林 謙 戴求仲 賓石玉 蔣桂韜 張建華 張 旭 王照群 王向榮

(1.湖南省畜牧獸醫(yī)研究所動(dòng)物營養(yǎng)與飼養(yǎng)技術(shù)研究室，長沙 410131;2.廣西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，桂林 541004;3.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，長沙 410128)

在畜牧養(yǎng)殖業(yè)迅猛發(fā)展的當(dāng)代，抗生素在畜禽飼料生產(chǎn)中大量使用已成為常態(tài)，有數(shù)據(jù)顯示全球抗生素總產(chǎn)量的50%左右被用于畜牧養(yǎng)殖行業(yè)。但抗生素使用帶來的抗生素在畜產(chǎn)品中殘留對人類健康的危害、過量排泄對環(huán)境的污染、長期使用導(dǎo)致耐藥菌株產(chǎn)生等問題也成為人們?nèi)找骊P(guān)注的焦點(diǎn)。目前很多國家已經(jīng)禁止或限制了抗生素在飼料中的使用，無抗畜禽產(chǎn)品將成為發(fā)展主流，而當(dāng)前酶制劑與益生菌制劑作為安全、綠色的飼料添加劑引起了極大的關(guān)注。酶與益生菌聯(lián)用對肉雞生長性能影響的研究報(bào)道比較多見，但不同試驗(yàn)間結(jié)果［1－3］差異較大，而以黃羽肉雞作為試驗(yàn)動(dòng)物的相關(guān)研究較少，從機(jī)理層面進(jìn)行的相關(guān)探討更是少見，項(xiàng)延潤［4］報(bào)道益生菌與酶制劑聯(lián)用替代抗生素飼喂70日齡左右的廣西三黃雞，結(jié)果顯示試驗(yàn)組生長速率、存活率及增重耗料比比對照組均有一定的提高，并能促進(jìn)多種養(yǎng)分的消化吸收，改善腸道微生態(tài)區(qū)系;李旭紅［5］研究顯示，在長沙黃雞飼糧中組合添加100 g/t益生素和0.1%復(fù)合酶制劑，試驗(yàn)組肉雞健康水平、存活率及平均日增重(ADG)比飼喂基礎(chǔ)飼糧的對照組更高，而料重比(F/G)較對照組下降2.65%，差異顯著(P＜0.05)，增重成本也下降0.16%。本試驗(yàn)即研究復(fù)合酶制劑、益生菌制劑和抗生素對黃羽肉雞生長性能、養(yǎng)分代謝率與腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，考察復(fù)合酶制劑與益生菌制劑聯(lián)用是否具有協(xié)同效應(yīng)及其替代抗生素飼料添加劑的可行性，尋求提高黃羽肉雞生長性能的最佳添加劑組合，為促進(jìn)黃羽肉雞的科學(xué)養(yǎng)殖和提高該產(chǎn)業(yè)的綜合效益提供參考和技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

益生菌制劑為復(fù)合芽孢桿菌制劑，含枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌，由武漢市雄峰科技有限公司提供，有效活菌含量為5×1010CFU/g。

酶制劑為固體復(fù)合酶，由上海尤特爾生化有限公司提供，主要成分為酸性纖維素酶(酶活≥2 000 U/g)、木聚糖酶(酶活≥30 000 U/g)。

抗生素采用抗敵素(硫酸黏桿菌素)，由廣州興達(dá)動(dòng)物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，純度為10%。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與分組

選擇675羽遺傳背景相同、同批次、發(fā)育正常的5日齡健康雌性黃羽肉雞，隨機(jī)分為5個(gè)處理，每個(gè)處理設(shè)5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)為27羽。各組雞初始體重?zé)o顯著差異(P＞0.05)。試驗(yàn)在湖南省畜牧獸醫(yī)研究所試驗(yàn)雞場內(nèi)進(jìn)行，整個(gè)試驗(yàn)期按試雞日齡分為5～28日齡和29～53日齡2個(gè)階段，全期共48 d。

采用單因素隨機(jī)設(shè)計(jì)試驗(yàn)，其中空白Ⅰ組飼喂基礎(chǔ)飼糧，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ組飼喂分別在基礎(chǔ)飼糧中添加25 g/t益生菌制劑、150 g/t復(fù)合酶制劑、150 g/t復(fù)合酶制劑 +25 g/t益生菌制劑以及300 g/t抗敵素的試驗(yàn)飼糧。試雞前期采用粉料飼喂，后期采用顆粒料飼喂。

1.3 基礎(chǔ)飼糧及營養(yǎng)水平

基礎(chǔ)飼糧參照 NRC(1994)［6］和 NY/T 33—2004《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》［7］中的黃羽肉雞營養(yǎng)需要，選用玉米、豆粕、次粉、米糠、菜籽粕等原料配制而成，由湖南光大牧業(yè)科技有限公司飼料廠加工生產(chǎn)。其組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.4 飼養(yǎng)管理

