丁 渭 張玉林 喬錄新 宋鳳麗 徐樹瑩 陳德喜

(北京市肝病研究所，首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院，北京100069)

對(duì)感染人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV-1)的患者的腦組織進(jìn)行尸檢可以發(fā)現(xiàn)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)存在神經(jīng)細(xì)胞和非神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，尤其在HIV相關(guān)性癡呆。盡管神經(jīng)相關(guān)癡呆的發(fā)病頻率非常高，而最嚴(yán)重的神經(jīng)認(rèn)知障礙由于抗反轉(zhuǎn)錄病毒試劑的應(yīng)用已開始下降，但在艾滋病患者中仍然存在大量的神經(jīng)認(rèn)知合并癥，這些都?xì)w類為HIV相關(guān)的神經(jīng)認(rèn)知障礙。

HIV-1感染的非神經(jīng)細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞，對(duì)轉(zhuǎn)錄反式激活因子(trans-activator of transcription，Tat)，病毒蛋白 R(viral protein regulatory，Vpr)和HIV-1包膜糖蛋白gp120通過(guò)免疫刺激產(chǎn)生神經(jīng)毒素誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性是必需的［1-3］。這些神經(jīng)毒素是興奮性毒素，與谷氨酸受體結(jié)合，主要是C-X-C趨化因子受體4(C-X-C chemokine receptor 4，CXCR4)和 CC趨化因子受體5(C-C chemokine receptor 5，CCR5)，使這些受體過(guò)度激活。這些過(guò)度激活的受體能夠激活細(xì)胞內(nèi)鈣離子信號(hào)通路并使細(xì)胞內(nèi)活性氧增加［3-6］。線粒體活性氧生成后Tat蛋白誘導(dǎo)細(xì)胞質(zhì)游離鈣離子水平逐步升高［5-6］。因此，HIV-1蛋白，尤其是gp120，Tat和Vpr能夠刺激活性氧(reactive oxygen species，ROS)的產(chǎn)生，表明在艾滋病患者中凋亡樣神經(jīng)元死亡是由活性氧介導(dǎo)的。迄今為止發(fā)現(xiàn)的活性氧誘導(dǎo)的所有病變中，DNA和RNA病變最豐富的是8-氧鳥嘌呤(8-hydroxyguanine，8-oxoG)。為了檢測(cè)額葉皮質(zhì)中DNA氧化損傷在感染了HIV-1的中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元損傷中是否起重要作用，本研究在感染了HIV的中樞神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)氧化核DNA損傷和線粒體DNA損傷進(jìn)行了研究。此外，我們?cè)噲D在艾滋病患者尸檢的額葉組織中檢測(cè)8-氧鳥嘌呤的水平，以此作為艾滋病毒導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)疾病包括HIV相關(guān)的神經(jīng)認(rèn)知功能障礙患者活性氧水平的生物標(biāo)記。

1 材料與方法

1.1 抗體、主要設(shè)備和試劑

本研究中用到的抗體主要有:抗-8-氧鳥嘌呤(8-oxoG)單克隆抗體(Trevigen公司，美國(guó))、抗-8-氧-20脫氧鳥苷糖甘酶1(OGG1)多克隆抗體(Novus Biologicals，Littleton，CO，美國(guó))、FITC標(biāo)記的抗兔 IgG和Cy3標(biāo)記的抗鼠IgG(Sigma公司，美國(guó))。其他主要試劑有:二氫乙錠(Dihydroethidium)(Invitrogen公司，美國(guó))。病毒載量通過(guò) Nuclisens EasyQ分析儀(Nuclisens EasyQ HIV-1 1.1，biomerieux bv)檢測(cè)，而CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)(BD FACSCalibur，美國(guó))。

1.2 HIV相關(guān)的神經(jīng)認(rèn)知障礙評(píng)估

HIV相關(guān)神經(jīng)認(rèn)知功能障礙采用國(guó)際獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)癡呆量表進(jìn)行評(píng)分(IHDS)，包括記憶-記錄-回憶3個(gè)步驟，主要測(cè)試運(yùn)動(dòng)速度和心理運(yùn)動(dòng)速度［7］。IHDS總分12分。IHDS評(píng)分低于或等于10分考慮為HIV-1相關(guān)神經(jīng)認(rèn)知紊亂(HIV-1 associated neurocognitive disorders，HAND)，得分越低越嚴(yán)重。

