雷 濤 梁啟超 林 峰 吳宜艷

牡丹江醫(yī)學院藥學院，黑龍江牡丹江 157011

核桃楸皮（Cortex Juglandis Mandshuricae）為胡桃科核桃屬植物核桃楸（Juglans mandshurica Maxim.）的樹皮[1]。 原植物核桃楸又名山核桃、胡桃、胡桃楸、小核桃等，為胡桃科胡桃屬落葉喬木，主要分布于我國東北地區(qū)（小興安嶺及張廣才嶺），河北、北京、內(nèi)蒙古、山西等地有少量分布，俄羅斯遠東地區(qū)、朝鮮、日本也有分布[2]，其樹皮及未成熟果實或果皮可用藥，樹皮又名楸樹皮，味苦性寒，具有清熱解毒、止痢明目的功效，主治泄瀉、痢疾、白帶、目赤[3]。現(xiàn)代研究表明，核桃楸具有抗氧化[4]、抗菌、消炎、抗癌等作用[5]。近幾年核桃楸皮化學成分的分離提取和抗癌作用機制研究成為熱點，經(jīng)過現(xiàn)代對胡桃楸化學成分分析證明胡桃楸含有萘醌、胡桃醌、黃銅苷、鞣花酸及沒食子酸等化學物質(zhì)[6]?，F(xiàn)為觀察其甲醇提取液的毒性及安全性，進行急性毒性的實驗研究。直接用SPSS軟件計算LD50，具有簡單、快速、直觀和方便的特點[7]。

1 儀器與試藥

核桃楸皮（核桃揪皮采自黑龍江省牡丹江市牡丹峰）；灌胃器、燒杯、量筒、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、電子天平等。

昆明種小鼠（牡丹江醫(yī)學院實驗動物中心提供），體重18～22 g，雌雄各半。實驗前動物置于室內(nèi)適應(yīng)環(huán)境1周，室溫20～28℃，采用架式籠養(yǎng)，標準飼料，飲水為自來水。

2 方法與結(jié)果

2.1 中藥提取液的制備

核桃楸皮粉碎后，用索氏提取器乙醚回流至無色，再經(jīng)甲醇提取48 h至無色，蒸干甲醇、轉(zhuǎn)水溶解、過濾、濃縮，形成最大濃度的混懸液0.181 1 mg/ml（以不堵塞灌胃器為限度），放入冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 預(yù)實驗

實驗前動物禁食不禁水12 h。隨機將昆明種小鼠分為5組，每組4只。①0.10 mL/10 g藥液，每日1次。②0.15 mL/10 g藥液，每日1次。③0.20mL/10 g藥液，每日1次。 ④0.15 mL/10 g藥液，每日2次，每次灌胃間隔8 h。⑤0.20 mL/10 g藥液，每日2次，每次灌胃間隔8 h。連續(xù)觀察7 d，每2 天稱一次體重，記錄死亡情況。結(jié)果：①無死亡，體態(tài)正常；②無死亡；③死亡1只；④、⑤全部死亡。將存活小鼠處死，解剖觀察內(nèi)臟器官，心、肝、脾、胃、腎未見異常。

2.3 急性毒性實驗

選用昆明種小鼠40只，雌、雄各半，體重18～22 g，分為4組，每組10只，實驗前動物禁食不禁水12 h。①0.1 mL/10 g藥液，每日1次。②0.1 mL/10 g藥液，每日2次，每次灌胃間隔8 h。③0.1 mL/10 g藥液，每日3次，每次灌胃間隔8 h。④0.1 mL/10 g蒸餾水，每日3次，每次灌胃間隔8 h。連續(xù)觀察7 d，每2 天稱一次體重，記錄死亡情況。結(jié)果：①無死亡；②死亡5只；③全部死亡。將①、④存活小鼠摘眼取血，測血液指標備用，處死，解剖觀察內(nèi)臟器官，心、肝、脾、胃、腎未見異常。

