徐 鵬，許 娟，朱麗婷 ，魏仁榮，賀福元，石繼連

谷芽為禾本科植物稻 Oryza sativa L.的成熟果實(shí)經(jīng)發(fā)芽干燥而得。2010年版《中國(guó)藥典(一部)》收載了生谷芽、炒谷芽及焦谷芽等常用的3種炮制品，生谷芽具有和中消食、健脾開胃的功效，用于食積不消、腹脹口臭、脾胃虛弱、不饑食少;炒谷芽偏于消食，用于不饑食少;焦谷芽善化積滯，用于積滯不消[1]。目前，關(guān)于谷芽炮制品α-淀粉酶激活劑(硝酸根離子和氯離子)的研究尚未見(jiàn)國(guó)內(nèi)外有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。為此，本研究中分別用紫外分光光度法測(cè)定硝酸根離子，用滴定法測(cè)定氯離子，發(fā)現(xiàn)谷芽3種炮制品中含有不同含量的α-淀粉酶激活劑。本法操作簡(jiǎn)便精確、快速經(jīng)濟(jì)，為谷芽炮制機(jī)理的進(jìn)一步研究提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

TU-1900型雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);AR1140型分析天平(上海力衡儀器儀表有限公司);CLJBQ-1型電熱套(西安中諾爾儀器有限公司);2XZ-1型真空泵(上海比朗儀器有限公司);800型調(diào)速電動(dòng)離心機(jī)(金壇市岸頭良友實(shí)驗(yàn)儀器廠);DS-3510DT型超聲波清洗器(上海生析超聲儀器有限公司)。稻谷購(gòu)于長(zhǎng)沙市望城區(qū)黃金鄉(xiāng)，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院楊梓懿教授鑒定為禾本科植物稻 Oryza sativa L.的成熟新鮮干燥果實(shí);試劑均為分析純，水為自制蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 不同炮制品的制備[2]

生谷芽:取成熟而飽滿的稻，用清水浸泡至六七成透，撈出，置能排水的容器內(nèi)，覆蓋，每日淋水1～2次，保持濕潤(rùn)，待須根長(zhǎng)至1 cm時(shí)，取出曬干，除去雜質(zhì)。

炒谷芽:取凈生谷芽置炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒至表面深黃色，大部分暴裂，并有香氣逸出時(shí)，取出晾涼，篩去灰屑。

焦谷芽:取凈生谷芽置炒制容器內(nèi)，用中火加熱，炒至表面焦黃色，大部分暴裂，并有焦香氣逸出時(shí)，取出晾涼，篩去灰屑。

2.2 硝酸根離子的測(cè)定[3]

2.2.1 溶液制備

精密稱取在105℃烘干1 h的硝酸鉀0.163 1 g，加水溶解定容至1 000 mL，作為貯備溶液。取貯備溶液10.0 mL，置100 mL量瓶中，用水定容至刻度，即得含硝酸根0.010 mg/mL的對(duì)照品溶液。分別精密稱取2.1項(xiàng)下方法制備的炮制品粗粉(過(guò)二號(hào)篩)各5 g，置具塞錐形瓶中，精密加水100 mL，水浴提取15 min，冷卻，補(bǔ)重，離心，取上清液作為供試品溶液。

2.2.2 樣品分析

精密吸取供試品溶液50 mL，加入100 mL的量瓶中，加入鹽酸溶液1 mL，搖勻。加入5 mL氨基磺酸銨溶液，加水稀釋至刻度，搖勻。于分光光度計(jì)上210 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。

2.2.3 方法學(xué)考察

空白試驗(yàn):取50 mL水，置100 mL的量瓶中，按2.2.2項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示空白對(duì)照無(wú)干擾。

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:分別精密吸取對(duì)照品溶液 1，5，10，20，30，40，50 mL，分別置100 mL量瓶中，按2.2.2項(xiàng)下方法操作，測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)、硝酸根質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=0.084 4X+0.356 4，r=0.999 1(n=7)。結(jié)果，表明，硝酸根質(zhì)量濃度在0.1～5.0μg/mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取同一供試品溶液，連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算其吸光度的 RSD為0.09%，表明方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取2 mL供試品溶液，分別于配制后0，1，2，4，8，12，24 h時(shí)依法測(cè)定其吸光度。結(jié)果的 RSD為1.09%(n=7)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批炮制品6份，按2.2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液后，按2.2.2項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，其 RSD為0.72%，說(shuō)明方法有較好的重復(fù)性。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量的炮制品6份，各0.1 g，分別精密加入高、中和低劑量的對(duì)照品各2份，按2.2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液后，按2.2.2項(xiàng)下方法測(cè)定其吸光度，計(jì)算平均回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.2.4 樣品含量測(cè)定

