王 斌，李旭廷＊，賴守勛，徐文龍

（1.四川省畜牧科學(xué)研究院獸藥研究所，四川成都610066；2.四川鐵騎力士集團，四川綿陽621006）

雞傳染性法氏囊病（Infectious bursal disease，IBD）是由雞傳染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus，IBDV）引起的危害雛雞的一種急性、高度接觸性傳染?。?］。疫苗接種是預(yù)防該病的有效方法。近年來，隨時IBDV超強毒株的出現(xiàn)，許多家禽育雛場IBD免疫接種程序在疫苗毒力選擇、免疫接種時間和免疫次數(shù)上進行了調(diào)整，盡管如此，IBD仍然時有發(fā)生，造成雛雞死亡率增加，同時引起免疫抑制，導(dǎo)致新城疫、傳染性支氣管炎等疫苗免疫失敗而暴發(fā)疾病，給家禽生產(chǎn)帶來嚴重損失［2］。

本試驗對3種IBD活疫苗進行了免疫效果觀察，比較3種IBD活疫苗毒力、突破母源抗體能力、激發(fā)免疫抗體能力及對新城疫（Newcastle disease，ND）疫苗血凝抑制（Haemagglutination inhibition，HI）抗體效價的影響，以期對養(yǎng)殖企業(yè)生產(chǎn)實踐提供有意義的指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗用動物 同批種蛋孵化的1日齡羅曼粉殼蛋雛雞，四川圣迪樂禽業(yè)公司提供。

1.1.2 IBD活疫苗 MB株活疫苗，以色列雅貝克，批號20090302；G606株活疫苗株，先靈葆雅，批號20090410；B38株活疫苗，派斯德，批號20090502；新城疫活苗 C403，先靈葆雅，批號20090510；新城疫＋傳支二聯(lián)滅活苗，中牧，批號20090110。

1.1.3 試劑 法氏囊ELISA抗體檢測試劑盒IDEXX，批號09732；新城疫血凝抗原和標準陽性血清，購自中國獸醫(yī)藥品檢察所；10mL／L雞紅細胞，自制。

1.2 方法

1.2.1 試驗分組及免疫程序 將1日齡蛋雛雞隨機分為4組，每組30只，按相同的飼養(yǎng)管理方式飼養(yǎng)。免疫程序為：1日齡，每組噴霧免疫C403。7日齡，每組頸部皮下注射新支二聯(lián)滅活苗（0.5mL／只）。14日齡，A 組免疫 B38株活疫苗（1羽份／只）；B組免疫 MB株活疫苗（1羽份／只）；C組免疫G606株活疫苗（1羽份／只）。26日齡，A、B、C各組C403滴鼻（1羽份／只）＋新支二聯(lián)滅活苗皮下注射（0.5mL／只）。21日齡和26日齡，D組為對照組，不使用傳染性法氏囊病疫苗，其他疫苗免疫與試驗組相同。

1.2.2 病理剖檢及法氏囊指數(shù)測定 21日齡，A、B、C、D組每組隨機選取5只雞稱重，并進行解剖，觀察臟器病變，同時取法氏囊稱重，計算法氏囊指數(shù)。

1.2.3 抗體檢測 各組于1、7、14、21、35、42、51日齡采血，每次每組隨機采血5只，分離血清，檢測IBDV抗體和ND抗體的消長；IBD抗體檢測方法參照試劑盒說明書，ND HI抗體檢測采用血凝抑制試驗法。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理 所有試驗數(shù)據(jù)采用SPSS軟件進行方差分析，LSD比較差異顯著性，所有數(shù)據(jù)用平均值（ˉx）±標準差（SD）表示。