2.4 結(jié)果分析

2.4.1 軟件SPSS 13.0 計算LD50 輸入表1 數(shù)據(jù)的過程如下：運行SPSS 13.0 for Windows，進入SPSS數(shù)據(jù)編輯器后，首先激活變量表（VariableView）定義變量，在變量名（name）下輸入“劑量”、“動物數(shù)”和“死亡數(shù)”，并將“劑量”的小數(shù)點位數(shù)（Decimal）設(shè)為“2”，“動物數(shù)”和“死亡數(shù)”的小數(shù)點位數(shù)設(shè)為“0”。然后進入數(shù)據(jù)表（Data View），根據(jù)表頭提示，依次輸入各組數(shù)據(jù)。在數(shù)據(jù)表主菜單中，選擇Analyze——Regression——Probit，調(diào)出Probit Analyze對話框，只需將“劑量”選入“Covariates”欄中，“死亡數(shù)”選入“Response frequency”欄中，“動物總數(shù)”選入“Total observed”欄中，在“Transform”欄中，選擇“l(fā)og base 10”（以10為底的對數(shù)轉(zhuǎn)換），其他保持默認選項。然后單擊“OK”鈕即完成整個操作過程。測定結(jié)果LD50為2.622 mg/kg，其 95%可信范圍為1.811 mg/kg≤ LD50≤5.433 mg/kg。

2.4.2 血液分析 各組數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0 for Windows，LSD-t方差分析，結(jié)果顯示，①、④各項血液指標數(shù)據(jù)差異均無統(tǒng)計學意義（均P ＞0.05）。

表1 各項血液指標（±s，U/L）

表1 各項血液指標（±s，U/L）

④①39.70±11.05 41.50±12.94 178.70±25.42 182.10±40.05 245.30±25.37 270.85±32.12 6.75±0.09 6.80±0.51 0.42±0.25 0.45±0.32 30.85±1.80 30.94±1.50 2.65±1.14 2.50±1.10組別 谷丙轉(zhuǎn)氨酶 谷草轉(zhuǎn)氨酶 堿性磷酸酶 血尿素氮 直接膽紅素 肌酐 谷酰轉(zhuǎn)肽酶

3 討論

有文獻報道，胡桃醌小鼠灌胃給藥的LD50為2.5 mg/kg，腹腔注射的 LD50為 25 mg/kg，大鼠灌胃給藥的 LD50為112 mg/kg[8]。胡桃醌溶于乙醚，經(jīng)過乙醚回流后的核桃楸皮甲醇提取液仍然有很大毒性，說明還含有其他脂溶性毒性物質(zhì)。

核桃楸皮甲醇提取液富集了極性比較大的脂溶性成分，其LD50為臨床科學、安全用藥提供了一定依據(jù)。SPSS統(tǒng)計軟件具有數(shù)據(jù)整理、分析和統(tǒng)計和結(jié)果輸出等多種功能，將其用于LD50的計算，直接在視窗系統(tǒng)中輸入數(shù)據(jù)，不需查表和編程，步驟簡單，不易出錯。

[1] 石建輝，王金輝，袁征，等.核桃楸皮的化學成分[J].沈陽藥科大學學報，2006，23（8）：501-504.

[2] 魏麗麗.核桃楸的藥理作用研究[J].黑龍江醫(yī)藥，2009，22（4）：532-534.

[3] 吳靜娟.核桃楸皮等有效成分的藥理與臨床應(yīng)用[J].中成藥，2004，3（26）：230-231.

[4] 司傳領(lǐng)，劉忠，惠嵐峰，等.核桃楸樹皮提取物的化學成分及其抗氧化活性研究[J].林產(chǎn)化學與工業(yè)，2008，28（1）：29-32.

[5] 張野平，楊志博，肅靜洲，等.胡桃醌抗腫瘤作用研究[J].沈陽藥學院學報，1987，4（3）：166-169.

[6] 崔哲.胡桃楸的研究進展[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2008，24（20）：3061-3062.

[7] 周一平．用 SPSS 軟件計算新藥的 LD50[J]．藥學進展，2003，27（5）：314-316．

[8] 季宇彬，嚴琴琴，曲中原，等．正交試驗法優(yōu)選青龍衣中胡桃醌的提取工藝[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2009，24（3）：151-154.