叢 佳,李 輝,周道斌,趙永強(qiáng),許 瑩,李 劍,韓 冰
(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院血液內(nèi)科,北京 100730)
84例慢性淋巴細(xì)胞白血病遺傳學(xué)異常及預(yù)后分析
叢 佳,李 輝,周道斌*,趙永強(qiáng),許 瑩,李 劍,韓 冰
(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院血液內(nèi)科,北京 100730)
目的 探討熒光原位雜交(FISH)技術(shù)檢測(cè)慢性淋巴細(xì)胞白血?。–LL)患者的遺傳學(xué)異常,并分析與其他預(yù)后指標(biāo)的相關(guān)性及預(yù)后價(jià)值。方法 回顧性分析采用FISH技術(shù)進(jìn)行著絲粒探針CSP12(12p11.1~12q11.1)和序列特異性探針D13s25(13q14.3)、ATM(11q22.3)、RB1(13q14)、P53(17p13.1)檢測(cè)過(guò)的84例CLL患者的臨床及實(shí)驗(yàn)室資料。分析FISH技術(shù)檢測(cè)CLL患者中遺傳學(xué)異常的發(fā)生率,并分析遺傳學(xué)異常與CLL患者年齡、性別、Binet分期、血清乳酸脫氫酶(LDH)、CD38表達(dá)、生存期之間的相關(guān)性。結(jié)果 1)84例CLL患者中,62例有至少有1種遺傳學(xué)異常,檢出率為73.8%。2)共發(fā)現(xiàn)5種遺傳學(xué)異常,依次為13q14缺失(56%)、P53缺失(28.6%)、-12(16.7%)、ATM缺失(13.1%)、+12(13.1%)。其中-12為CLL患者中新發(fā)現(xiàn)遺傳學(xué)異常。3)分析上述5種遺傳學(xué)異常與年齡、性別、Binet分期、LDH水平及CD38表達(dá)的關(guān)系,在>60歲年齡患者里,+12陽(yáng)性率顯著高于<60歲患者(24%vs 3%,P<0.05),與性別、Bient分期、LDH水平、CD38表達(dá)無(wú)關(guān)。4)在LDH增高組中,CD38高表達(dá)的病例比例增高(67%vs 20%,P<0.05)。5)伴有del(17p13)或del(11q22)或復(fù)雜異常中位生存時(shí)間為75個(gè)月,單純具有del(13q14)異常組的中位生存時(shí)間為150個(gè)月,其他中位生存時(shí)間為120月,但兩兩比較沒(méi)有達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論 1)FISH技術(shù)是一種在分析CLL患者遺傳學(xué)異常方面較為快速、準(zhǔn)確和敏感的方法;2)CLL患者中除了常見13q14缺失、P53缺失、ATM缺失及+12之外,還可以出現(xiàn)-12異常。
白血病;淋巴細(xì)胞;慢性;熒光原位雜交
*通信作者(corresponding author):daobinzhou@yahoo.com
慢性淋巴細(xì)胞白血病(chronic lymphatic leukemia,CLL)是造血系統(tǒng)的一種單克隆性B淋巴細(xì)胞增殖性疾病,具有顯著的臨床預(yù)后異質(zhì)性,一些患者可生存20年以上,另一些患者則在幾個(gè)月內(nèi)死亡。雖然Rai、Binet分期是CLL的重要預(yù)后指標(biāo),其他指標(biāo)如游離的 CD23(sCD23)、β2微球蛋白(β2-MG)、乳酸脫氫酶(LDH)、CD38、ZAP70(+)、IgVH突變也可預(yù)測(cè)患者的預(yù)后,但各項(xiàng)預(yù)后指標(biāo)均有局限性。最近的研究表明遺傳學(xué)異常是CLL預(yù)后和進(jìn)展的重要預(yù)測(cè)因素[1]。本研究探討CLL患者遺傳學(xué)異常與其他預(yù)后指標(biāo)的相關(guān)性及預(yù)后價(jià)值。
2009年2 月~2011年8月北京協(xié)和醫(yī)院住院和門診收治的84例CLL患者,所有病例診斷均符合張之南主編的《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》第3版[2]。其中男性 56例,女性 28例,男:女比為2.0∶1,年齡36~88歲,中位年齡61歲。
患者均進(jìn)行了熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,F(xiàn)ISH)檢測(cè)。5種探針:CSP12(12p11.1 ~ 12q11.1)、D13S25(13q14.3)、ATM(11q22.3)、RBl(13q14)及 P53(17p13.1)(北京金菩嘉公司)。按照說(shuō)明書流程操作,每例患者至少計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞。閾值采用10例健康人外周血均值+標(biāo)準(zhǔn)差×3。
