王小青 張春霞 惠玲

擴(kuò)張型心肌病(DCM)是一種以左心室和(或)右心室心腔過大、心肌收縮功能障礙為主要特征的心肌疾病，心室重構(gòu)是該病發(fā)展的重要病理環(huán)節(jié)。本研究通過觀察抗纖益心方對擴(kuò)張型心肌病大鼠心肌TGF-β1表達(dá)水平的變化探討其作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 抗纖益心方干浸膏(由黨參，黃芪，云苓，白術(shù)，丹參，川芎，紅花，赤芍，澤蘭，益母草組成):由南陽市中醫(yī)院制劑室提供，每克浸膏相當(dāng)于生藥4 g;呋喃唑酮片:福建省三明天泰制藥有限公司生產(chǎn)，批號:20050204;卡托普利片:常州制藥廠生產(chǎn)，批號:200502242;戊巴比妥鈉:中國醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司生產(chǎn)，批號:F20021216。TGF-β1多克隆抗體，購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

1.2 動(dòng)物造模及分組 選取體重為(61.9 g±7.0)g的Wistar健康雄性大鼠(由鄭州大學(xué)動(dòng)物中心提供，合格證號:510116)。將動(dòng)物按5:1隨機(jī)分為模型組和正常對照組。參照文獻(xiàn)方法[1]，模型組在飲水中加呋喃唑酮 (按1 kg水加700 mg呋喃唑酮配置)喂養(yǎng)，喂養(yǎng)8周。正常組動(dòng)物常規(guī)飼養(yǎng)，不進(jìn)行藥物干預(yù)。

1.3 治療方法 造模8周后開始藥物干預(yù)，1次/d給藥。正常組動(dòng)物常規(guī)飼養(yǎng)，不進(jìn)行藥物干預(yù);模型組動(dòng)物每日管飼與治療組同等容積的生理鹽水;抗纖益心方治療小劑量組動(dòng)物每日管飼抗纖益心方4.7 g/(kg·d);抗纖益心方治療大劑量組動(dòng)物每日管飼抗纖益心方18.8 g/(kg·d);卡托普利對照組動(dòng)物每日管飼卡托普利10.125 mg/(kg·d);中西藥聯(lián)用組動(dòng)物同時(shí)管飼卡托普利及抗纖益心方大劑量。灌藥8周后處死動(dòng)物。

1.4 心肌取材及OD測定 動(dòng)物麻醉后，迅速打開胸腔，取出心臟，濾紙吸干水分，剪去左、右心房及右心室，然后從心尖處沿冠狀面切取心肌組織，放入10%中性緩沖福爾馬林液中固定，石蠟包埋，制備厚4 μm組織切片。TGF-β1陽性表達(dá)采用平均光密度值(OD)的測定[1]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理，計(jì)算所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 各組TGF-β1陽性表達(dá) 光鏡下，各組TGF-β1的陽性染色呈棕黃色或棕褐色，陽性區(qū)域主要分布于心肌細(xì)胞和間質(zhì)胞漿內(nèi)。各組TGF-β1染色可見:正常組心肌纖維排列整齊，心肌細(xì)胞間質(zhì)中有少量棕黃色陽性表達(dá)，顏色較淡。模型組心肌細(xì)胞間質(zhì)中有大量棕黃色或棕褐色陽性表達(dá)，可看到陽性染色成片或反復(fù)重疊排列在心肌間質(zhì)中，染色較深?？ㄍ衅绽M、大劑量組、中西藥聯(lián)用組心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，心肌細(xì)胞間質(zhì)中有部分棕黃色陽性表達(dá)，三者無明顯差別，但與模型組相比，表達(dá)明顯減少。

2.2 各組OD值比較 正常組、中西藥聯(lián)用組、大劑量組和卡托普利組與模型組相比TGF-β1陽性表達(dá)明顯減少(P＜0.05);中西藥聯(lián)用組、卡托普利組、大劑量組和小劑量組與模型組相比明顯抑制TGF-β1陽性表達(dá)(P＜0.05)，其中以中西藥聯(lián)用組作用最強(qiáng);大劑量組與模型組比較對其改善作用明顯(P＜0.05);與卡托普利組作用相似(P＞0.05);與小劑量組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 各組TGF-β1OD值的比較(±s)

表1 各組TGF-β1OD值的比較(±s)

注:與正常組相比，﹟P＜0.05;與模型組相比，△P＜0.05

組別 n TGF-β1 0.1863±0.0603模型組 6 0.4884±0.0421卡托普利組 6 0.2695±0.0318△﹟中藥大劑量組 6 0.2679±0.0321﹟中藥小劑量組 6 0.3014±0.0145△中西藥聯(lián)用組 6 0.2669±0.0424正常組6﹟