2 結(jié)果

2.1 剖檢病變及法氏囊指數(shù)測定

IBD疫苗免疫后7d，各試驗組雞只無明顯臨床癥狀，但病理剖檢發(fā)現(xiàn)，3種疫苗均引起了不同程度的腿肌出血，其中以MB株活疫苗組出血最嚴重，G606株活疫苗組次之，B38株活疫苗組最輕。結(jié)果見表1。A、B、C試驗組和對照D組法氏囊外觀正常，無明顯水腫、出血、充血等病理變化，法氏囊指數(shù)與對照組相比，MB株活疫苗組和G606株活疫苗組有一定程度降低，以MB株活疫苗組降低幅度大，結(jié)果見表2，經(jīng)方差統(tǒng)計分析，差異不顯著（P＞0.05）。法氏囊指數(shù)越低，表明法氏囊受損越嚴重，該疫苗的毒力越強。綜合肌肉出血程度和法氏囊指數(shù)變化，初步確定MB株活疫苗毒力最強，G606株活疫苗次之，B38株活疫苗最弱。

表1 試驗組腿肌出血統(tǒng)計表Table 1 Bleeding points in leg muscle of the experimental group

表2 試驗組法氏囊指數(shù)Table 2 Bursal indexes in each group

2.2 抗體檢測結(jié)果

2.2.1 IBD抗體檢測結(jié)果 從表3得出，IBD母源抗體1日齡～14日齡半衰期約為7d，14d～21d時下降迅速，35d時已檢測不到抗體。14d試驗組免疫IBD疫苗后，各試驗組抗體消長規(guī)律一致，表現(xiàn)為抗體先下降（21日齡～28日齡），其中以B組下降速度最快，然后逐漸升高（21日齡～35日齡），以A組上升速度最快，滴度最高（表3和圖1）。

2.2.2 ND抗體檢測結(jié)果 ND抗體檢測結(jié)果見表4和圖2。35日齡前，雛雞經(jīng)過了3次ND疫苗的免疫，母源抗體在14d時下降至最低（5.3±1.16），此后均是逐漸上升，35日齡時達到較高的抗體滴度。試驗組免疫IBD疫苗后，21日齡和28日齡，B組ND抗體滴度上升最慢，與A、C組相比差異顯著（P＜0.05），與對照D組相比差異不顯著，提示MB株活疫苗毒力較強，造成了部分免疫抑制，影響了ND疫苗的免疫應(yīng)答，G606株活疫苗和B38株活疫苗對ND疫苗免疫應(yīng)答無影響。35日齡時，試驗組之間和試驗組與對照組之間差異均不顯著（P＞0.05），表明，即使疫苗在早期造成了免疫器官的一定損傷，但這種損傷是暫時的，可逆性的，21d左右可恢復(fù)。

表3 試驗組IBD抗體消長情況Table 3 Dynamic study on IBD antibody titers in experimental groups

表4 試驗組ND抗體消長情況Table 4 Dynamic study on ND antibody titers of in experimental groups

圖1 試驗組IBD抗體消長曲線Fig.1 Dymamic curves of IBD antibody titers in experimental groups

圖2 試驗組NDV抗體消長曲線Fig.2 Dymamic curves of IBD antibody tiers in experimental groups

3 討論

3.1 3種IBD活疫苗突破母源抗體的能力

一般來說，活疫苗毒力越強，則突破母源抗體的能力也越強［3］。活疫苗進入動物體增殖，不斷中和母源抗體，加速了母源抗體的消耗，同時，病毒在體內(nèi)增殖也刺激機體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，機體處于母源抗體逐漸衰減和免疫抗體逐漸增加的狀態(tài)［4］。根據(jù)表3，14日齡試驗組免疫不同疫苗后1周，MB株活疫苗組抗體效價最低，即表明該疫苗中和母源抗體最多，即加快母源抗體衰減的能力最強，能最短的減少免疫空白期，也就是說MB株活疫苗突破母源抗體的能力最強，G606株活疫苗次之，B38株活疫苗最弱。

