周芙瓊 趙繼紅 李 偉 卞慧敏 陳 軍 孟慶海

1.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京 210029；2.江蘇京甲藥業(yè)有限公司，江蘇泰州 225300

河豚毒素軟膠囊的制備工藝及其藥效學(xué)研究

周芙瓊1趙繼紅2李 偉1卞慧敏1陳 軍1孟慶海1

1.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京 210029；2.江蘇京甲藥業(yè)有限公司，江蘇泰州 225300

目的研究河豚毒素軟膠囊的制備工藝。 方法通過單因素考察確定河豚毒素軟膠囊的處方及工藝，并通過小鼠熱板法考察河豚毒素軟膠囊的鎮(zhèn)痛作用。 結(jié)果 最佳制備條件：司盤80為增溶劑，維生素E為抗氧化劑，尼泊金乙酯為防腐劑，攪拌時(shí)間為90 min，明膠∶甘油∶水=1.0∶0.3∶1.0。 結(jié)論 制備的TTX軟膠囊具有良好的鎮(zhèn)痛作用。

河豚毒素；軟膠囊；熱板法；制備

河豚毒素（tetrodotoxin，TTX）是一種鈉離子通道阻斷劑，其毒性雖強(qiáng)，但具有良好的鎮(zhèn)痛作用，可以緩解多種鈍痛及銳痛，且不產(chǎn)生依賴性，還可用于晚期癌癥止痛[1]。軟膠囊是現(xiàn)代化新劑型，可提高藥物穩(wěn)定性，相對(duì)用藥劑量準(zhǔn)確，吸收速度優(yōu)于傳統(tǒng)劑型，藥物的生物利用度較高[2]。因此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)TTX軟膠囊的處方及制備工藝進(jìn)行單因素考察，并對(duì)其藥效進(jìn)行了初步考察。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

YLS-6A智能熱板儀（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站），DF-101K磁力攪拌器（南京科爾儀器設(shè)備有限公司）。

1.2 試藥

TTX（江蘇泰州市康特生物工程有限公司，批號(hào)：000426），司盤（司盤20、司盤60、司盤80，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），紫蘇籽油（大連圣基生物制品有限公司），檸檬酸（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），檸檬酸鈉 （昆山金城試劑有限公司），尼泊金乙酯（上海凌峰化學(xué)試劑有限公司），維生素E（南京立業(yè)制藥有限公司），吲哚美辛（山西云鵬制藥有限公司，批號(hào)：H14020771）。

1.3 動(dòng)物

雌性ICR小鼠，清潔級(jí)，體重18～22 g，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：SCXK（滬）2007-0005。

2 方法與結(jié)果

2.1 制備工藝的研究

2.1.1 增溶劑的選擇及用量 選用3種增溶劑（司盤20、司盤60、司盤80），每種增溶劑配制5份，其體積按照軟膠囊內(nèi)容物體積的0.10%、0.15%、0.20%、0.25%、0.30%配制，置于磁力攪拌器中在60℃條件下攪拌，向其中加入蒸餾水，直至攪拌1 h水滴仍無法消失為止，記錄此時(shí)加入水的體積。由于司盤60所制得的油溶液流動(dòng)性較差，故只考察司盤20與司盤80的增溶效果。結(jié)果表明，司盤80的增溶效果較好，故選擇司盤80作為增溶劑，用量為內(nèi)容物體積的0.20%。見圖1。

圖1 不同增溶劑對(duì)水的增溶曲線

2.1.2 抗氧化劑、防腐劑的選擇及用量 配制軟膠囊內(nèi)容物，每個(gè)處方含有不同量的維生素E（VE）和尼泊金乙酯，平行兩份樣品，按照《中國(guó)藥典》2010版附錄ⅪⅩC“原料藥穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則”，將各樣品置于密封具塞試管，并置于恒溫箱，在60℃條件下放置10 d，于第0天、第5天和第10天取樣，測(cè)定過氧化值。結(jié)果表明，未加抗氧化劑和防腐劑的處方，過氧化值增幅明顯；當(dāng)VE用量為1.0%、尼泊金乙酯用量為0.2%時(shí)，過氧化值較低，故最終確定VE用量為1%，尼泊金乙酯用量為0.2%。見表1。

表1 維生素E、尼泊金乙酯的用量對(duì)軟膠囊內(nèi)容物過氧化值的影響

2.1.3 攪拌時(shí)間的選擇 配制3份TTX酸水溶液，方法為精密稱取1 mg TTX，用0.2 mL檸檬酸緩沖液（pH=5）溶解，得TTX酸水溶液。分別加入到3個(gè)裝有1 mL司盤80的燒杯中，在60℃條件下攪拌，經(jīng)過不同時(shí)間后加入一定體積的紫蘇籽油，即得TTX紫蘇籽油溶液，靜置過夜，觀察油溶液是否分層。結(jié)果顯示，當(dāng)攪拌時(shí)間為90 min時(shí)，所得的TTX紫蘇籽油溶液澄清，未出現(xiàn)分層，故確定攪拌時(shí)間為90 min。

