湯迎爽，康阿龍

祖師麻(Cortex Daphnes)為瑞香科植物黃瑞香 Daphnegiraldii Nitsche、陜甘瑞香 Daphne tangutica Maxim.和凹葉瑞香 Daphne retusa Hemsl.的干燥根皮與莖皮，始載于《陜西中草藥》，味辛、苦，性溫，有小毒，歸肝經(jīng)，具祛風(fēng)除濕、活血止痛功能，用于風(fēng)濕痹痛、關(guān)節(jié)疼痛、跌打損傷、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[1]，臨床療效顯著。由其開發(fā)的制劑有祖師麻片、祖師麻注射液、黃瑞香注射液、祖師麻膏藥、祖師麻關(guān)節(jié)止痛膏等，臨床和制劑使用量很大，但由于其藥用部位為皮部，采收方式幾乎是毀滅性的，對主產(chǎn)地植被造成嚴重破壞，林區(qū)也大都實行了自然保護，限制采挖。為尋找其替代物，筆者在調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，采收加工過程后白白浪費的葉子，在對其進行成分預(yù)試后發(fā)現(xiàn)含有香豆素類成分。祖師麻藥材(根皮和莖皮)起主要藥效作用的成分祖師麻甲素[2－3]，對其皮部含量進行測定的文獻已有較多報道[4－6]，但未見有對其葉子中含量進行分析研究。為了給祖師麻葉的開發(fā)利用提供依據(jù)，筆者建立了測定其含量的高效液相色譜法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

美國熱電P4000型高效液相色譜儀，UV1000檢測器，SEPU3000數(shù)據(jù)工作站(杭州普惠)。祖師麻甲素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為0900－200001，供含量測定用);3批祖師麻葉及皮(自采)，均經(jīng)西安市藥品檢驗所謝志明主任藥師鑒定，為黃瑞香 Daphnegiraldii Nitsche的葉與皮;甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:DiamonsiLTMC18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 －0.5%磷酸(20∶80);檢測波長:327 nm;柱溫:室溫;流速:1 mL/min;進樣量:10μL。對照品及祖師麻葉和祖師麻皮部色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

精密稱取祖師麻甲素對照品 2.04 mg，置 10 mL 量瓶中，加85%乙醇使溶解，即得對照品溶液。分別取樣品粗粉約10 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入85%乙醇20 mL，浸漬過夜，將其另裝入適宜的滲漉筒中，再加入85%乙醇80 mL，以1 mL/(cm2·min)滴速進行滲漉，收集滲漉液，用85%乙醇定容至100 mL搖勻，濾過，再精密度該溶液1 mL，繼用85%乙醇稀釋并定容至25 mL，搖勻，濾過，制得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密稱取祖師麻甲素對照品5.10mg，置100mL量瓶中，加 85% 乙醇至刻度，搖勻，分別精密吸取 2，4，6，8，10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積，并以峰面積對進樣量進行回歸，得回歸方程 Y=75 021X+12 995，r=0.999 9。結(jié)果表明，祖師麻甲素進樣量在0.102～0.510μg范圍內(nèi)與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液10μL，重復(fù)進樣6次，依法測定。結(jié)果的 RSD為0.82%(n=6)，說明儀器精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖

穩(wěn)定性試驗:取同一祖師麻葉供試品溶液，分別放置0，2，4，6，8 h，各精密吸取10μL，注入液相色譜儀測定。結(jié)果祖師麻甲素含量的 RSD為1.26%(n=5)，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗:取同一批祖師麻葉樣品適量，精密稱取6份，每份約0.5 g，依法制備供試品溶液，在上述色譜條件下分析測定。結(jié)果祖師麻甲素平均含量為0.81%，RSD為1.64%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗:稱取已知含量(0.81%)的祖師麻葉樣品0.25 g，共 6份，精密稱定，各精密加入對照品溶液(0.401 g/L)5 mL，按供試品溶液制備方法制成待測溶液，按上述色譜條件測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 祖師麻甲素加樣回收測定結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

分別精密對照品溶液和供試品溶液各10μL，進樣測定。結(jié)果 3批祖師麻葉樣品的含量分別為 0.81%(皮部 0.45%)，0.56%(皮部 0.21%)和 0.63%(皮部 0.36%)。

3 討論

曾比較了滲漉、浸漬、回流、連續(xù)回流4種不同提取方法的提取效率，結(jié)果顯示同一批樣品祖師麻甲素含量分別為0.81%，0.34%，0.38%，0.41%，滲漉法提取效率明顯較優(yōu)。雖然滲漉法相比其他幾種方法操作稍麻煩，但其提取效率較優(yōu)，最終確定以滲漉法為樣品提取方法。有關(guān)滲漉法可大幅提高其提取效率的原因，有待進一步深入探討。還考察了不同提取溶劑(95%乙醇、85%乙醇、65%乙醇、甲醇、85%甲醇、65%甲醇)的提取效率，結(jié)果顯示，85%乙醇提取效率最高。

祖師麻藥材在陜西秦嶺地區(qū)的太白山有較大的蘊藏量，3個主要品種均有分布，其中以主流品種黃瑞香的分布較多，含量較高，而市場商品藥材以黃瑞香和陜甘瑞香為主。故后續(xù)還需進一步考察陜甘瑞香以及不同生長季節(jié)的葉子樣品，為其資源的開發(fā)提供理論依據(jù)。

[1]國家中醫(yī)藥管理局.中華本草(第5冊)[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999:407.

[2]李書慧，吳立軍，殷紅英.祖師麻化學(xué)和藥理活性研究進展[J].中國中藥雜志，2002，27(6):401.

[3]張文亮，李榮亨.瑞香素藥理作用研究現(xiàn)狀[J].實用中醫(yī)藥雜志，2007，23(6):402.

[4]黨秋萍，周 軍，劉建蜂.HPLC法測定祖師麻藥材中祖師麻甲素的含量[J].陜西中醫(yī)，2006，27(6):734.

[5]位海強，袁才英，楊金鳳，等.祖師麻質(zhì)量標準研究[J].廣東藥學(xué)，2004，14(3):1.

[6]蔣以號，楊武亮，陳海芳，等.HPLC測定不同基源及不同產(chǎn)地祖師麻中祖師麻甲素[J].中草藥，2008，39(7):10.