試雞采用網(wǎng)上平養(yǎng)，人工持續(xù)光照制度，育雛時(shí)采用紅外燈供暖，保持正常溫度，第1周33～34℃，第2周27～31℃，其后視具體氣溫情況供暖;雞舍自然通風(fēng)，定期打掃雞舍衛(wèi)生，相對濕度保持在55% ～65%;自由飲水和采食(計(jì)量不限量)，按常規(guī)免疫。

1.5 測試指標(biāo)與方法

1.5.1 生長性能

試驗(yàn)期間每天記錄雞只死亡情況，按重復(fù)記錄飼料消耗量，分別于5、28和53日齡早晨稱試雞空腹重(提前12 h停飼)，稱各重復(fù)剩余料重，并計(jì)算各處理各階段和全期的平均日采食量(ADFI)、ADG和F/G及各處理的全期存活率。

1.5.2 養(yǎng)分代謝率

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，于54日齡分別從各處理中選擇接近平均體重、采食正常且無怪癖的健康黃羽肉雞5羽(每個(gè)重復(fù)1羽)進(jìn)行單籠代謝試驗(yàn)，測定各組對飼料干物質(zhì)、蛋白質(zhì)、粗纖維和能量的利用效率，另外選擇5羽(每個(gè)處理1羽)接近平均體重、采食正常且無怪癖的健康黃羽肉雞作為內(nèi)源代謝組，測定試雞的內(nèi)源排泄量。代謝試驗(yàn)開始前先預(yù)飼5 d。正試期4 d，前2天為禁食排空期，禁食期間通過飲水每雞每日補(bǔ)充葡萄糖50 g，于第3天進(jìn)行強(qiáng)飼，每次強(qiáng)飼40～50 g各處理飼料并及時(shí)按個(gè)體進(jìn)行記錄，強(qiáng)飼后采用全收糞法分別收集每只雞48 h的糞便，每日收集若干次，為防止樣品儲(chǔ)存期間腐敗和氨的揮發(fā)損失，每次收集后加0.1 mol/L HCl攪拌均勻，混勻后立即置于－20℃下保存，全部糞尿收集完畢后冷凍干燥備測。在60～65℃烘箱干燥至恒重，置室內(nèi)回潮24 h，稱重、記錄，作為風(fēng)干糞重，然后將其粉碎，過40目篩，再將排泄物混合均勻，裝袋封存并立即取樣，在100～105℃下測定其絕干糞重(即干物質(zhì)重);能量用全自動(dòng)氧彈測熱儀測定;粗蛋白質(zhì)含量用凱氏定氮法測定;粗纖維含量用采用酸堿消煮法測定。養(yǎng)分真代謝率計(jì)算公式如下:

1.5.3 腸黏膜形態(tài)

在飼養(yǎng)試驗(yàn)54日齡早晨，從每個(gè)處理隨機(jī)選取10只(每個(gè)重復(fù)2只)接近該處理平均體重的試雞，屠宰剔出腸道后，立即分離十二指腸、空腸、回腸，采集肉雞十二指腸、空腸和回腸中段2 cm左右，剪開展平，用玻璃棒輕輕挑去其中內(nèi)容物，再用生理鹽水輕輕涮洗干凈，并用濾紙吸干殘余水分后，置于10%甲醛磷酸緩沖液中固定。接著將固定的標(biāo)本經(jīng)脫水→透明→浸蠟→包埋→修塊→切片→展片→常規(guī)蘇木精－伊紅(HE)染色等處理后，制成石蠟切片。之后用顯微鏡在100倍、250倍和400倍下隨機(jī)選擇多個(gè)非連續(xù)性視野觀察切片，并在100倍下挑選典型視野拍攝成圖片，比較各處理肉雞腸絨毛形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)育狀況。并用圖象分析軟件系統(tǒng)進(jìn)行觀察分析，測定平均腸絨毛長度和隱窩深度，計(jì)算腸絨毛長度/隱窩深度(V/C)。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets(air－dry basis) %

1.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2003軟件進(jìn)行初步處理后，采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析(one－way ANOVA)，若組間差異顯著，則采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，顯著水平為P＜0.05。試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 益生菌與酶制劑對黃羽肉雞生長性能的影響

由表2可知，各組間全期存活率無顯著差異(P＞0.05)，且均在97%以上，但空白Ⅰ組的全期存活率最低。

5～28日齡時(shí)，各組間ADG差異不顯著(P＞0.05)，但益生菌Ⅱ組ADG最佳，且Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ3組ADG均略高于空白Ⅰ組及抗生素Ⅴ組。關(guān)于ADFI，酶制劑Ⅲ組顯著高于空白Ⅰ組及組合添加Ⅳ組(P＜0.05)，而Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ 4組間 ADFI差異不顯著(P＞0.05)。酶制劑Ⅲ組F/G最高，Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ4組間F/G無顯著差異(P＞0.05)。

