程 萍 楊 飚 張麗萍

1.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北 十堰 442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院，湖北 十堰 442000

抑制素B （inhibin B，INHB） 是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β（transforming growth factor-beta，TGF-β）超家族的成員之一，是由人類性腺分泌的重要激素，女性體內(nèi)INHB僅在卵巢的顆粒細(xì)胞中表達(dá)。近年來一系列的研究表明INHB對(duì)生殖系統(tǒng)具有內(nèi)分泌、自分泌和旁分泌作用，生理狀況下的INHB參與了人類配子發(fā)生[1]、卵泡發(fā)育[2]、卵子成熟[3]、胚胎發(fā)育[4]等生殖過程的調(diào)節(jié)，與人類生殖過程密切相關(guān)。此外，INHB還參與了子宮內(nèi)膜異位癥[5]、男女性腺腫瘤[6-7]、多囊卵巢綜合征（PCOS）[8-9]、卵巢過度刺激綜合征（OHSS）[10]等疾病的病理生理過程。然而，我們對(duì)INHB在IVF-ET（體外受精-胚胎移殖）促排卵過程中的動(dòng)態(tài)變化、它與卵巢儲(chǔ)備功能之間的關(guān)系以及它在IVF-ET助孕過程中的可能作用機(jī)制卻了解甚少。

本研究對(duì)行IVF-ET的不孕患者體液中INHB的水平進(jìn)行測(cè)量，了解血清及卵泡液中INHB水平在超促排卵（COH）過程中的動(dòng)態(tài)變化及它與卵巢儲(chǔ)備功能之間的關(guān)系，以進(jìn)一步了解體液中INHB在IVF-ET過程中的作用及可能的調(diào)節(jié)機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2009年1月～2010年10月在湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院因輸卵管因素行IVF-ET的不孕患者72例 （72個(gè)周期）作為研究對(duì)象，年齡 24～35 歲，平均（29.83±3.75）歲。

1.2 方法

1.2.1 IVF-ET過程

1.2.1.1 COH過程GnRH-a長(zhǎng)方案 從上一個(gè)月的黃體中期開始使用GnRH-a達(dá)必佳（Decapeptyl，瑞士輝凌制藥有限公司）或達(dá)菲林（Diphereline，法國(guó)博福-益普生工業(yè)公司）0.05～0.1 mg，每日1次，皮下注射，至月經(jīng)第3～5天垂體降調(diào)節(jié)達(dá)標(biāo)后，加用促性腺激素（Gn）Gonal-F（r-hFSH，瑞士雪蘭諾大藥廠）和（或）HMG（麗珠集團(tuán)麗寶生物化學(xué)制藥有限公司）至注射人絨毛膜促性腺激素（hCG）日。促排卵期間B超監(jiān)測(cè)卵泡的發(fā)育情況，并在卵泡中期（開始促排卵后7～8 d）、注射hCG 日、取卵（OPU）日、胚胎移植（ET）日、ET 后 3 日（ET+3）繼續(xù)監(jiān)測(cè)血清雌二醇（E2）、孕酮（P）、促黃體素（LH）水平。 當(dāng)①B 超監(jiān)測(cè)卵泡直徑達(dá) 18 mm×1個(gè)，16 mm×2個(gè)，14 mm×3個(gè)；②子宮內(nèi)膜≥9 mm；③宮頸瞳孔現(xiàn)象明顯，黏液拉絲度達(dá)10 cm，羊齒狀結(jié)晶達(dá)Ⅲ級(jí)時(shí)停用Gn，于當(dāng)晚9時(shí)注射hCG 10 000 IU，35 h后經(jīng)陰道B超引導(dǎo)下穿刺取卵。

1.2.1.2 常規(guī)IVF-ET移植 所有患者每周期均移植2個(gè)優(yōu)質(zhì)胚胎；黃體酮40～60 mg肌注行黃體期支持治療。

1.2.2 標(biāo)本的收集

血清標(biāo)本分別于卵泡早期（月經(jīng)第3天，促排卵前），卵泡中期（開始促排卵后7～8 d）、注射hCG日、OPU日、ET日、ET+3日收集，3 000 r/min，10 min離心后取上清，置于-20℃冰箱保存待用。取卵時(shí)記錄卵泡數(shù)，撿卵后收集第1管卵泡液（盡可能不含血），3 000 r/min，10 min離心，去除細(xì)胞等有形成分，取上清并置于-20℃冰箱保存待用。