3.2 3種IBD活疫苗對ND HI抗體滴度的影響

法氏囊疫苗如果毒力過強，可能損傷免疫器官，造成免疫抑制，引起其他疫苗的免疫失?。?］。朱子潔等［6］對IBD疫苗 MB株活活疫苗研究表明，MB株活活疫苗對法氏囊造成了不可恢復(fù)性的損傷，且對ND免疫有較大影響。朱子潔等接種對象為SPF雞，無IBD母源抗體，而有研究表明母源抗體越高，疫苗毒株對機體的損傷作用越?。?－6］，這可能是造成MB活疫苗對SPF雞和高母源抗體雛雞免疫損傷不同的原因。楊恒東等［7］研究了幾種中等毒力的IBD活疫苗對SPF雞法氏囊的損傷作用，表明不同毒株間的毒力有所差異，且對法氏囊造成了不同的損傷，但在這種損傷在一定時間可以恢復(fù)，與本研究結(jié)果一致。筆者認為，當(dāng)使用IBD疫苗MB株活疫苗等中等毒力株進行免疫時，最好之前進行1次～2次ND疫苗的免疫，在法氏囊未受損之前使ND抗體達到一個較好的基數(shù)，從本次試驗結(jié)果看，經(jīng)1日齡和7日齡兩次免疫接種后，ND HI抗體滴度能夠保持在25以上，減少了ND抗體的空白期，降低了NDV感染的風(fēng)險。

3.3 3種疫苗的免疫程序推薦

從3種疫苗對雞體的病理損傷、IBD抗體消長和對ND抗體消長的影響可推測，MB株活疫苗為毒力最強的疫苗，突破母源抗體能力強，產(chǎn)生免疫抗體速度快，對免疫器官可造成輕微損傷，但能很快恢復(fù)，可作為高母源抗體雛雞的首免。G606株活疫苗毒力較MB株活疫苗弱，突破母源抗體能力也弱于MB株活疫苗，免疫后能造成機體的一定損害，但不影響ND疫苗的免疫效果。此外，B38株活疫苗毒力最低，突破母源抗體能力相對弱，但對35和51日齡IBD的抗體檢測結(jié)果可知，B38株活疫苗疫苗產(chǎn)生的抗體滴度更高。因此，從更快的產(chǎn)生免疫抗體和產(chǎn)生更高的抗體滴度上，筆者認為高母源抗體雛雞首免應(yīng)選用MB株活疫苗，二免選用B38株活疫苗，較低母源抗體水平的雛雞首免可選擇G606株活疫苗或B38株活疫苗，二免選用B38株活疫苗，無母源抗體水平雛雞首免選擇B38株活疫苗。具體免疫時間可根據(jù)雛雞母源抗體水平及其半衰期決定，一般中等毒力疫苗在抗體滴度低于1 000時進行免疫效果較好［8］。

［1］ 殷 震，劉景華.動物病毒學(xué)［M］.北京：科學(xué)出版社，1997.

［2］ 張利勃，高慎陽.雞傳染性法氏囊病病毒超強毒株HQ0806的分離與鑒定［J］.中國農(nóng)學(xué)通報，2011，27（5）：401－404.

［3］ Rautenschlein S.傳染性法氏囊病的研究進展與防控措施［J］.中國家禽，2010，32（15）：36－40.

［4］ 陳申秒，朱秀高，馬景霞.雞傳染性法氏囊病疫苗免疫保護試驗觀察［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2011，38（2）：247－249.

［5］ 劉魁之，楊漢春，王宏衛(wèi)，等.在不同水平母源抗體情況下使用中強毒力的法氏囊病疫苗免疫對法氏囊組織的影響［J］.中國獸醫(yī)雜志，2005，41（7）：9－10.

［6］ 朱子潔，尤永君，蘇 霞，等.雞傳染性法氏囊病疫苗對SPF雞ND免疫效果的影響［J］.動物醫(yī)學(xué)進展，2010，31（S）：132－135.

［7］ 楊恒東，劉學(xué)賢，高 崧.商品化雞傳染性法氏囊病活疫苗的免疫效果及其對雞法氏囊的損傷研究［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2009 ，36 （11）：132－134.

［8］ 吳旭錦 ，朱小甫 ，尤永君.不同法氏囊病活疫苗對雞法氏囊發(fā)育的影響和對新城疫免疫效果影響的評價［J］.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報，2009，18 （6）：43－46.