29～53日齡時(shí)，組合添加Ⅳ組ADG最佳且較空白Ⅰ組及抗生素Ⅴ組分別提高了5.32%(P＜0.01)和3.09%(P＞0.05)，同時(shí)還顯著優(yōu)于益生菌Ⅱ組(P＜0.05)。各組間ADFI、F/G無顯著差異(P＞0.05)，但組合添加Ⅳ組 ADFI最高，F(xiàn)/G最低。

從試驗(yàn)全期(5～53日齡)來看，組合添加Ⅳ組的ADG最高，比抗生素Ⅴ組提高了2.12%(P＞0.05)，且較空白Ⅰ組提高了4.22%，差異顯著(P＜0.05)，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅴ組間無顯著差異(P＞0.05)。同時(shí)各組間ADFI和F/G也均無顯著差異(P＞0.05)，不過組合添加Ⅳ組的ADFI最高且獲得了最優(yōu)的F/G。

2.2 益生菌與酶制劑對黃羽肉雞養(yǎng)分代謝率的影響

由表3可知，酶制劑Ⅲ組、組合添加Ⅳ組真代謝能均極顯著高于空白Ⅰ組和益生菌Ⅱ組(P＜0.01)，且組合添加Ⅳ組的真代謝能還高出抗生素Ⅴ組6.89%(P＜0.05)。而各組間干物質(zhì)真代謝率、粗蛋白質(zhì)真代謝率均無顯著差異(P＞0.05)，但抗生素及酶制劑單獨(dú)添加有提高干物質(zhì)真代謝率、粗蛋白質(zhì)真代謝率的趨勢。酶制劑Ⅲ組粗纖維真代謝率極顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ組(P＜0.01)，顯著高于組合添加Ⅳ組(P＜0.05)，而組合添加Ⅳ組的粗纖維真代謝率也要顯著高于空白Ⅰ組(P＜0.05)，與抗生素Ⅴ組相比也略有提高(P＞0.05)。

2.3 益生菌與酶制劑對黃羽肉雞腸黏膜形態(tài)的影響

由各處理黃羽肉雞腸道組織切片(圖1)可見:各組十二指腸、空腸和回腸絨毛大致呈現(xiàn)出葉狀、指狀和柱狀?？瞻注窠M3段腸道的絨毛發(fā)育不良，排列不規(guī)則，大多較短粗，有較多破損及斷裂的跡象，絨毛間界限模糊，單位視野中的腸絨毛數(shù)少;而Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組的3段腸的絨毛比空白Ⅰ組均明顯變長，比例相對協(xié)調(diào)，排列更整齊緊密，長度較均勻，絨毛間界限清晰，單位視野內(nèi)腸絨毛數(shù)量較多，從總體上來看，以益生菌與酶制劑組合添加Ⅳ組和抗生素Ⅴ組的腸絨毛形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)育程度較好。

由表4可知，空白Ⅰ組十二指腸絨毛長度最短，而Ⅱ、Ⅳ2組的十二指腸絨毛長度相近且均在一定程度上高于其他3組，但各組間十二指腸絨毛長度差異不顯著(P＞0.05);十二指腸隱窩深度空白Ⅰ組和酶制劑Ⅲ組相對于其他組較淺，但各組間無顯著差異(P＞0.05);而酶制劑Ⅲ組的十二指腸V/C最高，但各組十二指腸V/C無顯著差異(P＞0.05)。

空腸絨毛長度，空白Ⅰ組最短，而抗生素Ⅴ組最長且顯著高于空白Ⅰ組和酶制劑Ⅲ組(P＜0.05)，組合添加Ⅳ組空腸絨毛長度在一定程度上高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組，但不顯著(P＞0.05);空腸隱窩深度，抗生素Ⅴ組最深且極顯著或顯著深于空白Ⅰ組(P＜0.01)及酶制劑Ⅲ組(P＜0.05)，Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ3組間空腸隱窩深度差異不顯著(P＞0.05);空腸V/C，抗生素Ⅴ組最低，空白Ⅰ組和酶制劑Ⅲ組較高，但各組間均差異不顯著(P＞0.05)。

回腸絨毛長度，抗生素Ⅴ組最長且顯著高于益生菌Ⅱ組(P＜0.05)，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組間以組合添加Ⅳ組的回腸絨毛長度最長，但均無顯著差異(P＞0.05);回腸隱窩深度，益生菌Ⅱ組顯著深于其他各組(P＜0.05)，較空白Ⅰ組及抗生素Ⅴ組，其回腸隱窩深度分別降低了31.84%和36.36%，而Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組間的回腸隱窩深度無顯著差異(P＞0.05);回腸V/C，益生菌Ⅱ組最高且顯著高于Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ3組(P＜0.05)，與抗生素Ⅴ組比，益生菌Ⅱ組的回腸V/C也較高(P＞0.05)，而Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組的回腸V/C無顯著差異(P＞0.05)。

表2 益生菌與酶制劑對黃羽肉雞生長性能的影響Table 2 Effects of probiotics and enzyme preparation on growth performance of yellow－feathered broilers