精密稱取3種炮制品各3份，按2.2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液后，按2.2.2項(xiàng)下方法測(cè)定其吸光度，計(jì)算硝酸根的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

2.3 氯離子的測(cè)定

2.3.1 溶液制備

取17 g硝酸銀，精密稱定，加水溶解后，置1 000 mL量瓶中加水稀釋至刻度，即得0.1 mol/L的硝酸銀滴定液。取1.65 g硝酸銀，精密稱定，經(jīng)270～300℃烘干的基準(zhǔn)氯化鈉，置1 000 mL量瓶中，加水定容至刻度，混勻，貯存在塑料瓶中，得氯離子標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3.2 硫氰酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備與標(biāo)定

稱取7.6 g硫氰酸銨置1 L量瓶中，加水定容至刻度。精密吸取5 mL氯離子標(biāo)準(zhǔn)溶液，置150 mL燒杯中，加入5 mL硝酸，用微量滴定管加入硝酸銀滴定液8 mL，加熱，微沸至沉淀凝聚，稍冷，加2 mL高鐵銨釩指示劑，用硫氰酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定過(guò)量的硝酸銀，至出現(xiàn)粉紅色為止。同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)。硫氰酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液的實(shí)際質(zhì)量濃度 C(mol/L)=m/[0.035 45×(V0-V)]，式中 m為所取氯離子標(biāo)準(zhǔn)溶液中氯離子的質(zhì)量(g)，V0為空白試驗(yàn)(即8 mL硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液)所用硫氰酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(mL)，V為滴定過(guò)量硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液所用硫氰酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(mL)，0.035 45 相當(dāng)于 1.00 mL 硝酸銀溶液[C(AgNO3)=1.000 mol/L]的氯離子質(zhì)量(g)。

2.3.3 硫酸高鐵銨指示劑的制備

稱取40 g硫酸高鐵銨，加100 mL水溶解，加入約2 mL硝酸，使棕色消失，即得。

2.3.4 供試品溶液的制備與滴定

分別精密稱取3種炮制品粉末(過(guò)二號(hào)篩)5.0 g，置100 mL量瓶中，加50 mL水，超聲提取20 min，使氯完全浸出，用水稀釋至刻度，混勻，過(guò)濾。精密吸取濾液50 mL，置250 mL錐形瓶中，加5 mL硝酸，用微量滴定管加入8 mL硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液，加熱微沸，以驅(qū)除含氮氧化物，冷卻，即得供試品溶液。加入2 mL硫酸高鐵銨指示劑，用硫氰酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定過(guò)量的硝酸銀，直至出現(xiàn)粉紅色為止。按以下公式進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2。氯離子百分含量(%)=〔(V0-V)× C ×0.035 45/m〕×100，式中 V0為空白試驗(yàn)(即8 mL硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液)所用硫氰酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液體積(mL)，V為滴定試樣所用硫氰酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(mL);C為硫氰酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度(mol/L);0.035 45為相當(dāng)于1.00 mL硫氰酸銨溶液〔C(NH4CNS)=1.000 mol/L〕的氯離子質(zhì)量(g);m為滴定時(shí)所用的試樣質(zhì)量(g)。

3 討論

硝酸根離子與氯離子均為谷芽的α-淀粉酶激活劑。本試驗(yàn)利用紫外分光光度法測(cè)定硝酸根，該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可廣泛用于硝酸根離子的測(cè)定，但與文獻(xiàn)[3]中方法略有出入。由于3種谷芽炮制品中有機(jī)物在275 nm波長(zhǎng)處吸收較大，若用該文獻(xiàn)中的計(jì)算方法，對(duì)結(jié)果會(huì)造成很大影響，而硝酸根在275 nm波長(zhǎng)處幾乎無(wú)吸收，所以本試驗(yàn)無(wú)需在275 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。試驗(yàn)結(jié)果表明，谷芽經(jīng)過(guò)加熱炮制后，其硝酸根離子含量降低。

硝酸銀容量法系經(jīng)典方法，該法簡(jiǎn)單，適用于低濃度氯離子的測(cè)定。試驗(yàn)中由于指示劑顏色干擾大，加上3種炮制品本身也有顏色，使得滴定終點(diǎn)不夠明顯，采用空白對(duì)照滴定，結(jié)果較準(zhǔn)確。由試驗(yàn)結(jié)果可知，谷芽經(jīng)過(guò)加熱炮制后，其含量呈下降趨勢(shì)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:352.

[2]龔千鋒.中藥炮制學(xué)[M].北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2003:338-340.

[3]DZ/T 0064.59-93，地下水質(zhì)檢驗(yàn)方法:紫外分光光度法測(cè)定硝酸根[S].