2.1.4 囊殼處方選擇 囊殼處方采用軟膠囊常用的明膠-甘油-純化水配方，明膠、甘油與水的用量比為 1.0∶0.3∶1.0[3-6]。

2.2 小鼠熱板法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)

調(diào)節(jié)熱板儀溫度，使其恒定在（53±0.5）℃，每次取雌性小鼠1只，放入熱板儀，記錄自放入熱板儀至出現(xiàn)舔后足所需時(shí)間，作為該鼠的痛閾值，凡少于6 s或超過60 s出現(xiàn)舔后足者棄之不用。取預(yù)選合格的小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只：溶媒對(duì)照組、吲哚美辛組（20 mg/kg）、TTX軟膠囊高劑量組（32 μg/kg）、TTX 軟膠囊中劑量組（16 μg/kg）和 TTX 軟膠囊低劑量組（8 μg/kg），測(cè)定每只小鼠灌胃2 h后的痛閾值，計(jì)算痛閾提高率。見表2。

表2 各劑量組的痛閾值變化情況（，n=10）

表2 各劑量組的痛閾值變化情況（，n=10）

注：與溶媒對(duì)照組比較，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01，“-”表示無數(shù)據(jù)

組別 給藥劑量 灌胃前痛閾值（s）灌胃后痛閾值（s）痛閾提高率（%）溶媒對(duì)照組吲哚美辛組TTX軟膠囊高劑量組TTX軟膠囊中劑量組TTX軟膠囊低劑量組-20 mg/kg 32 μg/kg 16 μg/kg 8 μg/kg 16.4±4.5 17.0±4.3 17.1±2.9 16.9±5.3 16.7±5.0 16.9±4.2 22.9±3.1 25.3±8.3 22.8±5.6 21.6±3.0 3.05 34.71**47.95**34.91**29.34*

3 討論

TTX易溶于稀酸水溶液，本實(shí)驗(yàn)選用常用的檸檬酸緩沖液（檸檬酸、檸檬酸鈉）作為TTX的溶劑。當(dāng)溶劑pH值小于3時(shí)，TTX容易降解為脫水TTX[7]，因此pH值定為4～6較為合適，本實(shí)驗(yàn)選用pH值為5的檸檬酸緩沖液溶解TTX，結(jié)果顯示效果良好。

由小鼠熱板法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)結(jié)果顯示，本方法制得的TTX軟膠囊具有良好的鎮(zhèn)痛效果，且隨著劑量的增加，痛閾提高率越大，鎮(zhèn)痛效果越好。

[1]Asakawa M，Totoshima T，Shida Y，et al.Paralytic toxins in a ribbon worm Cephalothrix species （Nemertean） adherent to cultured oysters in Hiroshima Bay，Hiroshima Prefecture，Japan[J].Toxicon，2000，38（6）：763-773.

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[4]李泓.中藥軟膠囊質(zhì)量控制及發(fā)展方向[J].中醫(yī)藥學(xué)刊，2006，24（6）：1144.

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Study on preparation procedure and pharmacodynamics of Tetrodotoxin Soft Capsule

ZHOU Fuqiong1ZHAO Jihong2LI Wei1BIAN Huimin1CHEN Jun1MENG Qinghai1
1.Nanjing University of Chinese Medicine,Jiangsu Province,Nanjing 210029,China;2.Jiangsu Jingjia Pharmaceutical Co.Ltd.,Jiangsu Province,Taizhou 225300,China

Objective To study on the preparation of Tetrodotoxin Soft Capsule.Methods Single-factor was studied to optimize the formulation and technology.Hot plate experiment in mice was used to evaluate the analgesic activities of tetrodotoxin soft capsule.Results The best preparation conditions contained that,solubilizer was Span 80,antioxidant was Vitamin E,and preservative was Ethylparaben.The stirring time was 90 minutes,and gelatin ∶glycerol∶water=1.0 ∶0.3 ∶1.0.Conclusion Tetrodotoxin Soft Capsule is prepared successfully with good analgesic activities.

Tetrodotoxin;Soft Capsule;Hot plate experiment;Preparation

TQ460.6

A

1673-7210（2012）01（b）-122-02

周芙瓊（1986-），女，江蘇江陰人，碩士研究生；研究方向：中藥化學(xué)。

李偉，男，教授，博士生導(dǎo)師；研究方向：天然藥物化學(xué)。

2011-09-27）