回顧性分析84例患者的臨床資料,包括:CLL的臨床Binet分期及實(shí)驗(yàn)室檢查,乳酸脫氫酶、CD38結(jié)果。
使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件,比較用卡方檢驗(yàn)及Monta Carlo計(jì)算概率值,生存分析采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線和Log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行生存率的比較。
男性56例,女性28例,男∶女比為2.0∶1,年齡36~88歲,中位年齡61歲。51例有詳細(xì)病歷資料可以進(jìn)行Binet分期,Binet分期以C期患者為主。所有的患者均進(jìn)行了FISH檢測(cè),有62例患者至少有1種遺傳學(xué)異常。62例患者進(jìn)行了CD38檢測(cè),17例陽(yáng)性。62例患者進(jìn)行了LDH檢測(cè),其中13例LDH增高 (表1)。
遺傳學(xué)異常的種類包括:13q-(包括RB1缺失或/和D13S25缺失),P53基因缺失,-12,ATM 缺失,+12(圖1)。
84例患者中有62例(73.8%)至少有1種遺傳學(xué)異常:有1例(1.2%)患者同時(shí)有4種遺傳學(xué)異常(13q-、P53基因缺失,ATM缺失,-12共存),有8例(9.5%)同時(shí)有3種遺傳學(xué)異常(13q-,P53基因缺失,ATM缺失,-12 4種缺失中有3種),有19例(22.6%)同時(shí)有 2種遺傳學(xué)異常,有 34例(40.4%)有1種遺傳學(xué)異常。遺傳學(xué)異常最常見的為13q-,占56%,其中包括3種形式:D13S25缺失19%,RB1缺失3.6%,二者共缺失33.3%;其他依次為 P53基因缺失(28.6%),-12(16.7%),ATM缺失(13.1%),+12(13.1%)。各種遺傳學(xué)異?;騿为?dú)存在,或合并其他異常(表2)。
將檢測(cè)到的不同遺傳學(xué)異常同性別、年齡、Binet分期、LDH水平及CD38表達(dá)進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)在>60歲年齡患者里,+12陽(yáng)性率顯著高于<60歲患者(24%vs 3%,P<0.05),未發(fā)現(xiàn)其他相關(guān)性(表3)。
表1 患者一般資料Table 1 Clinical characteristics
表2 各種不同遺傳學(xué)異常的結(jié)果Table 2 Results of genetics abnormality
圖1 各種遺傳學(xué)異常圖像Fig 1 Images of genetics abnormality
表3 FISH檢測(cè)的遺傳學(xué)異常與臨床及實(shí)驗(yàn)室檢查的關(guān)系Table 3 Relationship of genetics abnormality and clinical characteristics
CD38表達(dá)與性別、年齡、Binet分期、LDH是否增高進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)CD38表達(dá)與否與LDH水平是否增高相關(guān),在LDH增高組中,CD38表達(dá)陽(yáng)性的病例比例增高(67%vs 20%,P<0.05),而與性別、年齡分組、Binet分期無(wú)關(guān)。
對(duì)53例有聯(lián)系方式的患者進(jìn)行了電話隨訪,隨訪至2011年9月,中位隨訪時(shí)間26(1~150)個(gè)月。5例患者因疾病進(jìn)展于發(fā)病后1、3、7、16和56個(gè)月死亡,其中1例患者死于CLL繼發(fā)的難以控制的自身免疫性貧血,另外4例患者死于原發(fā)病進(jìn)展。5例患者中3例患者具有del(17p13)或del(11q22)異?;驈?fù)雜異常(定義為兩種或兩種以上遺傳學(xué)異常)。其中9例單純del(13q14)異常中,無(wú)1例患者死亡。生存分析結(jié)果顯示,各預(yù)后相關(guān)因素中,年齡(>60歲 vs<60歲)、Binet分期、CD38與生存期無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。各遺傳學(xué)異常中,伴有del(17p13)或del(11q22)或復(fù)雜異常預(yù)計(jì)中位生存時(shí)間為75個(gè)月,單純具有del(13q14)異常組的預(yù)計(jì)中位生存時(shí)間為150個(gè)月,其他患者預(yù)計(jì)中位生存時(shí)間為120月(圖2)。
圖2 各種遺傳學(xué)異常的生存率比較Fig 2 Survival time of patients with different genetics abnormality