3 討論

3.1 益生菌與酶制劑對黃羽肉雞生長性能的影響

許多研究報(bào)道證實(shí)在肉雞飼糧中組合添加合適比例的益生菌與酶制劑能夠不同程度地提高試雞的ADG及飼料利用率，改善肉雞生長性能。本試驗(yàn)中，各組全期存活率均在97%以上，益生菌Ⅱ組及抗生素Ⅴ組更是達(dá)到99%以上，且各組間存活率無顯著差異(P＞0.05)，說明在本試驗(yàn)條件下益生菌、酶制劑及兩者聯(lián)用與添加抗生素對黃羽肉雞存活率均無較大影響。5～28日齡時(shí)，益生菌Ⅱ組獲得了最高的ADG，而酶制劑Ⅲ組的ADFI最高，益生菌Ⅱ組與組合添加Ⅳ組的F/G一致且最低。說明益生菌在提高黃羽肉雞前期生長性能方面具有很好的潛能，這與潘寶海等［8］、Yeo等［9］、Jin 等［10］的報(bào)道相一致。采食量是衡量動(dòng)物攝入營養(yǎng)物質(zhì)數(shù)量的尺度，動(dòng)物采食的營養(yǎng)物質(zhì)只有滿足了維持需要后，多攝入的部分才能用于生產(chǎn)，因此，采食量是影響動(dòng)物生產(chǎn)水平的重要因素［11］。而本試驗(yàn)的結(jié)果表明由木聚糖酶、纖維素酶等非淀粉多糖(NSP)酶類組成的復(fù)合酶制劑在試雞生長前期不影響飼料適口性，并能夠顯著增加肉雞的前期采食量(P＜0.05)，但對試雞生長發(fā)育的提升作用不如益生菌。分析原因可能是:一方面試雞前期受飼料、環(huán)境等干擾影響較大，飼喂益生菌能夠減小應(yīng)激反應(yīng);另一方面由于肉雞生長前期消化系統(tǒng)尚未發(fā)育成熟，內(nèi)源酶(如蛋白酶、淀粉酶)分泌不足，胃腸道吸收養(yǎng)分能力弱，成為制約肉雞早期生長的限制性因素，而芽孢桿菌制劑可以直接產(chǎn)生一些營養(yǎng)物質(zhì)并且具有較高的淀粉酶、蛋白酶活性，還能夠產(chǎn)生一些試雞本身不能合成分泌的酶類，如多種NSP酶、植酸酶等，同時(shí)其產(chǎn)生的揮發(fā)性脂肪酸可降低消化道pH，拮抗有害微生物，建立并維持良好的腸道微生態(tài)區(qū)系平衡，并且還具有免疫佐劑的作用，可以提升肉雞機(jī)體的免疫水平［8，12－13］，這些均能夠更好地促進(jìn)黃羽肉雞機(jī)體發(fā)育，使肉雞的消化吸收功能得到完善，從而提高試雞前期生長性能。綜合來看，益生菌與酶制劑聯(lián)合使用對肉雞前期生長性能提高具有一定效果，有替代抗生素的潛能，且益生菌在本試驗(yàn)條件下對提高肉雞前期生長性能方面起主導(dǎo)作用。

表3 益生菌與酶制劑對黃羽肉雞養(yǎng)分代謝率的影響Table 3 Effects of probiotics and enzyme preparation on nutrient metabolic rates in yellow－feathered broilers

飼養(yǎng)試驗(yàn)后期，益生菌與酶制劑組合添加Ⅳ組獲得了最佳的生長性能，而酶制劑Ⅲ組的ADG也顯著高于空白Ⅰ組(P＜0.05)，與抗生素Ⅴ組增重水平相當(dāng)(P＞0.05)，F(xiàn)/G也有較大下降(P＞0.05)，試驗(yàn)結(jié)果與李成良等［14］、蔣桂韜等［15］的接近，表明木聚糖酶、纖維素酶組成的復(fù)合酶制劑在肉雞消化機(jī)能已經(jīng)成熟的飼養(yǎng)試驗(yàn)后期對提高肉雞后期的生長性能起著關(guān)鍵作用。原因主要是復(fù)合酶制劑的效用在該階段得到了充分發(fā)揮，木聚糖酶、纖維素酶消除了飼料中的NSP類抗?fàn)I養(yǎng)因子，充分破碎了植物性飼糧中的細(xì)胞壁成分，提高了飼糧營養(yǎng)價(jià)值，為肉雞生長提供了充足的養(yǎng)分。而酶制劑與益生菌聯(lián)用體現(xiàn)出了更好的效果，有替代抗生素添加劑的潛能。