1.3 尸檢腦組織標(biāo)本

本研究中的10例額葉腦組織來(lái)源于河南省1994和1995年因商業(yè)性獻(xiàn)血感染了HIV-1的一組艾滋病死亡患者。10例尸檢腦組織標(biāo)本中，5例生前依據(jù)IHDS考慮為HAND，另外5例為非HAND。5例正常額葉皮質(zhì)腦組織標(biāo)本來(lái)源于首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京朝陽(yáng)醫(yī)院神經(jīng)外科腦部腫瘤患者的癌旁腦組織碎片。研究經(jīng)過(guò)首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。組織采用10%的甲醛固定。

1.4 免疫熒光染色

組織玻片保存于-80℃。1×triton穿孔15 min后，1×PBS洗滌15 min×2次;1%BSA+2%羊血清+1×PBS 37℃封閉1 h;1∶1 000濃度抗-8-oxoG，抗OGG1抗體(封閉液稀釋)4℃過(guò)夜;1×PBS洗滌15 min×3次;1∶1 000濃度對(duì)應(yīng)的Cy3或FITC標(biāo)記IgG二抗(封閉液稀釋)37℃溫育1 h;1×PBS洗滌20 min×3次;DAPI封片后于德國(guó)Leica-dm500b型正向熒光顯微鏡下閱片并用Xillix數(shù)碼相機(jī)拍攝相關(guān)圖像(每個(gè)點(diǎn)至少選取3個(gè)視野，取平均數(shù))。8-oxoG的陽(yáng)性水平可通過(guò)8-oxoG陽(yáng)性細(xì)胞核/DAPI陽(yáng)性細(xì)胞核比率算得，OGG1相關(guān)密度可用Image Pro Plus 6.0軟件進(jìn)行分析。

1.5 DNA提取和實(shí)時(shí)定量PCR

使用中國(guó)天根公司DNA提取試劑盒，按照使用說(shuō)明提取基因組DNA。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR相對(duì)定量的方法，我們分析了這些尸檢組織中線粒體DNA的拷貝數(shù)變化，包括5例HAND、5例非HAND和5例正常對(duì)照。首先，我們對(duì)實(shí)際DNA含量與qPCR實(shí)驗(yàn)所獲得的DNA拷貝數(shù)之間關(guān)系進(jìn)行驗(yàn)證，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1A)。實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)采用已經(jīng)成熟的探針法［8］，相對(duì)定量。采用 Taqman7900HT系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增線粒體DNA。所有的引物探針均由Invitrogen公司合成(上海，中國(guó))，所用序列詳見表1。每個(gè)標(biāo)本作3個(gè)復(fù)孔，并設(shè)立陰性和陽(yáng)性對(duì)照。引物和探針在反應(yīng)中的終濃度為250和300 nm。反應(yīng)程序依次為:95℃ 3 min，95℃15 s 40個(gè)循環(huán)，60℃ 1 min。利用Microsoft Excel軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。

1.6 線粒體DNA D-loop區(qū)的克隆測(cè)序

我們通過(guò)PCR的方法從前面提取的腦組織標(biāo)本基因組DNA中擴(kuò)增線粒體DNA D-loop區(qū)，再通過(guò)BioEdit軟件將克隆測(cè)序所得標(biāo)本D-loop區(qū)序列與Gen-Bank線粒體DNA標(biāo)準(zhǔn)序列(NC_012920)進(jìn)行核苷酸進(jìn)化距離分析。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的方法學(xué)，使用高保真的Taq多聚酶(Invitrogen公司，美國(guó))，用10 ng總DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物根據(jù)廠商說(shuō)明書連接到pGEM-18T載體(Tankra公司，中國(guó))。所有的序列由中國(guó)Biotake公司通過(guò)ABI3130序列儀進(jìn)行測(cè)序。使用NCBI的BLAST和BioEdit軟件進(jìn)行序列分析。使用7.0.5.3版本BioEdit軟件的Clustal W多序列比對(duì)程序進(jìn)行多序列的比對(duì)。

