馬桂霞，曹悅興，王希信，母銳敏

(1.山東建筑大學市政與環(huán)境工程學院，山東 濟南 250101;2.濟南利民制藥有限責任公司，山東 濟南 250200)

0 引言

鹽酸馬尼地平屬于二氫吡啶類鈣離子拮抗劑，作用持久，有良好的抗高血壓效果，本品由日本武田藥品工業(yè)株式會社開發(fā)，于1990年在日本上市，在其生產(chǎn)工藝中，使用了甲醇、乙醇、異丙醇、三氯甲烷和甲苯，按照人用藥品注冊技術要求國際協(xié)調(diào)會(ICH) 規(guī)定[1－2]，甲醇、三氯甲烷、甲苯為二類溶劑，其限度分別為 0.3%、0.006%、0.089%，乙醇、異丙醇為三類溶劑，其限度分別為0.5%、0.5%，因此對該原料藥進行有機溶劑殘留檢測就顯得尤為重要。目前，國內(nèi)外對鹽酸馬尼地平中有機殘留的具體檢測方法鮮有報道。本文通過實驗比較了直接進樣和頂空進樣時有機溶劑的檢出情況及不同溶劑對檢測的影響，實驗表明，采用頂空進樣法并以50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液為溶劑時，能同時滿足5種有機溶劑的檢測要求，且該方法靈敏、可靠，結(jié)果準確，可有效用于本品的質(zhì)量控制。

1 實驗部分

1.1 主要實驗儀器與試劑

氣相色譜儀:Trace GC Ultra(美國熱電);頂空進樣器(DJ-200型，上海金凱德分析儀器有限公司);鹽酸馬尼地平樣品(濟南利民制藥有限責任公司);甲醇、乙醇、異丙醇、三氯甲烷、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺(均為分析純)。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件

色譜條件:色譜柱:SE-54(30m×0.25mm×0.33μm)。載氣:氦氣，流速:0.8mL/min。進樣口溫度:250℃;柱溫:40℃保持15min，以60℃/min升至250℃，保持5min。檢測器:FID，檢測器溫度:250℃;H2:35mL/min，空氣:350mL/min，尾吹氣(N2)35mL/min。

1.2.2 進樣方法的選擇

(1)直接進樣法

鹽酸馬尼地平在一般的溶劑中溶解性較小，選擇對鹽酸馬尼地平溶解性較大的N，N-二甲基甲酰胺為溶劑，進行相應實驗如下:

圖1 以N，N-二甲基甲酰胺為溶劑直接進樣法氣相色譜圖

以N，N-二甲基甲酰胺為溶劑分別制得每1mL中含甲醇 0.3mg、乙醇 0.5mg、異丙醇 0.5mg、三氯甲烷0.006mg、甲苯0.089mg的溶液，作為對照品溶液，準確量取1μL，進樣，記錄色譜圖，色譜圖見圖1。由色譜圖可知，甲醇、乙醇、異丙醇、甲苯均可順利檢出(S/N＞400，S/N為信噪比，指被測定物能夠準確定量的最小濃度為定量限度，一般取信噪比為10∶1[1－2]。)，分離度良好，三氯甲烷峰面積較小(S/N=8.202)，達不到定量限水平，所以直接進樣方法不符合要求。因此，擬采用頂空氣相色譜法進行本品有機溶劑的檢測。

(2)頂空進樣法

為試驗頂空進樣法的適用性，本實驗采用頂空瓶溫度90℃，樣品瓶平衡時間30min的預試驗并進行相應的溶劑選擇試驗。

①取1.2.2(1)中對照品溶液 5.0mL，置 20mL頂空進樣瓶中，密封后在90℃恒溫加熱30min，取1mL，進樣，記錄色譜圖，由色譜圖可知，甲醇、乙醇、異丙醇、甲苯均可順利檢出(S/N＞100)，分離度良好，三氯甲烷峰面積較小(S/N=1.171)，達不到定量限水平，因此N，N-二甲基甲酰胺為溶劑不符合要求。

②擬在N，N-二甲基甲酰胺中加入適量水，可以減少有機物在有機相中的溶解度，增大其在頂空氣體中的含量，從而提高檢測限。通過相應的溶解性試驗證明，鹽酸馬尼地平在50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液中溶解度可達到0.1g/mL，且放置至室溫不析出，因此本實驗采用50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液進行相應試驗。

圖2 以50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液為溶劑頂空進樣法氣相色譜圖

以50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液為溶劑分別制得每1mL中含甲醇0.3mg、乙醇0.5mg、異丙醇0.5mg、三氯甲烷 0.006mg、甲苯 0.089mg 的溶液，作為供試品溶液;精確量取5.0mL，置20mL頂空進樣瓶中，密封后在90℃恒溫加熱30min，取1mL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，色譜圖見圖2。由色譜圖可知，甲醇、乙醇、異丙醇、甲苯均可順利檢出(S/N＞200)，分離度良好，三氯甲烷峰面積明顯增加(S/N=91.540)，可以順利檢出，因此 50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液為溶劑符合要求。

