朱友林 邰順章

1.江蘇省鹽城市婦幼保健院，江蘇 鹽城 224007；2.江蘇省鹽城市藥品檢驗所，江蘇 鹽城 224002

克洛己新干混懸劑是頭孢克洛和鹽酸溴己新組成的混合制劑，適用于因敏感菌引起的呼吸道感染伴有黏稠痰液不易咳出的治療。現(xiàn)行質(zhì)量標準采用兩個色譜系統(tǒng)分別測定頭孢克洛和鹽酸溴己新的含量[1]，《中國藥典》2010年版收載的頭孢克洛干混懸劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑及鹽酸溴己新片，都采用HPLC法測定其含量[2]，文獻亦有報道采用高效毛細管電泳法、膠束電動毛細管色譜法等方法測定頭孢克洛含量[3-7]，采用反相離子對高效液相色譜法等方法測定鹽酸溴己新含量[8-10]。本實驗采用雙波長在一個色譜系統(tǒng)中同時測定克洛己新干混劑中兩種組分的含量，方法簡便、準確、重復(fù)性好，可用于本品的質(zhì)量控制，現(xiàn)報道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-20A高效液相色譜儀，CTO-20A柱溫箱，SPD-20A紫外檢測器，LC-20AB真空脫氣機，SIL-20A自動進樣器，島津LC-20A色譜工作站（日本島津公司），BP211D電子天平（德國Sartorius），CQ-250型超聲波清洗器（上海必能信超聲有限公司），6171型pH/mV測試器。

1.2 試藥

頭孢克洛對照品 （中國藥品生物制品檢定所，批號：130481-200503，含量：93.2%），鹽酸溴己新對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100427-200301），克洛己新干混懸劑（江蘇正大清江制藥有限公司，規(guī)格：每袋含頭孢克洛250 mg，鹽酸溴己新 8 mg，批號：110207、110215、110406），甲醇（色譜純，德國Merck公司），水（娃哈哈純凈水），其他化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

以 CAPCELL PAK C18MGⅡ （5μm，4.6 mm×250 mm）為色譜柱，0.005 mol/L四丁基氫氧化銨溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.2）-甲醇（45∶55）為流動相；用雙波長同時檢測，波長為254、249nm；流速為1.0mL/min；柱溫為30℃；進樣量為20μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸溴己新對照品40.12 mg，置20 mL的量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，作為鹽酸溴己新對照品濃溶液。另精密稱取頭孢克洛對照品42.98 mg，置50 mL的量瓶中，同時精密量取上述鹽酸溴己新對照品濃溶液1 mL置該量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照品儲備液。

2.3 樣品溶液的制備

取本品10袋的內(nèi)容物，研細，混勻，精密稱取適量（約相當于鹽酸溴己新8.77 mg），置50 mL量瓶中，加甲醇使溶解，超聲處理15 min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，靜置，取上清液5 mL置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 陰性樣品溶液的制備

按處方不加頭孢克洛和鹽酸溴己新，參照“2.2”項下方法操作，即得。

2.5 干擾試驗

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項下條件測定。結(jié)果表明，陰性樣品中在與頭孢克洛和鹽酸溴己新對照品保留時間相應(yīng)的位置無色譜峰，說明處方中其他組分對測定無干擾。色譜見圖1。

2.6 線性關(guān)系的考察

在“2.1”項色譜條件下，精密量取上述儲備液 2、5、8、10、12、15、18、20 μL，分別進樣，以進樣量對峰面積進行線性回歸，得頭孢克洛的回歸方程為：Y=6025403.785X-1338205.098，相關(guān)系數(shù)r=0.9961，鹽酸溴己新的回歸方程為：Y=13157845X+118 116.31，相關(guān)系數(shù)r=0.999 2。結(jié)果表明，頭孢克洛進樣量在1.602～16.020μg范圍內(nèi)， 鹽酸溴己新在 0.08024～0.80240μg范圍內(nèi)，進樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.7 檢出限及定量限測定

精密量取1 mL對照品溶液置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，進樣 1 μL，確定檢出限（S/N=3），頭孢克洛為 0.016 02μg，鹽酸溴己新為 0.000 802 4μg；進樣 5 μL，連續(xù)進樣5次，測定峰面積，計算得RSD頭孢克洛為1.2%，鹽酸溴己新為1.6%；確定定量限 （S/N=10），頭孢克洛為0.080 11μg，鹽酸溴己新為 0.004 012μg。

2.8 儀器精密度試驗

精密量取對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，計算得頭孢克洛和鹽酸溴己新的RSD分別為0.34%和0.62%，表明精密度良好。

2.9 穩(wěn)定性試驗

圖1 高效液相色譜圖

按“2.3”項下制備的樣品溶液，分別在 0、2、4、8、16、24 h進樣10 μL分析，測定頭孢克洛和鹽酸溴己新的峰面積并計算其RSD，頭孢克洛為0.72%，鹽酸溴己新為0.86%。表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 加樣回收試驗

精密稱取批號為110207的樣品2.735 2、2.876 1、2.785 1、2.767 9、2.803 1、2.791 8、2.784 2、2.808 5 g， 置 50 mL 量瓶中，以第1、2份平行測定，以確定樣品含量。在其余6份中各精密加入對照品溶液5 mL，按“2.3”項下方法制備溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，按“2.6”項下回歸方程計算。測得平均回收率（n=6）頭孢克洛為97.6%，RSD為0.80%；鹽酸溴己新為99.0%，RSD為1.40%。結(jié)果見表1。

2.11 樣品測定

對3批樣品進行測定，按“2.3”項下方法制備溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，按“2.6”項下回歸方程計算供試品的含量。每批樣品稱2份，每份溶液進樣2次。3批樣品的含量測定結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 供試品溶液制備方法選擇

預(yù)試時比較了直接溶解和超聲等不同的方法，結(jié)果超聲有利于供試液的制備，對測定結(jié)果無顯著差異。考察了甲醇和流動相作為溶劑以及不同的超聲時間，結(jié)果以先用甲醇溶解，超聲處理15 min，再用流動相稀釋溶解效果最佳。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3.2 色譜條件

分別考察了磷酸二氫鉀溶液-乙腈、四丁基氫氧化銨溶液-甲醇兩個系統(tǒng)的流動相，結(jié)果后者的峰形明顯改善，故本實驗采用了0.005 mol/L四丁基氫氧化銨溶液 （用磷酸調(diào)節(jié)pH3.2）-甲醇（45∶55）作為流動相。檢測波長的選擇，主要依據(jù)對頭孢克洛和鹽酸溴己新對照品進行全波長掃描，發(fā)現(xiàn)頭孢克洛和鹽酸溴己新在249 nm處都有吸收，頭孢克洛在254 nm的波長處吸收值大于249 nm波長處，線性關(guān)系也優(yōu)于249 nm波長處，說明其在254 nm波長處更穩(wěn)定，而鹽酸溴己新在254 nm的波長處幾乎無吸收，因此在254 nm的波長處檢測頭孢克洛，在249 nm處檢測鹽酸溴己新。兩組分同時檢測簡化，省時。

[1]國家食品藥品監(jiān)督管理局.國家食品藥品監(jiān)督管理局標準（試行）[S].19號.2005.YBH15322005.

[2]國家藥典委員會.中國藥典[S].二部.2010：186-188，799-780.

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