表1 實(shí)驗(yàn)所用引物和探針序列Tab.1 Primer and probe sequences used in the experiment

1.7 通過(guò)K562細(xì)胞檢測(cè)AIDS患者腦脊液中超氧化物

基于熒光技術(shù)二氫乙啶(HE)常被用于檢測(cè)細(xì)胞和組織中的超氧化物。HE在細(xì)胞質(zhì)中本身會(huì)發(fā)出藍(lán)色熒光(吸收/發(fā)射波長(zhǎng):355/420納米)，一旦被氧化形成2-羥基乙啶，與DNA嵌合后會(huì)發(fā)出紅色熒光(吸收/發(fā)射波長(zhǎng):518/605納米)［9］。只有當(dāng)它脫氫(氧化)成2-OH-E+后才可以與DNA嵌合。為了進(jìn)一步驗(yàn)證AIDS患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)氧化損傷情況，本研究中，利用穩(wěn)定表達(dá)EGFP綠色熒光的人類白血病K562-EGFP細(xì)胞系和艾滋病患者(包括HAND和非HAND患者)新鮮腦脊液共同孵育15 min。然后利用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)K562-EGFP細(xì)胞HE的水平。人類白血病K562-EGFP細(xì)胞一直由本實(shí)驗(yàn)室保存，用含有10%胎牛血清，100U/mL青霉素和100 μg/mL鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基在加濕的5%CO2培養(yǎng)箱中，接種于6孔板中培養(yǎng)。1×105K562-EGFP細(xì)胞與200 μL的艾滋病患者腦脊液共同孵育15 min為了檢測(cè)AIDS患者腦脊液中超氧化物。K562-EGFP細(xì)胞在0.03%H2O2中孵育5 min作為陽(yáng)性對(duì)照，同時(shí)將沒有做任何處理的K562-EGFP細(xì)胞作為陰性對(duì)照。去除培養(yǎng)基，加入1×PBS稀釋的儲(chǔ)存濃度為10 mg/mL的HE［于二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)中儲(chǔ)存］(Polysciences公司，美國(guó))，使終濃度為 50 μg/mL。避光，37 ℃孵育10 min。最后用BD FACSDiva流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分析(BD FACS CantoTMⅡ)。HE在490 nm波長(zhǎng)處被激發(fā)，在620 nm波長(zhǎng)處可被檢測(cè)到。儲(chǔ)存10 000個(gè)細(xì)胞的數(shù)據(jù)，然后用CellQuest軟件進(jìn)行分析。

1.8 數(shù)據(jù)分析

每個(gè)樣品均分析了8-oxoG和OGG1，在額葉皮質(zhì)組織中隨機(jī)選取了顯微鏡視野(20×)的10個(gè)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)分析。所有統(tǒng)計(jì)分析均使用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用單因素方差分析進(jìn)行比較，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者一般情況和臨床資料

10名艾滋病患者，這些患者分別在2006年和2007年去世。其中有7名男性和3名女性，平均年齡為32.9歲(8～56歲)。所有的患者終末期CD4計(jì)數(shù)都很低，平均為31.4(13～56)×106/L。這些患者的HIV-1亞型為HIV-1B亞型。最后一次記錄的平均血漿病毒載量是102 400(28 000-219 000)拷貝/mL;腦脊液(cerebrospinal fluid，CSF)病毒載量未知。所有患者未見中樞神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)會(huì)性感染，但是有3例患者合并肺結(jié)核，1例患者合并肺囊蟲感染，1例患者合并淋巴瘤，還有1例患者眼底巨細(xì)胞病毒感染，4例患者沒有任何機(jī)會(huì)性感染。IHDS測(cè)試表明5例患者有神經(jīng)認(rèn)知障礙(≤10分)。5例對(duì)照患者沒有任何機(jī)會(huì)性感染、HIV-1感染、未進(jìn)行過(guò)化療和放射治療。

2.2 AIDS患者大腦皮質(zhì)線粒體DNA檢測(cè)

HAND組和非HAND組線粒體DNA拷貝數(shù)下降到正常對(duì)照組的(0.69±0.18)倍和(0.74±0.15)倍(圖1B)。這表明，HIV-1慢性感染者的腦組織中線粒體DNA含量明顯下降。但是，在非HAND組和HAND組之間腦組織中線粒體DNA含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 患者一般情況和臨床資料Tab.2 General information:dementia rating CD+4T cell，viral load and opportunistic infections of the 10 AIDS patients and 5 control cases

圖1 HIV-1感染者大腦皮質(zhì)mtDNA缺失Fig.1 Depletion of mtDNA was detected in frontal cortex autopsy tissue from HIV-1 infected patients

2.3 DNA氧化損傷標(biāo)志物8-oxoG在AIDS患者尸檢皮質(zhì)腦組織中顯著增加

HAND組和非HAND組患者腦組織中8-氧鳥嘌呤的表達(dá)水平均增加，而且HAND組和非HAND組腦組織8-氧鳥嘌呤的表達(dá)水平增加更加明顯。比較而言，對(duì)照組額葉皮質(zhì)組織中幾乎檢測(cè)不到8-氧鳥嘌呤的表達(dá)(圖2A)。對(duì)3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示HAND組有近45%8-oxoG陽(yáng)性細(xì)胞，非HAND組有近30%8-oxoG陽(yáng)性細(xì)胞，而對(duì)照組只有4%8-oxoG陽(yáng)性細(xì)胞(圖2B)。