3 討論

擴(kuò)張型心肌病是一種病因未明的疾病，主要是以單側(cè)或雙側(cè)心腔擴(kuò)大，心肌收縮功能減退，伴或不伴有充血性心力衰竭為特征的心肌疾病。心室重構(gòu)是該病發(fā)展的重要病理環(huán)節(jié)，因此，對于擴(kuò)張型心肌病心室重構(gòu)的研究已成為近年來心血管疾病病理生理研究的一個(gè)熱點(diǎn)。

從細(xì)胞和分子水平看，在心室重構(gòu)過程中，心肌細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的變化是心室重構(gòu)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。研究表明心室重構(gòu)是細(xì)胞外基質(zhì)促合成與促降解在高水平上的失平衡的結(jié)果，使平衡偏向于促生長的效應(yīng)，導(dǎo)致成纖維細(xì)胞增生及心肌間質(zhì)纖維化等病理性變化。近年來TGF-β1在心室重構(gòu)發(fā)生過程中的重要作用十分引人關(guān)注。TGF-β1由于能增加以膠原為主的間質(zhì)蛋白質(zhì)的合成，在組織器官纖維化形成過程中起重要的作用，TGF-β1能增加膠原等間質(zhì)蛋白質(zhì)的合成，抑制膠原酶等金屬蛋白酶的分泌及刺激金屬蛋白酶抑制劑的表達(dá)而抑制膠原的降解，還直接刺激細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的合成，且對新合成的基質(zhì)的降解有明顯的阻抑作用，而ECM的重塑則引起心肌結(jié)構(gòu)的紊亂、組織異質(zhì)性增高[2]，導(dǎo)致心肌異常僵硬及順應(yīng)性降低，是發(fā)生心律失常的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，更是猝死和慢性心功能不全的潛在危險(xiǎn)因素，對心臟患者的住院率、預(yù)后及死亡率，有著顯著的影響。

擴(kuò)張型心肌病的病機(jī)多為本虛標(biāo)實(shí)，早期氣虛為本，瘀血為標(biāo)，晚期心腎陽氣虛衰，溫煦失職，導(dǎo)致諸臟腑功能失調(diào)。其中氣虛血瘀不僅是擴(kuò)張型心肌病發(fā)病的內(nèi)因，還是病變的結(jié)果，存在于病變發(fā)展過程中的各個(gè)環(huán)節(jié)，有證據(jù)表明[3，4]，臨床上應(yīng)用益氣活血法能改善擴(kuò)張型心肌病的臨床癥狀、體征和心功能，因此益氣活血法應(yīng)貫穿于本病治療的始終。本研究發(fā)現(xiàn)模型組TGF-β1陽性表達(dá)明顯高于正常組，提示TGF-β1參與了擴(kuò)張型心肌病ECM的重塑，是造成擴(kuò)張型心肌病心室重構(gòu)的機(jī)制之一。而通過統(tǒng)計(jì)各組TGF-β1陽性表達(dá)的OD值可發(fā)現(xiàn)與模型組相比，中西藥聯(lián)用組、卡托普利組和大劑量組明顯抑制TGF-β1的表達(dá)，抗纖益心方小劑量組與模型組相比抑制TGF-β1表達(dá)的作用不明顯。提示大劑量抗纖益心方能通過抑制DCM大鼠心肌TGF-β1的表達(dá)，從而維持心肌間質(zhì)纖維膠原合成和降解之間的動(dòng)態(tài)平衡，這可能是其干預(yù)擴(kuò)張型心肌病大鼠心室重構(gòu)的機(jī)制之一。盡管抗纖益心方能抑制DCM大鼠心肌TGF-β1的表達(dá)，干預(yù)DCM心室重構(gòu)，但其最佳有效劑量是多少，用藥時(shí)間多長為宜，還有待進(jìn)一步深入研究。

[1]黃榮杰，劉唐威，伍偉鋒，等.呋喃唑酮制備大鼠擴(kuò)張型心肌病模型.中國病理生理雜志，2003，23(10):2147-2150.

[2]郝嘉，肖穎彬.心肌纖維化的臨床評估和藥物治療進(jìn)展.心血管康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2006，15(2):195-199.

[3]朱發(fā)珍，王露露，劉致美.黃芪注射液聯(lián)合復(fù)方丹參注射液佐治擴(kuò)張型心臟病療效觀察.臨沂醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校學(xué)報(bào)，2002，25(1):7-8.

[4]廖蔚茜，房莉萍，叢鵬.益氣活血法治療擴(kuò)張型心肌病臨床觀察.上海中醫(yī)藥雜志，2005，39(5):18-19.