從試驗(yàn)全期來看，益生菌Ⅱ組、酶制劑Ⅲ組及組合添加Ⅳ組各項(xiàng)生長性能指標(biāo)均在一定程度上優(yōu)于空白Ⅰ組，達(dá)到或超過抗生素Ⅴ組，且益生菌與酶制劑兩者聯(lián)合使用效果最佳。許多報(bào)道顯示益生菌是動(dòng)物體內(nèi)酶的重要來源并可提高酶活性，同時(shí)外源酶制劑的加入提高了養(yǎng)分消化率，為益生菌也提供了生長所必需的營養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)益生菌繁殖，兩者有很強(qiáng)的協(xié)同作用［16－17］。而本試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果也綜合表明益生菌與酶制劑聯(lián)合使用對提高肉雞生長性能來說在本試驗(yàn)條件下能夠起到替代抗生素添加劑的作用。

圖1 5個(gè)飼糧處理黃羽肉雞的腸道組織切片F(xiàn)ig.1 Intestine tissue sections in yellow－feathered broilers of five treatments(100×)

3.2 益生菌與酶制劑對黃羽肉雞養(yǎng)分代謝率的影響

飼糧養(yǎng)分代謝率的高低直接影響著家禽的生長速度和生產(chǎn)性能［18］，許多研究證實(shí)酶制劑與益生菌制劑單獨(dú)使用有提高肉雞代謝能及干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗纖維等的代謝率的作用。計(jì)成等［19］研究發(fā)現(xiàn)，肉雞飼糧中添加枯草芽孢桿菌可提高飼料中粗灰分、鈣和磷的利用率(P＜0.05)，但不影響粗蛋白質(zhì)利用率(P＞0.05);蔣桂韜等［20］報(bào)道在小麥基礎(chǔ)飼糧中添加250 mL/t細(xì)菌性木聚糖酶，試驗(yàn)組比對照組真代謝能及蛋白質(zhì)、總氨基酸代謝率分別提高了0.29 MJ/kg、4.28%、0.93%(P＞0.05)。然而目前鮮見有關(guān)于益生菌與酶制劑聯(lián)用對黃羽肉雞養(yǎng)分代謝率影響的報(bào)道。本試驗(yàn)中，組合添加Ⅳ組獲得了最高的真代謝能，分別比空白Ⅰ組及抗生素Ⅴ組提高了1.48(P＜0.01)和0.94 MJ/kg(P＜0.05);酶制劑Ⅲ組的真代謝能也較高，對比空白Ⅰ組及抗生素Ⅴ組分別提高了1.09(P＜0.01)和0.55 MJ/kg(P＞0.05)。這表明益生菌與酶制劑組合添加可提高試雞能量代謝水平，體現(xiàn)出了較強(qiáng)的聯(lián)用加性效應(yīng)。本試驗(yàn)中干物質(zhì)真代謝率和粗蛋白質(zhì)真代謝率各組差異不顯著(P＞0.05)，說明添加益生菌與酶制劑對干物質(zhì)真代謝率及粗蛋白質(zhì)真代謝率的影響與抗生素添加劑相比無較大差異，但是單獨(dú)添加酶制劑或其與益生菌聯(lián)用以及添加抗生素均有提高干物質(zhì)真代謝率、粗蛋白質(zhì)真代謝率的趨勢，而單獨(dú)添加益生菌在本試驗(yàn)條件下對干物質(zhì)真代謝率、粗蛋白質(zhì)真代謝率提升作用不佳，與計(jì)成等［19］、李菊［21］報(bào)道的結(jié)果類似。同時(shí)酶制劑Ⅲ組在粗纖維真代謝率中表現(xiàn)突出，極顯著優(yōu)于空白Ⅰ組和抗生素Ⅴ組(P＜0.01)，組合添加Ⅳ組粗纖維真代謝率也極顯著優(yōu)于Ⅰ、Ⅴ2組(P＜0.01)，但還是明顯比單獨(dú)添加酶制劑的Ⅲ組差(P＜0.05)，說明在以木聚糖酶、纖維素酶組成的復(fù)合酶制劑中添加芽孢桿菌對粗纖維真代謝率有一定的負(fù)影響，這可能是由于木聚糖酶與木聚糖的結(jié)合主要是通過離子之間的相互靜電作用，在pH低于等電點(diǎn)時(shí)，木聚糖酶帶正電荷，易與木聚糖結(jié)合，而pH等于或高于等電點(diǎn)時(shí)，二者基本不結(jié)合［22］，芽孢桿菌的加入影響了消化道的pH，從而可能干擾木聚糖酶與底物的結(jié)合而影響粗纖維的真代謝率。不過受試驗(yàn)條件影響，本試驗(yàn)并沒有測定試雞消化道內(nèi)上述各種酶的活性及消化道各段pH的變化情況，有必要進(jìn)一步研究確定。

表4 益生菌與酶制劑對黃羽肉雞腸黏膜形態(tài)的影響Table 4 Effects of probiotics and enzyme preparation on the intestinal mucosal morphology in yellow－feathered broilers

