何 宇

（渭南職業(yè)技術(shù)學(xué)院護(hù)理系，陜西 渭南714000）

哺乳動(dòng)物卵巢含有大量處于不同發(fā)育階段的卵母細(xì)胞,其中多數(shù)卵母細(xì)胞存在于無(wú)腔階段的卵泡中，但大部分卵泡在無(wú)腔階段（腔前卵泡）中閉鎖、退化，沒(méi)有得到相應(yīng)的利用,這無(wú)疑是動(dòng)物遺傳和育種資源的極大浪費(fèi)。因此，腔前卵泡的開(kāi)發(fā)無(wú)疑是解決這一難題的有效途徑。腔前卵泡的體外培養(yǎng)技術(shù)已取得了一定的發(fā)展，建立了多種培養(yǎng)體系,有其各自的優(yōu)缺點(diǎn),本文就動(dòng)物卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育及其腔前卵泡的體外培養(yǎng)研究方面做一綜述。

1 卵泡生長(zhǎng)發(fā)育的一般規(guī)律和動(dòng)態(tài)模式

卵泡發(fā)育始于胎兒期。胎兒出生時(shí)卵巢中已經(jīng)存在不同早期發(fā)育階段的卵泡，動(dòng)物進(jìn)入性成熟期不斷會(huì)有成批卵泡及時(shí)成長(zhǎng)，其中一個(gè)或數(shù)個(gè)成熟和排放，同時(shí)也會(huì)不斷有卵泡凋亡。動(dòng)物一旦進(jìn)入老齡期，隨著卵巢機(jī)能的退化不再有卵泡發(fā)育。卵泡形成后，部分原始卵泡脫離原始卵泡庫(kù)，開(kāi)始緩慢生長(zhǎng)。此即所謂的原始卵泡啟動(dòng)募集。在原始卵泡啟動(dòng)以后，卵母細(xì)胞周圍的一層原始顆粒細(xì)胞其形態(tài)由扁平狀的轉(zhuǎn)變成立方或柱狀。隨著卵泡的進(jìn)一步發(fā)育，卵母細(xì)胞增大，顆粒細(xì)胞增多并由單層成多層，在第二層顆粒細(xì)胞出現(xiàn)時(shí)，透明帶開(kāi)始形成，并伴有卵泡膜細(xì)胞的形成，此時(shí)的卵泡稱為次級(jí)卵泡。次級(jí)卵泡進(jìn)一步發(fā)育成為三級(jí)卵泡。在這個(gè)時(shí)期，卵泡細(xì)胞分泌的液體進(jìn)入卵泡細(xì)胞和卵母細(xì)胞間隙，形成卵泡腔。卵泡腔內(nèi)的液體為卵泡液，隨著卵泡液分泌量的增多，卵泡腔進(jìn)一步擴(kuò)大，卵母細(xì)胞被擠到一邊，并被包圍在一團(tuán)顆粒細(xì)胞中，形成突于卵泡腔中的半島，稱為卵丘。其余的顆粒細(xì)胞則緊貼在卵泡腔周圍，形成卵泡壁層的顆粒細(xì)胞層。卵泡發(fā)育到最大體積時(shí)，卵泡壁變薄，卵泡腔內(nèi)的卵泡液體積增加到最大，稱為成熟卵泡。哺乳動(dòng)物性成熟后，只有少數(shù)的原始卵泡生長(zhǎng)發(fā)育成熟并排卵，絕大多數(shù)卵泡中途閉鎖而死亡,少數(shù)卵泡發(fā)育成熟至排卵[1]。

卵泡發(fā)育從形態(tài)上可分為幾個(gè)階段,依次為原始卵泡、初級(jí)卵泡、次級(jí)卵泡、三級(jí)卵泡、格拉夫卵泡和排卵前的成熟卵泡。有的把初級(jí)卵泡開(kāi)始生長(zhǎng)以至三級(jí)卵泡階段,統(tǒng)稱為生長(zhǎng)卵泡。有的又根據(jù)卵泡出現(xiàn)泡腔與否分為腔前卵泡(或稱無(wú)腔卵泡)和有腔卵泡(或稱囊狀卵泡)。三級(jí)卵泡以前的卵泡尚未出現(xiàn)卵泡腔統(tǒng)稱為腔前卵泡。三級(jí)卵泡開(kāi)始出現(xiàn)泡腔后至成熟卵泡,稱為有腔卵泡[2]。

卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過(guò)程，開(kāi)始于募集一個(gè)或多個(gè)原始卵泡到生長(zhǎng)卵泡庫(kù)，終止于排卵或卵泡閉鎖，呈現(xiàn)“卵泡波”的特征。卵泡波實(shí)質(zhì)上就是卵泡周期性生長(zhǎng)發(fā)育的一種動(dòng)態(tài)變化過(guò)程。首先，卵泡庫(kù)中一組卵泡被吸收發(fā)育，其中有一個(gè)或數(shù)個(gè)確立為優(yōu)勢(shì)化卵泡繼續(xù)生長(zhǎng)發(fā)育，并明顯抑制其余卵泡的生長(zhǎng)，最終導(dǎo)致它們閉鎖。在正常發(fā)情周期中一個(gè)卵子排出大概經(jīng)歷下列過(guò)程：吸收，選擇，優(yōu)勢(shì)化，退化或排卵[3]。

2 動(dòng)物腔前卵泡體外培養(yǎng)的研究概況

動(dòng)物腔前卵泡的研究開(kāi)始于20世紀(jì)60年代。當(dāng)時(shí)的研究?jī)H限于細(xì)胞分離的方法和卵巢形態(tài)學(xué)與組織學(xué)等方面的內(nèi)容。Gorb[4]等用0.5%鏈酶蛋白酶消化小鼠卵巢中的纖維組織，分離腔前卵泡，得到了初級(jí)卵泡、生長(zhǎng)卵泡及排卵前卵泡，并研究了卵泡在體內(nèi)的生長(zhǎng)和內(nèi)分泌的活動(dòng)。隨后，Niocsia等[5]比較系統(tǒng)地建立了一套家兔各級(jí)卵泡的分離技術(shù)。20世紀(jì)80年代，Roy等[6]分離倉(cāng)鼠卵巢卵泡取得成功，部分已形成腔。Lisa建立了大鼠腔前卵泡新的培養(yǎng)體系,即多聚賴氨酸鋪層體外培養(yǎng)大腔前卵泡,在體外觀察到了卵泡內(nèi)膜的形成過(guò)程和卵泡腔的形成[7]。人的腔前卵泡研究比較晚，這是由于人卵巢組織的來(lái)源十分有限，加之一些社會(huì)因素，阻礙了人腔前卵泡的研究。Roy等[8]年首次報(bào)道了人腔前卵泡的分離和培養(yǎng)。Dolmans等[9]等改用純凈的膠原酶獲得數(shù)量少但是質(zhì)量好的人腔前卵泡。目前,嚙齒類動(dòng)物已從何原始卵泡培養(yǎng)到排卵、受精最終獲得了活的小鼠[10]。家畜類腔前卵泡的研究進(jìn)展也很大，取得突破性進(jìn)展的是Figueiredo等[11]建立了一套酶結(jié)合機(jī)械法成功的回收了大量牛的各級(jí)卵泡。Hirao等[12]先用酶法處理，再用機(jī)械法剝離豬卵巢卵泡，經(jīng)體外培養(yǎng)獲得成熟卵子，受精后實(shí)現(xiàn)精子穿入。Gpuat等[13]用機(jī)械方式分離水牛的小腔前卵泡，與牛卵巢間質(zhì)細(xì)胞或胎牛成纖維細(xì)胞共同培養(yǎng)可以存活30d。在國(guó)外，豬腔前卵泡實(shí)現(xiàn)在體外培養(yǎng)、生長(zhǎng)發(fā)育并獲得受精的能力。國(guó)內(nèi)其卵裂率達(dá)到60%,囊胚率為22%[14]。在牛上，腔前卵泡在無(wú)血清的培養(yǎng)系統(tǒng)中可以存活28d，并形成卵泡腔，成腔率達(dá)50%[15-16]。芮榮等[17]體外培養(yǎng)山羊腔前卵泡16d，獲得了1枚孤雌激活卵。且EGF(50ng/ml)與IGF-I(100ng/ml)的聯(lián)合培養(yǎng)能夠提高山羊腔前卵泡卵母細(xì)胞的生長(zhǎng)率和成活率[18]。

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