發(fā)現(xiàn)AIDS患者尸檢組織中OGG1水平明顯低于對(duì)照組，但HAND和非HAND患者之間OGG1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖2C，D)。

2.4 艾滋病患者尸檢組織額葉皮質(zhì)中線粒體DNA突變?cè)黾?/h3>

AIDS患者尸檢組織中D-loop區(qū)DNA突變水平明顯增加。核苷酸進(jìn)化距離是0.047 1(0.012 2-0.122 7);而對(duì)照組的5份標(biāo)本中只有2人存在缺失(D310C)，沒有突變(圖3A)。進(jìn)一步分析顯示，與對(duì)照組相比，HAND尸檢組織在線粒體DNA D-loop區(qū)突變率明顯增高(圖3B)，單核苷酸突變數(shù)量在HAND組織中是39，非HAND組織中是13，而在對(duì)照組標(biāo)本中僅有2個(gè)。HAND患者額葉皮質(zhì)高水平的單核苷酸突變可能與線粒體功能障礙相關(guān)，進(jìn)而增加了活性氧的水平。

2.5 艾滋病患者腦脊液中超氧化物增加

能夠代表腦脊液中超氧陰離子水平的HE的檢出率隨著HAND的進(jìn)展而逐漸增加:陰性對(duì)照為4%，非HAND組為28% ～40%，HAND組為37% ～65%，陽(yáng)性對(duì)照0.3%H2O2組為99%(圖4)。

圖2 HIV-1感染患者大腦皮質(zhì)腦細(xì)胞核DNA 8-oxoG氧化損傷和OGG1蛋白低表達(dá)Fig.2 High levels of 8-oxoG oxidative DNA damage in nuclear DNA and low levels of OGG1 protein co-exist in frontal cortex autopsy tissue from HIV-1 patients

圖3 大腦皮質(zhì)腦組織mtDNA D-loop非編碼區(qū)突變分析.Fig.3 Mutation assay of the noncoding region of the mtDNA D-loop in frontal cortex autopsy issue from HIV-1 infected samples and controls

圖4 AIDS患者腦脊液超氧陰離子水平Fig.4 Level of superoxide in cerebrospinal fluid from AIDS Patients

3 討論

HIV-1感染患者的尸檢腦組織可見神經(jīng)細(xì)胞和非神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，尤其在HIV相關(guān)癡呆癥患者［10-12］。早期研究［13-16］表明 HIV-1 對(duì)神經(jīng)突觸的損害和誘導(dǎo)慢性細(xì)胞凋亡可導(dǎo)致大腦局部(如海馬和基底節(jié)區(qū))神經(jīng)元的死亡，繼而引起認(rèn)知和運(yùn)動(dòng)功能障礙。艾滋病患者腦組織中神經(jīng)凋亡的機(jī)制非常復(fù)雜，目前主流觀點(diǎn)認(rèn)為由于分裂細(xì)胞(單核巨噬細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)感染了HIV-1后釋放神經(jīng)毒性物質(zhì)，繼而產(chǎn)生神經(jīng)毒性［17］。因此，HIV-1蛋白 gp120、Tat和Vpr能夠刺激活性氧的產(chǎn)生這一現(xiàn)象表明艾滋病患者神經(jīng)元凋亡或死亡可能是由活性氧介導(dǎo)的。在細(xì)胞內(nèi)，酶促和非酶促抗氧化反應(yīng)組成一個(gè)復(fù)雜的防御系統(tǒng)以對(duì)抗各種氧化應(yīng)激。然而，HIV-1蛋白在誘導(dǎo)過(guò)量活性氧產(chǎn)生的同時(shí)，還抑制機(jī)體抗氧化系統(tǒng)功能，從而進(jìn)一步加重氧化損傷對(duì)神經(jīng)元的毒性作用。