3.3 益生菌與酶制劑對黃羽肉雞腸黏膜形態(tài)的影響

絨毛長度、隱窩深度、V/C是衡量腸道消化吸收功能的重要指標(biāo)。腸絨毛是吸收養(yǎng)分的主要組織，絨毛長度與腸上皮細(xì)胞數(shù)量相關(guān)，絨毛短時(shí)，成熟的上皮細(xì)胞也減少，同時(shí)降低了上皮細(xì)胞與食糜接觸的表面積，使機(jī)體對養(yǎng)分的吸收能力減弱;隱窩深度可反映腸上皮細(xì)胞更新速度，不斷有細(xì)胞從隱窩基部向絨毛端部遷移、分化，形成具有吸收能力的絨毛細(xì)胞，以補(bǔ)充絨毛上皮的正常脫落，隱窩變淺表明腸上皮細(xì)胞生成率降低，更新過程減慢而成熟率上升，分泌及吸收功能增強(qiáng);V/C則綜合反映小腸功能狀態(tài)，比值增大，說明腸內(nèi)膜面積較大，腸黏膜結(jié)構(gòu)改善，單位面積絨毛細(xì)胞數(shù)上升，消化吸收功能增強(qiáng)，腹瀉率下降［23－27］。而本試驗(yàn)的結(jié)果表明由木聚糖酶和纖維素酶組成的復(fù)合酶制劑具有改善肉雞十二指腸、空腸絨毛形態(tài)結(jié)構(gòu)的趨勢，這與前人的研究報(bào)道［28－29］相似，而酶制劑促進(jìn)腸絨毛形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)育的機(jī)理一般認(rèn)為有以下幾個(gè)方面:1)酶制劑消除了飼糧中抗?fàn)I養(yǎng)因子的破壞作用，同時(shí)增加了飼料的可消化性;2)降低了食糜黏度，減少了黏性物質(zhì)對腸黏膜的吸附破壞性，而飼糧的相對消化時(shí)間也變長;3)降低了腸道有害菌數(shù)量，有益微生物的繁殖增加，從而減少其產(chǎn)生的毒素或代謝產(chǎn)物對腸黏膜的毒害作用，保護(hù)了腸黏膜，同時(shí)降低了有害菌對營養(yǎng)物質(zhì)的消耗;4)酶制劑促進(jìn)養(yǎng)分消化的同時(shí)增大了腸道中小分子氨基酸、低聚糖的含量，這些物質(zhì)不僅可以直接被腸黏膜上皮細(xì)胞吸收利用，促進(jìn)腸絨毛生長，同時(shí)某些寡糖等物質(zhì)還具有促生長因子的功能，可以調(diào)節(jié)腸黏膜發(fā)育。

多項(xiàng)研究證明益生菌制劑同樣具有改善腸黏膜的效用［30－31］。伍金娥等［32］研究表明，在肉仔鴨飼糧中添加芽孢桿菌制劑，能夠提高其腸絨毛長度，而對于促進(jìn)腸黏膜上皮細(xì)胞成熟，即引起隱窩深度變淺，在增大V/C方面，則主要集中在回腸。這說明芽孢桿菌制劑在改善動(dòng)物體腸黏膜結(jié)構(gòu)發(fā)育上具有一定的區(qū)位選擇性，在小腸后段的作用效果更突出，這與本試驗(yàn)在黃羽肉雞上的研究結(jié)果高度一致，本研究分析認(rèn)為產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因有以下幾方面:1)芽孢桿菌定植在回腸內(nèi)，產(chǎn)生多種揮發(fā)性脂肪酸，降低了腸道pH，Lupton等［33］曾報(bào)道指出酸性pH可以影響細(xì)胞的生長，腸道中pH的降低有利于腸黏膜保持完整的形態(tài)結(jié)構(gòu)并促進(jìn)黏膜細(xì)胞的增殖。因此腸道pH下降，能減少腸道有害菌數(shù)量，亦可促進(jìn)受損腸黏膜細(xì)胞的修復(fù)，使得腸絨毛長度增加，隱窩變淺。2)芽孢桿菌能分泌并活化多種內(nèi)源消化酶，亦可產(chǎn)生多種NSP酶等，促進(jìn)飼料降解，產(chǎn)生豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，如游離氨基酸、短肽、寡聚糖等，促進(jìn)消化道發(fā)育。同時(shí)養(yǎng)分分解產(chǎn)生的某些小分子物質(zhì)、芽孢桿菌自身的成分或是其某些代謝產(chǎn)物具有生物活性，能抑制有害菌繁殖，促進(jìn)有益微生物定植生長或促進(jìn)腸黏膜發(fā)育。3)芽孢桿菌定植入后腸段，與有害微生物產(chǎn)生生物奪氧作用，同時(shí)競爭養(yǎng)分，使得很多需氧有害微生物生長受到抑制，降低有害菌對黏膜的損害，如黃俊文等［34］就研究報(bào)道了仔豬飼喂納豆芽孢桿菌后，其結(jié)腸中的乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量顯著高于對照組(P＜0.05)，而大腸桿菌的數(shù)量要顯著低于對照組(P＜0.05)。