1.2.3 進樣條件的選擇

頂空瓶平衡溫度:溫度越高，蒸汽壓越高，頂空氣體的濃度越高，分析靈敏度越高，但會對樣品的穩(wěn)定性和頂空瓶的密封性產(chǎn)生不利的影響，因此在滿足靈敏度的條件下，選擇較低的平衡溫度?？紤]到本品采用50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液為溶劑，沸點較高，因此擬采用80～90℃的平衡溫度，并進行相應的篩選。

分別取 1.2.2②中的供試品溶液 5.0mL置20mL頂空進樣瓶中，密封后在 90℃恒溫加熱20min、30min、40min; 在 80℃ 恒 溫 加 熱 20min、30min、40min、50min、60min;在相應的時間點處分別取1mL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，通過峰面積的大小來判斷是否達到平衡。結(jié)果表明，80℃恒溫加熱40min時即已達到平衡，90℃恒溫加熱20～40min時甲醇、乙醇、異丙醇面積基本穩(wěn)定，但三氯甲烷、甲苯面積一直在增加。因此最終選擇的恒溫加熱溫度為80℃，恒溫時間為45min。

1.2.4 線性關系實驗

精確量取三氯甲烷75.13mg置50mL量瓶中，加50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備溶液a;分別精確稱取甲醇、乙醇、異丙醇、甲苯 151.6mg、250.1mg、246.8mg、43.48mg置 50mL 量瓶中，加 50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液適量使溶解，加入儲備溶液a 2.0mL，以50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液定容至刻度，搖勻，作為儲備溶液b;精確量取為儲備溶液 b 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL 置 50mL 量瓶中，加 50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液稀釋并定容至刻度，搖勻，作為線性關系用溶液。分別取上述溶液各5.0mL，置20mL頂空進樣瓶中，密封后在 80℃恒溫加熱45min，取1mL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積A對濃度C進行線性回歸，得回歸方程如下:

表1 各溶劑的回歸方程及相關系數(shù)結(jié)果

1.2.5 精密度實驗

以50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液為溶劑將線性關系試驗儲備溶液b稀釋10倍，作為供試品溶液。精確量取5.0mL，置20mL頂空進樣瓶中，密封后在80℃恒溫加熱45min，取1mL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，連續(xù)測定6次，各有機溶劑測定的RSD分別為甲醇 2.29%、乙醇 2.04%、異丙醇2.17%、三氯甲烷 1.43%、甲苯 1.53%。

1.2.6 回收率測定

儲備溶液的制備:以50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液為溶劑分別制得每1mL中含甲醇3.0mg、乙醇5.0mg、異丙醇 5.0mg、三氯甲烷 0.060mg、甲苯0.89mg的溶液，作為儲備溶液;精確量取為儲備溶液 4.0、5.0、6.0mL 置50mL 量瓶中，加 50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液稀釋并定容至刻度，搖勻，分別作為80%、100%、120%的儲備溶液。

測定法:稱取鹽酸馬尼地平3份各0.5g，分別置20mL頂空進樣瓶中，分別加80%儲備溶液5mL置上述頂空進樣瓶中，密封后在80℃恒溫加熱使溶解，放冷至室溫，然后在80℃恒溫加熱45min，取1mL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖;另分別稱取鹽酸馬尼地平原料，分別取100%、120%儲備溶液及50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液(空白試驗)同法操作，記錄色譜圖。

對照品溶液的測定:取100%的儲備溶液5mL置20mL頂空進樣瓶中，密封后在80℃恒溫加熱45min，取1mL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。

按外標法以峰面積分別計算各濃度條件下的測得量與回收率(計算時需扣除空白溶液中的測得量)。各溶劑的回收率數(shù)據(jù)如表2所示。

表2 各溶劑的準確度試驗結(jié)果

1.2.7 最低檢測限

本方法最低檢測濃度分別為甲醇1.52μg/mL、乙醇 1.25μg/mL、異丙醇 0.62μg/mL、三氯甲烷0.30μg/mL、甲苯0.04μg/mL。

2 樣品測定

2.1 測定方法

色譜條件:見 1.2.1。

供試品溶液:精確稱取鹽酸馬尼地平0.5g，置20mL頂空進樣瓶中，精確量取50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液5mL置上述頂空進樣瓶中，密封后在80℃恒溫加熱使溶解，放冷至室溫，然后在80℃恒溫加熱45min。

對照品溶液:以50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液為溶劑溶解并制得每1mL含甲醇0.3mg、乙醇0.5mg、異丙醇 0.5mg、三氯甲烷 0.006mg、甲苯0.089mg的溶液，精確量取5mL置20mL頂空進樣瓶中，密封后在80℃恒溫加熱45min。

分別取上述溶液各1μL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算其含量。

2.2 測定結(jié)果

稱取鹽酸馬尼地平樣品0.5g，按照2.1中方法進行檢測，檢測結(jié)果見表3。

表3 樣品的測定

結(jié)果表明樣品中無上述溶劑的殘留。

3 結(jié)論

實驗表明，采用直接進樣法及以N，N-二甲基甲酰胺為溶劑的頂空進樣法三氯甲烷均不可有效檢出。通過采用50%的N，N-二甲基甲酰胺水溶液為溶劑，減少了有機物在有機相中的溶解度，增大了三氯甲烷在頂空氣體中的含量，從而提高檢測限，同時通過相應的方法學實驗證明本方法可以有效地檢測本品的有機溶劑，達到控制本品質(zhì)量的目的。

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