眾所周知，線粒體DNA氧化損傷和線粒體DNA缺失是非常嚴(yán)重的損傷，能夠?qū)е戮€粒體呼吸功能下降和細(xì)胞凋亡。此外，慢性神經(jīng)元凋亡是HAND主要的病理改變。本研究中，HIV-1感染時(shí)間均較長(zhǎng)。隨著HIV相關(guān)的神經(jīng)認(rèn)知功能障礙的進(jìn)展，活性氧的產(chǎn)生和氧化線粒體DNA的損傷(突變和缺失)能夠干擾線粒體氧化磷酸化，從而進(jìn)一步誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡，加速HIV相關(guān)神經(jīng)認(rèn)知功能障礙的進(jìn)展［18-22］。迄今為止發(fā)現(xiàn)的活性氧誘導(dǎo)的所有病變中，DNA和RNA病變最豐富的是8-氧鳥嘌呤，而且可能作為活性氧水平有效的生物標(biāo)志。既往研究［23］表明氧化應(yīng)激可能在HIV感染的神經(jīng)病變中發(fā)揮重要作用，HIV-1感染患者的CD+4T細(xì)胞中8-氧鳥嘌呤水平增加，DNA糖基化酶活性減低;而CD+8T細(xì)胞中8-氧鳥嘌呤的水平與健康對(duì)照組相似。我們對(duì)HIV-1感染患者尸檢組織額葉皮質(zhì)的研究發(fā)現(xiàn)8-氧鳥嘌呤染色陽(yáng)性的細(xì)胞占所有DAPI陽(yáng)性細(xì)胞的45%，但是在健康對(duì)照組中只有4%。HIV-1感染的患者尸檢腦組織中氧化損傷DNA的積累以及AIDS患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)高水平的活性氧可能在神經(jīng)退行性疾病中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本研究的結(jié)果表明活性氧和OGG1能影響艾滋病患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)中8-氧鳥嘌呤的聚集。另外的試驗(yàn)［24］證明8-oxo-G和OGG1表達(dá)主要在神經(jīng)元細(xì)胞。OGG1可啟動(dòng)針對(duì)DNA損傷的堿基切除修復(fù)。對(duì)老齡化和神經(jīng)退行性疾病的研究［18］發(fā)現(xiàn)OGG1活性與8-氧鳥嘌呤積聚呈負(fù)相關(guān)。

臨床研究［25］發(fā)現(xiàn)，阿爾茨海默病等神經(jīng)退行性疾病以及老齡化可見線粒體DNA突變率和缺失率增加。HIV-1感染和抗病毒治療所用的核苷類似物反轉(zhuǎn)錄抑制劑是線粒體DNA突變和線粒體功能障礙的兩個(gè)重要原因［26-27］。心肌細(xì)胞中特異表達(dá)HIV Tat能夠破壞其線粒體;此外，HIV Tat的過(guò)表達(dá)能夠抑制線粒體超氧化物歧化酶的表達(dá)［28］。在HIV-1感染早期，病毒即能進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)。此后在HIV-1感染大腦的慢性病程中，神經(jīng)免疫的激活以及病毒蛋白的直接毒性能夠增加神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激的水平，導(dǎo)致大量的活性氧產(chǎn)生，包括羥自由基、超氧陰離子和單態(tài)氧等［29］。正如我們初步結(jié)果所揭示的那樣，腦脊液中的超氧化物隨著HAND的發(fā)展而增加，而線粒體基質(zhì)中高水平的活性氧使得細(xì)胞線粒體DNA突變率大大增加。此外，HIV-1感染本身就可以產(chǎn)生氧化應(yīng)激，并且刺激線粒體谷氨酰胺酶過(guò)表達(dá)，從而在HAND病程中誘導(dǎo)谷氨酸介導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡通路［10，29-30］。因此，我們對(duì)線粒體DNA突變和缺失是否與HAND相關(guān)很感興趣，最終研究結(jié)果顯示HIV-1感染的患者尸檢腦組織中存在高水平的線粒體DNA突變和缺失。有研究［31］顯示HIV-1感染和HIV-1蛋白Tat、Vpr可誘導(dǎo)線粒體產(chǎn)生活性氧，從而影響HAND的進(jìn)程。我們的研究結(jié)果顯示HAND和非HAND患者線粒體DNA缺失顯著不同，表明HIV-1相關(guān)中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理過(guò)程是非常復(fù)雜的。眾所周知，HIV-1感染的巨噬細(xì)胞和膠質(zhì)細(xì)胞釋放的促炎性細(xì)胞因子，HIV-1蛋白和興奮性氨基酸能夠直接或間接刺激神經(jīng)元產(chǎn)生活性氧，從而損傷細(xì)胞大分子物質(zhì)，導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化、蛋白質(zhì)氧化和DNA氧化損傷。在HAND患者腦脊液中檢測(cè)到的高水平的活性氧表明，中樞神經(jīng)系統(tǒng)活性氧與HAND的發(fā)展相關(guān)。氧化應(yīng)激的慢性積累會(huì)誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡，導(dǎo)致神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生和發(fā)展。因此，確定氧化應(yīng)激在誘導(dǎo)核DNA氧化損傷和線粒體DNA突變，從而導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡中的作用非常重要。同時(shí)，這些結(jié)果表明，抗氧化劑治療不乏為預(yù)防和治療HAND的一種有益的選擇。

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