1.3 激素及血清INHB水平的測(cè)定

均采用ELISA檢測(cè)試劑盒 （diagnostic system laboratories，Inc.USA）進(jìn)行檢測(cè)。INHB理論的靈敏度或最小檢測(cè)值為7 pg/mL，檢測(cè)范圍為10～531 pg/mL。按試劑盒說明書進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 11.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，進(jìn)行Mann-whitney U檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，以P<0.01為差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清INHB濃度在COH過程中的變化

在COH過程中，隨著卵泡的逐漸發(fā)育成熟，血清中INHB濃度從卵泡早期開始迅速升高，卵泡中期達(dá)峰值，之后逐漸下降，卵泡早期、卵泡中期、hCG日及OPU日的血清INHB濃度分別為 [（52.38±88.96）pg/mL、（979.18±606.89）pg/mL、（809.09±532.97）pg/mL、（354.06±228.25）pg/mL]， 差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。見圖1。

圖1 血清中INHB濃度在COH過程中的變化

2.2 取卵日卵泡液及血清中INHB濃度比較

取卵日卵泡液 INHB濃度為 （1 670.21±42.65）pg/mL，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于血清中INHB濃度（354.06±228.25）pg/mL，兩者比較差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

2.3 不同時(shí)期血清及卵泡液INHB濃度在不同獲卵數(shù)組間的濃度比較

隨著獲卵數(shù)的增加，OPU日前不同時(shí)期血清INHB濃度明顯升高，不同獲卵數(shù)組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （均P＜0.05），而OPU日血清INHB在不同獲卵數(shù)組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）；OUP日卵泡液中INHB濃度隨著獲卵數(shù)增加而降低，不同獲卵數(shù)組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

3 討論

卵巢的儲(chǔ)備功能是女性生育能力的重要標(biāo)志，而卵巢中存留的健康卵泡數(shù)量和質(zhì)量決定了卵巢的儲(chǔ)備功能。在IVF-ET過程中，卵巢對(duì)促性腺激素的反應(yīng)能力，是卵巢儲(chǔ)備功能的一個(gè)重要指標(biāo)，而獲卵數(shù)是反映卵巢反應(yīng)能力即儲(chǔ)備功能的金指標(biāo)，適宜的獲卵數(shù)既是提高IVF妊娠率的前提，又可預(yù)防OHSS的發(fā)生，因此，評(píng)價(jià)IVF助孕患者卵巢儲(chǔ)備功能及反應(yīng)性具有很高的臨床價(jià)值，既有利于指導(dǎo)醫(yī)生及早調(diào)整COH方案或取消助孕周期，以提高IVF妊娠率，又可估計(jì)預(yù)后，減少并發(fā)癥。因此，為了更好地評(píng)價(jià)儲(chǔ)備功能，一些與卵巢反應(yīng)能力相關(guān)的細(xì)胞因子已逐漸成為人們研究的熱點(diǎn)。

INHB作為TGF-β家族的成員之一，是由一個(gè)α亞單位和一個(gè)β亞單位通過二硫鍵連接形成的二聚體糖蛋白激素，其分子量約為32 kD，女性體內(nèi)的INHB主要由卵巢中、小竇狀卵泡的顆粒細(xì)胞分泌，人黃體組織也可產(chǎn)生INHB。INHB的分泌主要受促性腺激素的調(diào)節(jié)，促卵泡激素（FSH）、激活素（activin）、胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGFs）可促進(jìn)INHB的分泌；而表皮生長(zhǎng)因子（EGF）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 α（TGF-α）、制卵泡素（follistatin，F(xiàn)S）[11]則抑制 INHB的分泌。在正常的月經(jīng)周期中，血清抑制素B水平呈周期性變化：在卵泡早期逐漸上升，卵泡中期達(dá)高峰，排卵后逐漸下降。

組織學(xué)研究發(fā)現(xiàn)在卵泡發(fā)育的不同階段，人和禽類卵巢中INHB表達(dá)呈顯著變化[12]，提示INHB參與了卵泡募集和發(fā)育。本研究對(duì)行IVF-ET的不孕患者COH過程中卵泡發(fā)育不同時(shí)期（卵泡早期、卵泡中期、hCG日及OPU日）的血清INHB水平進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)在COH過程中，隨著卵泡的逐漸發(fā)育成熟，血清中的INHB水平從卵泡早期開始迅速升高，卵泡中期達(dá)峰值，之后逐漸回落，不同時(shí)期的血清INHB水平差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），這一結(jié)果從生化角度表明了在IVFCOH過程中血清INHB水平與卵泡的募集及發(fā)育的密切關(guān)系。INHB可能以內(nèi)分泌方式特異性作用于腦垂體調(diào)節(jié)FSH分泌，參與卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育。