抗生素在改善腸黏膜的發(fā)育狀況、提高畜禽生產(chǎn)性能上的作用很早就得到了證實(shí)，而本試驗(yàn)中益生菌與酶制劑聯(lián)合使用在改善小腸絨毛發(fā)育方面表現(xiàn)出與抗生素添加劑相當(dāng)或是稍優(yōu)的效果。值得一提的是，本試驗(yàn)中空白Ⅰ組的十二指腸、空腸、回腸隱窩深度均較淺，而同樣也有報(bào)道指出在動(dòng)物飼糧中添加酶制劑不僅不能改善腸黏膜的形態(tài)發(fā)育，有些甚至具有反作用［35］，同樣益生菌制劑對不同腸段黏膜發(fā)育的改善效用不一，體現(xiàn)出一定的區(qū)位選擇性。造成這種差異的原因，我們認(rèn)為與飼糧成分和類型、動(dòng)物種類及生長階段有關(guān)，與益生菌的種類、添加劑量及其定植部位等因素有關(guān)，同時(shí)復(fù)合酶制劑的種類及配伍關(guān)系、添加劑量、添加技術(shù)等也會(huì)產(chǎn)生較大影響。例如，王繼強(qiáng)等［36］報(bào)道添加過多的酶制劑對試雞的生長性能無改善效果(P＞0.05)，對雞的腸黏膜及絨毛結(jié)構(gòu)發(fā)育無益(P＞0.05)。王佳麗等［37］的研究也顯示，在肉鵝小麥型飼糧中加入0.1%、0.2%的木聚糖酶能顯著增加肉鵝小腸絨毛長度(P＜0.05)，但加入0.3%的木聚糖酶對小腸絨毛長度并無更佳的改善作用(P＞0.05)，說明過多添加酶制劑對腸絨毛長度不一定有益，也許是由于添加過量的酶制劑使得養(yǎng)分濃度變大，其中某些高濃度物質(zhì)引起了一系列的抑制作用而影響腸黏膜發(fā)育，對此還需要進(jìn)一步的研究證實(shí)。

4 結(jié)論

在黃羽肉雞飼糧中添加抗生素、益生菌、酶制劑以及酶制劑與益生菌聯(lián)用，對試雞生長性能、養(yǎng)分代謝率和腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)均有不同程度的改善作用，但益生菌與酶制劑的聯(lián)合使用表現(xiàn)出了一定的優(yōu)勢，說明其具有替代某些抗生素飼料添加劑使用的潛能。

［1］周克勇，劉長忠，黃健.微生態(tài)制劑與酶制劑結(jié)合使用對烏骨肉雞生產(chǎn)性能的影響［J］.中國飼料，2001(15):13－14.

［2］MIDILLI M，TUNCER S D.The effect of enzyme and probiotic supplementation to diets on broiler performance［J］.Türk Veterinerlik ve Hayvancilik Dergisi，2001，25(6):895 －903.

［3］萬伶俐，于振斌，王曉陽，等.幾種抗病促生長飼料添加劑在肉仔雞生產(chǎn)中應(yīng)用效果的研究［J］.吉林農(nóng)業(yè)科學(xué)，2004，29(3):43 －46.

［4］項(xiàng)延潤.益生素、酶制劑替代抗生素飼喂肉雞的效果試驗(yàn)［J］.浙江畜牧獸醫(yī)，2005(2):1－2.

［5］李旭紅.益生素、酶制劑替代抗生素飼喂肉雞的效果試驗(yàn)［J］.中國飼料添加劑，2009(4):23－24.

［6］National Research Council.Nutrient requirements of poultry［S］.9th ed.Washington，D.C.:National A－cademy Press，1994.

［7］中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.NY/T 33—2004雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)［S］.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2004.

［8］潘寶海，李德發(fā)，譙仕彥.益生菌在養(yǎng)雞生產(chǎn)中的應(yīng)用［J］.中國飼料，2000(16):9－11.

［9］YEO J，KIM K I.Effect of feeding diets containing an antibiotic，a probiotic，or yucca extract on growth and intestinal urease activity in broiler chicks［J］.Poultry Science，1997，76(2):381 －385.

［10］JIN L Z，HO Y W，ABDULLAH N，et.al.Probiotics in poultry:mode of action［J］.World’s Poultry Science，1997(53):351 －368.

［11］楊鳳.動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2000.

［12］孫鳴，潘寶海，陳偉興，等.益生菌、益生元及合生素的作用機(jī)制和相互關(guān)系［J］.飼料研究，2008(4):62 －64，66.

［13］唐建中.芽孢桿菌抑菌耐藥和耐熱性能及其對黃羽肉雞生產(chǎn)性能影響的研究［D］.碩士學(xué)位論文.長沙:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

［14］李成良，張海燕.非淀粉多糖酶對肉雞生產(chǎn)性能、養(yǎng)分利用率及盲腸微生物的影響［J］.飼料工業(yè)，2009，30(6):11 －14.

［15］蔣桂韜，張石蕊，戴求仲，等.細(xì)菌性木聚糖酶對21～49日齡黃羽肉仔雞生產(chǎn)性能的影響［J］.中國飼料，2009(8):19－21.

