng)物試驗(yàn)：將購(gòu)買的實(shí)驗(yàn)小鼠10只，隨機(jī)分為A1、B1兩組，每組5只。A1組為試驗(yàn)組，B1組為對(duì)照組。A1組腹腔接種營(yíng)養(yǎng)肉湯菌液，0.2ml/只；B1組腹腔接種相同劑量的滅菌生理鹽水，隔離飼養(yǎng)[3]。從市場(chǎng)購(gòu)10日齡羅曼蛋雞10只，飼養(yǎng)1周，臨床健康。隨機(jī)分為A2、B2兩組，每組5只。A2組雛雞頸部皮下接種0.2ml營(yíng)養(yǎng)肉湯菌液；B2組腹腔接種相同劑量的滅菌生理鹽水，隔離飼養(yǎng)。

1.6 藥敏試驗(yàn) 按K-B紙片擴(kuò)散法將被檢細(xì)菌涂布接種于普通瓊脂平板上，間隔一定距離貼上各種藥敏試紙[2]，于37℃培養(yǎng)24 h，結(jié)果判斷依據(jù)《紙片法抗菌藥物敏感試驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)》(第4版)進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 病雞及病死雞的病理剖檢變化 病雞肝臟腫大、質(zhì)脆，有點(diǎn)狀壞死灶，表面覆蓋有黃白色的纖維素性滲出物；脾臟腫大，肺充血、淤血，部分雞肺臟有1~2mm大小壞死灶；腎臟腫大，有尿酸鹽沉積；十二指腸有出血性腸炎變化；盲腸扁桃體腫脹、出血。

2.2 細(xì)菌分離 在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上37℃培養(yǎng)20h后，形成中等大小，圓形微凸起，表面光滑濕潤(rùn)，淺灰色半透明菌落。在麥康凱瓊脂平板上，形成中等大小，表面光滑濕潤(rùn)的粉紅色菌落。

2.3 細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察 病死雞肝、腎等組織培養(yǎng)物涂片染色鏡檢，均可見兩端鈍圓，多數(shù)散在排列，偶爾有2~3個(gè)連在一起的革蘭氏陰性短桿菌。

2.4 生化試驗(yàn)結(jié)果 生化試驗(yàn)結(jié)果顯示，此次分離的大腸桿菌對(duì)甘露醇、麥芽糖、葡萄糖、蔗糖、鼠李糖、蕈糖、果糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，MR、棉子糖、山梨醇、鳥氨酸結(jié)果陽性，VP、衛(wèi)矛醇、肌醇、硝酸鹽、酒石酸鹽、水楊素、精氨酸水解酶、側(cè)金盞酰、DNA、阿拉伯醇、血清菊糖、鳥氨酸、精氨酸脫羧酶、丙氨酸鹽、ONPG、乙酰胺結(jié)果陰性，符合大腸桿菌的生化特征。

2.5 動(dòng)物試驗(yàn) （1）肉湯中生長(zhǎng)情況：分離菌在肉湯中培養(yǎng)18~24h，呈均勻混濁，管底有黏性沉淀，液面管壁有菌環(huán)。（2）致病性結(jié)果：A1組小鼠，4只24 h內(nèi)死亡，1只36 h內(nèi)死亡。剖檢可見肝臟腫大，有出血點(diǎn)和壞死點(diǎn)；腸嚴(yán)重膨氣，心包淤血，肺出血，脾臟淤血。采取A1組小鼠的心血、肝和脾接種在普通瓊脂平板及普通肉湯，37℃培養(yǎng)20h，有細(xì)菌生長(zhǎng)。革蘭氏染色及生化鑒定表明此菌與接種細(xì)菌為同種細(xì)菌。表明該菌對(duì)小鼠具有較強(qiáng)的致病力。B1組飼養(yǎng)7d后全部存活，剖檢未見病變。A2組雛雞3d內(nèi)全部死亡，剖檢有與原發(fā)病雞只相同的明顯病變，雛雞的心血、肝和脾均能回收到接種菌；B2組雛雞全部健康存活，7 d后剖檢未見有病變。

2.6 藥敏試驗(yàn) 結(jié)果見表1。由表1可見，此次分離的大腸桿菌對(duì)阿米卡星、鏈霉素、慶大霉素、氟苯尼考敏感，對(duì)環(huán)丙沙星中度敏感，對(duì)諾氟沙星和痢特靈不敏感，而紅霉素、青霉素、氨芐西林和頭孢唑啉鈉對(duì)分離菌完全沒有抑制作用。新諾明的抑菌效果有待進(jìn)一步證實(shí)，分離菌對(duì)其不敏感的一個(gè)可能原因是藥物已接近其使用期限。

表1 分離菌株對(duì)12種藥物的敏感性 (mm)

3 討論

（1）近十幾年，在肉雞生產(chǎn)中，為了控制大腸桿菌及某些細(xì)菌感染，在飼料添加劑及治療中盲目使用一些抗菌藥物，導(dǎo)致耐藥菌株越來越多并日趨嚴(yán)重。而且大腸桿菌可通過菌毛將其抗藥性質(zhì)粒傳遞給其他大腸桿菌，所以大腸桿菌的抗藥性形成較快，環(huán)境中大腸桿菌耐藥性菌株越來越多。藥敏試驗(yàn)結(jié)果可以看出，曾對(duì)大腸桿菌比較敏感的環(huán)丙沙星、諾氟沙星、痢特靈、頭孢唑啉鈉等隨著不斷的應(yīng)用均產(chǎn)生了不同程度的抗藥性。所以，在使用藥物治療大腸桿菌病時(shí)，有條件的應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，選擇敏感藥物，且應(yīng)注意交替用藥，按療程投藥，這樣才能收到較好的治療效果。（2）大腸桿菌是條件性致病菌，防制該病的關(guān)鍵在于加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，做好各個(gè)環(huán)節(jié)的衛(wèi)生消毒，消除各種發(fā)病誘因。日常要提供全價(jià)優(yōu)質(zhì)飼料，并足量補(bǔ)充維生素和電解質(zhì)；夏季還要注意防暑；應(yīng)添加飼料添加劑，如碳酸氫鈉、桿菌肽鋅、維生素C等；嚴(yán)格執(zhí)行衛(wèi)生防疫措施，創(chuàng)造一個(gè)良好的飼養(yǎng)環(huán)境。由于各地大腸桿菌的血清型，特別是優(yōu)勢(shì)血清型存在差異，有效而通用的菌苗尚未出現(xiàn)，因此篩選地區(qū)性免疫原性優(yōu)良的大腸桿菌菌株制作菌苗，乃是防制雞大腸桿菌免疫預(yù)防的基礎(chǔ)。有條件的肉種雞場(chǎng)，最好采用自家滅活苗，這樣效果可靠，更適用于血清型復(fù)雜的地區(qū)。

[1] 吳清民. 家畜傳染病學(xué)[M]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社. 1998.

[2] B. W 卡爾尼可. 禽病學(xué)[M]. 北京: 北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社. 1991.

[3] 何華西. 畜禽疫病防治[M]. 北京: 高等教育出版社, 2002.

（2012–06–13）

S858.31

A

1007-1733(2012)11-0016-02