表1 不同時(shí)期血清及卵泡液INHB濃度在不同獲卵數(shù)組間濃度比較（）

表1 不同時(shí)期血清及卵泡液INHB濃度在不同獲卵數(shù)組間濃度比較（）

時(shí)間 獲卵數(shù)0～9個(gè) 獲卵數(shù)10～15個(gè) 獲卵數(shù)≥16個(gè) P值卵泡早期血清INHB卵泡中期血清INHB hCG日血清INHB OPU日血清INHB OPU日卵泡液INHB周期數(shù)495.58±324.52 495.58±314.52 510.72±299.95 392.05±257.52 1 708.65±58.33 24 961.43±637.74 937.55±667.04 790.06±617.64 355.72±277.02 1 666.30±59.48 30 1 653.78±467.86 1 563.07±453.12 1 279.88±421.35 433.28±166.65 1 649.35±31.19 18＜0.05＜0.05＜0.05＞0.05＞0.05

比較OPU日血清及卵泡液中INHB水平，發(fā)現(xiàn)血清中的INHB水平明顯低于同時(shí)期卵泡液中的水平，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），證明在卵巢局部存在高濃度的INHB，同時(shí)也進(jìn)一步證實(shí)了卵巢是循環(huán)中INHB的主要來源。

正常月經(jīng)周期中血清INHB水平來源于中小竇狀卵泡的顆粒細(xì)胞，隨著顆粒細(xì)胞增生和竇卵泡數(shù)目增加，卵泡期INHB水平隨之升高，直接反映了卵巢的儲(chǔ)備功能。有研究[13]表明月經(jīng)第3天血清INHB水平與FSH及FSH/LH呈負(fù)相關(guān)，與hCG日E2水平、獲卵數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)及妊娠率呈正相關(guān)。Fried等[14]提出取卵前2 d血清INHB水平可預(yù)測(cè)獲卵數(shù)，Dzik等[15]實(shí)驗(yàn)結(jié)果也有類似發(fā)現(xiàn)。由此看出，盡管血清INHB濃度與卵巢儲(chǔ)備功能的關(guān)系此前已有研究，但卻存在頗多爭(zhēng)議。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)在整個(gè)COH期間，OPU日前，隨著獲卵數(shù)的增加，不同時(shí)期血清INHB濃度隨之顯著增高，不同獲卵數(shù)組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），而OPU日血清及卵泡液中INHB水平在不同獲卵數(shù)組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；提示Gn在促排卵過程中，血清INHB水平可以預(yù)測(cè)IVF促排卵后的獲卵數(shù)目，并且血清INHB對(duì)卵巢儲(chǔ)備功能的預(yù)測(cè)作用在促排卵開始就已發(fā)生[16]。卵泡早期即COH前的基礎(chǔ)血清INHB水平和卵泡中期即Gn促排卵7～8 d后的血清INHB水平對(duì)獲卵數(shù)具有相似的預(yù)測(cè)價(jià)值（P值分別為0.006 606和0.006 68），而hCG日血清INHB水平的預(yù)測(cè)價(jià)值相對(duì)較低（P=0.019 008），卵泡液INHB水平則不能預(yù)測(cè)獲卵數(shù)。

綜上所述，在IVF-ET助孕過程中，INHB主要通過內(nèi)分泌方式在卵泡期參與生殖調(diào)節(jié)，COH各個(gè)時(shí)期的血清INHB水平均能反映卵巢的儲(chǔ)備功能，COH前的基礎(chǔ)血清INHB水平和卵泡中期即Gn促排卵7～8 d后的血清INHB水平對(duì)獲卵數(shù)具有相似的預(yù)測(cè)價(jià)值，因此基礎(chǔ)血清INHB可以作為獨(dú)立的、最早的卵巢儲(chǔ)備功能預(yù)測(cè)因子。這對(duì)于醫(yī)生及早調(diào)整COH方案，預(yù)防并發(fā)癥的發(fā)生，提高IVF-ET成功率具有重要的臨床指導(dǎo)作用。

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