楊宏偉，黃永剛，陳曉隆，劉潔，底煜，陸巖

（1.中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院眼科，沈陽 110004；2.東北大學(xué)機(jī)械與自動化學(xué)院，沈陽 110003；3.中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)備處，沈陽110001）

糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy，DR）是糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，嚴(yán)重影響人類健康和生活質(zhì)量。據(jù)報(bào)道，經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)國家DR致盲率已經(jīng)位居致盲性眼病的前列。隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展和生活水平提高，糖尿病的患病率正迅速升高。因此預(yù)防和治療DR減少糖尿病患者的致盲率已成為目前眼底病醫(yī)生的重要任務(wù)。

DR發(fā)病機(jī)制的基礎(chǔ)為高糖誘導(dǎo)的微血管和神經(jīng)組織損傷［1］。近來研究表明在DR的微血管損傷機(jī)制中存在著炎性因子的作用［2］。高遷移率族蛋白B1（high mobility group box-1，HMGB1）作為晚期炎性介質(zhì)，在糖尿病組織中誘導(dǎo)炎性反應(yīng)和促進(jìn)血管的生成［3］。本研究擬通過檢測患者血清HMGB1水平，探討HMGB1與糖尿病視網(wǎng)膜病變患者各臨床指標(biāo)之間的關(guān)系，以明確HMGB1在DR發(fā)病機(jī)制中的作用和意義。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

在我院眼科2011年6月至2012年1月住院患者中選取糖尿病視網(wǎng)膜病變患者37例，其中增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變患者（proliferative diabetic retinopathy，PDR）12例、非增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變患者（nonproliferative diabetic retinopathy，NPDR）14例和無視網(wǎng)膜病變的糖尿病患者（DRO）11例，以及正常人9例設(shè)為正常對照組（NORMAL）。所有入選對象均已排除急慢性感染、炎性疾病、嚴(yán)重肝腎疾病等。各組入選者性別、年齡等基本情況無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.2 方法

入選者清晨空腹采靜脈血，離心（3 000 r/min）分離血清，-70℃存貯，測定糖化血紅蛋白（HbAC1）（美國BIO-RAD，D10）、空腹血糖、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯和總膽固醇（美國亞培C16000），ELISA法檢測HMGB1含量（美國R&D公司）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS 19.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料結(jié)果以±s表示，行單因素ANOVA分析和Pearson相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清HMGB1水平

正常對照組血清HMGB1水平為（7.54±0.68）mmol/L，HMGB1在糖尿病患者血清中比正常人明顯增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。在PDR組［（16.39±1.70）mmol/L］和 NPDR 組［（11.79±1.15）mmol/L］均顯著高于NDR的糖尿病患者（9.34±0.78）（P<0.01），且PDR組HMGB1水平顯著高于NPDR組（P<0.01）。各組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表 1）。

表1 各組HMGB1單因素ANOVA分析——樣本多重比較Tab.1 One-ANOVA analysis of HMGB1 in different groups

2.2 血清HMGB1的水平與各臨床指標(biāo)的相關(guān)性研究

應(yīng)用Pearson相關(guān)性分析，HMGB1與HbAC1具有明顯正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r=0.736，P<0.01）；與空腹血糖、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯和總膽固醇無顯著相關(guān)性。

3 討論

本研究檢測了PDR、NPDR和DRO的糖尿病患者，以及正常人血清HMGB1的水平。初步結(jié)果顯示糖尿病患者血清內(nèi)HMGB1水平高于正常人。隨著DR的出現(xiàn)及病情的發(fā)展DR患者的血清HMGB1水平逐漸增高。這表明HMGB1在DR的發(fā)展過程中發(fā)揮了一定的作用。

HMGB1是廣泛存在于真核細(xì)胞核中，高度保守的非組蛋白核蛋白，具有穩(wěn)定核酸結(jié)構(gòu)，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄和基因表達(dá)等多種功能［4，5］。它可被受刺激的單核巨噬細(xì)胞主動分泌或由壞死的細(xì)胞被動釋放到細(xì)胞外，細(xì)胞外的HMGB1可誘導(dǎo)細(xì)胞分化、觸發(fā)及調(diào)節(jié)炎癥等作用［6］。動物實(shí)驗(yàn)［7］也顯示糖尿病組織內(nèi)HMGB1高表達(dá)。在增殖性DR患者的玻璃體內(nèi)HMGB1和炎癥標(biāo)記物明顯增高［8］，這表明炎癥反應(yīng)在DR的進(jìn)展中發(fā)揮了重要作用。Biscetti等［9］發(fā)現(xiàn)在糖尿病病例的組織中，HMGB1可促進(jìn)缺血組織內(nèi)的新生血管生成，這一過程有VEGF的參與。應(yīng)用HMGB1抗體可明顯減輕炎性損傷。HMGB1合成抑制劑正丁酸鈉可降低組織HMGB1表達(dá)，同時(shí)組織TNF-α表達(dá)明顯下調(diào)，組織炎性反應(yīng)減輕，抗炎介質(zhì)IL-10表達(dá)增強(qiáng)。高糖誘導(dǎo)的HMGB1釋放可誘導(dǎo)糖尿病大鼠腎損傷，其機(jī)制可能是RAGE參與的NF-κB的活化作用［10］。我們前期研究顯示在急性缺血再灌注損傷的視網(wǎng)膜中存在著HMGB1和ROS的表達(dá)增高［11］。與早期炎性介質(zhì)相比，HMGB1雖變化較晚，但持續(xù)時(shí)間明顯延長。

以上研究提示，DM患者血清HMGB1高于正常人，作為晚期致炎因子的HMGB1有可能參與了DR的炎性反應(yīng)。而PDR患者血清HMGB1水平明顯高于NPDR患者，這提示HMGB1的升高可能在一定程度上反映在DR的發(fā)展過程中炎性反應(yīng)的輕重。HMGB1有可能成為預(yù)測及評估DR病情的重要炎癥標(biāo)志物。另外，HbAC1作為血糖控制的主要監(jiān)測指標(biāo)之一，對DR的監(jiān)測和治療有著重要的意義［12］，本文發(fā)現(xiàn)HMGB1與Hb具有顯著的相關(guān)性，提示HMGB1可能與糖尿病患者糖代謝異常有關(guān)，控制HMGB1的表達(dá)有可能對DR的發(fā)生發(fā)展具有一定的保護(hù)作用，但其具體機(jī)制還需進(jìn)一步證實(shí)。

目前，HMGB1靶向治療研究逐漸為人們所關(guān)注?？笻MGB1抗體、丙酮酸乙脂等在急性損傷型動物實(shí)驗(yàn)中用來拮抗晚期炎癥HMGB1的表達(dá)，能明顯拮抗HMGB1所致的急性損傷。因此，在本研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步尋找出對視網(wǎng)膜炎性反應(yīng)進(jìn)行拮抗、具有視網(wǎng)膜保護(hù)作用的方法，將會對DR的預(yù)防和治療具有重要的臨床意義。

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