［16］劉一塵，何明清，倪學(xué)勤.益生菌劑與益生協(xié)同劑的協(xié)同作用的研究及應(yīng)用現(xiàn)狀［J］.中國微生態(tài)學(xué)雜志，2001，13(3):179 －180.

［17］黎春輝，陳鐵橋，肖兵南，等.益生菌與益生協(xié)同劑聯(lián)合應(yīng)用的研究進(jìn)展［J］.中國飼料添加劑，2007(8):12－15.

［18］賀永康，趙國先，賀發(fā)生，等.中草藥對肉雞生產(chǎn)性能和養(yǎng)分表觀消化率的影響［J］.飼料研究，2010(6):30－33.

［19］計(jì)成，王曉霞，易中華，等.果寡糖和枯草芽孢桿菌對肉雞腸道菌群數(shù)量、發(fā)酵糞中氨氣和硫化氫散發(fā)量及營養(yǎng)素利用率的影響［C］//家禽營養(yǎng)與飼料科技進(jìn)展:第二屆全國家禽營養(yǎng)與飼料科技研討會(huì)論文集.北京:中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)分會(huì)，2007:237－242.

［20］蔣桂韜，張石蕊，胡艷，等.不同來源木聚糖酶對黃羽肉雞生長性能和養(yǎng)分利用率的影響［J］.家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，2010，31(3):50 －55.

［21］李菊.肉仔雞不同菌群狀態(tài)對腸道化學(xué)成分及肉品質(zhì)的影響［D］.碩士學(xué)位論文.北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)，2006.

［22］蔣桂韜.小麥型日糧添加細(xì)菌性木聚糖酶對黃羽肉雞生產(chǎn)性能的影響及作用機(jī)理研究［D］.碩士學(xué)位論文.長沙:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

［23］韓正康.家畜營養(yǎng)生理學(xué)［M］.北京:北京農(nóng)業(yè)出版社，1991.

［24］成令忠.組織學(xué)［M］.2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1994.

［25］楊玉榮，佘銳萍，張日俊，等.大豆活性肽對肉雞腸道黏膜結(jié)構(gòu)的影響［J］.中國畜牧雜志，2006，42(15):13－15.

［26］徐子涵，許麗.不同劑型乳酸菌對雛雞生長性能和小腸黏膜形態(tài)的影響［J］.動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2011，23(10):1812－1818.

［27］EWTUSHIK A L，BERTOLO R F P，BALL R O.Intestinal development of early－weaned piglets receiving diets supplemented with selected amino acids or polyamines［J］.Canadian Journal of Animal Science，2000，80:653 －667.

［28］丁雪梅，張克英.小麥－豆粕型日糧添加木聚糖酶對艾維茵肉雞免疫指標(biāo)、腸道形態(tài)和微生物菌群的影響［J］.動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2009，21(6):931－937.

［29］宋小珍，曾福海，楊秀江，等.飼糧中添加不同組合非淀粉多糖酶制劑對1～21日齡肉仔雞小腸粘膜結(jié)構(gòu)及其養(yǎng)分表觀利用率的影響［J］.動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2010，22(6):1730 －1737.

［30］SAMANYA M，YAMAUCHI K.Histological alterations of intestinal villi in chickens fed dried Bacillus subtilis var.natto［J］.Comparative Biochemistry and Physiology Part A:Molecular and Integrative Physiol－ogy，2002，133:95 －104.

［31］謝為天，鐘日聰，徐春厚.復(fù)合微生態(tài)制劑對肉仔雞血清生化指標(biāo)和十二指腸組織形態(tài)的影響［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2010，37(8):13 －17.

［32］伍金娥，常超，王學(xué)東，等.益生菌對肉仔鴨腸道結(jié)構(gòu)的影響［J］.湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，50(22):4670 －4673.

［33］LUPTON J R，JACOBS L R.Fiber supplementation resuits in expanded proliferative zones in rat gastric mucosa［J］.Journal of Clinical Nutrition，1987，46(6):980－984.

［34］黃俊文，林映才，馮定遠(yuǎn)，等.納豆菌甘露寡糖對仔豬腸道pH微生物區(qū)系及腸黏膜形態(tài)的影響［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2005，36(10):1021 －1027.

［35］姚軍虎，袁玖，楊鳳霞，等.飼糧中添加酶制劑對肉雞生產(chǎn)性能及腸道發(fā)育的影響［C］//中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜生態(tài)學(xué)分會(huì)第七屆全國代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集.楊凌:中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜生態(tài)學(xué)分會(huì)，2008:101－109.

［36］王繼強(qiáng)，張波，劉福柱.小麥型日糧添加酶制劑對蛋雞生產(chǎn)性能的影響［J］.糧食與飼料工業(yè)，2005(1):41－43.

［37］王佳麗，楊桂芹.小麥飼糧添加木聚糖酶對肉鵝小腸絨毛形態(tài)及食糜pH的影響［J］.河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007(7):109－112.