CLL作為一種預(yù)后異質(zhì)性很強(qiáng)的疾病,評(píng)價(jià)預(yù)后指標(biāo)眾多,而越來(lái)越多的研究表明遺傳學(xué)異常具有重要的判斷預(yù)后的價(jià)值[1]。但常規(guī)染色體顯帶技術(shù)僅20%的人可檢測(cè)到克隆性遺傳學(xué)異常,隨著間期FISH在CLL細(xì)胞遺傳學(xué)研究中的應(yīng)用,超過(guò)80%的CLL患者可檢測(cè)到基因組異常,大大提高了CLL的基因異常檢出率[3]。
國(guó)內(nèi)外多數(shù)研究[3-6]發(fā)現(xiàn),通過(guò)FISH技術(shù)檢測(cè)的CLL患者的遺傳學(xué)異常陽(yáng)性率在64%~82%,del(13q14)最常見,而 del(17p13)、+12和 del(11q22)不同研究比例略有不同。本研究中結(jié)果同以往的研究類似,但新發(fā)現(xiàn)12號(hào)染色體缺失。本研究12號(hào)染色體缺失信號(hào)比例平均為10.23%(7%~22%),經(jīng)過(guò)多人多次復(fù)核,明顯高于我院12號(hào)染色體缺失的閾值6.02%,排除了假陽(yáng)性的可能。雖然從年齡分組、性別、Binet分期、LDH水平以及CD38表達(dá)未發(fā)現(xiàn)中12號(hào)染色體缺失CLL患者有何特殊之處,但由于隨訪時(shí)間及患者數(shù)有限,其臨床及預(yù)后意義有待于觀察或其他研究進(jìn)一步證實(shí)。
以往的研究[7-8]顯示具有+12遺傳學(xué)異常更容易出現(xiàn)不典型的形態(tài),容易向幼淋細(xì)胞白血病轉(zhuǎn)化,表達(dá)更強(qiáng)的SmIg與FMC7,預(yù)后更差,Binet分期也更晚,容易在B或C期。本研究發(fā)現(xiàn)+12遺傳學(xué)異常在>60歲年齡組中更易出現(xiàn),但是沒(méi)有發(fā)現(xiàn)與Binet分期的相關(guān)性,原因可能與標(biāo)本例數(shù)偏少有關(guān)。
各種遺傳學(xué)異常對(duì)預(yù)后的影響各不相同。伴del(13q14)[3]異常的患者中位生存期133個(gè)月,無(wú)治療生存期長(zhǎng)達(dá)92個(gè)月。另一項(xiàng)研究[9]發(fā)現(xiàn)伴有其他易位的患者中位無(wú)治療生存期明顯短于單純del(13q14)患者。而伴P53基因(17p13)缺失CLL患者,病程進(jìn)展快、瘤細(xì)胞負(fù)荷高、多處于疾病晚期(Binet B/C期),對(duì)多種治療(包括核苷類似物)反應(yīng)差,生存期短[10-11]。ATM 基因位于染色體11q22,伴有ATM基因缺失的CLL患者發(fā)病年齡較年輕,一般<55歲,且病程常表現(xiàn)為侵襲性,預(yù)后差,提示del(11q22)可作為疾病進(jìn)展的一個(gè)早期指標(biāo)[12-13]。本研究同樣發(fā)現(xiàn),單純 del(13q14)的中位生存期最長(zhǎng),而伴有del(17p13)或del(11q22)或復(fù)雜異常中位生存時(shí)間最短,但未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,這可能與本研究隨訪樣本量以及隨訪時(shí)間不夠有關(guān),可進(jìn)一步加長(zhǎng)隨訪時(shí)間。
CD38的表達(dá)作為慢性淋巴細(xì)胞白血病患者獨(dú)立的預(yù)后因素逐漸引起人們的重視。有研究[14]發(fā)現(xiàn)CD38表達(dá)水平與IgV(H)的突變密切相關(guān),CD38+的患者預(yù)后更差。另一項(xiàng)研究[15]發(fā)現(xiàn)CD38+患者無(wú)進(jìn)展生存期(PFS)較CD38-者明顯縮短,5年P(guān)FS分別為37%與75%。CD38還是疾病侵襲性的一個(gè)重要標(biāo)志,無(wú)論患者的臨床分期如何,即使處于Rai分期的0期,CD38+患者亦常具有明顯的侵襲性。本研究發(fā)現(xiàn)LDH增高的患者中表達(dá)CD38的比例更高,而LDH在CLL中與腫瘤負(fù)荷密切相關(guān),這同樣提示CD38表達(dá)為預(yù)后不良指標(biāo),今后在臨床工作中也需要引起我們重視。
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Cytogenetic abnormalities in patients with chronic lymphocytic leukemia and their prognostic significance
CONG Jia,LI hui,ZHOU Dao-bin*,ZHAO Yong-qiang,XU Ying,LI Jian,HAN bing
(Dept.of Hematology,PUMC Hospital of CAMS,Beijing 100730,China)
ObjectiveTo investigate the significance of fluorescence in situ hybridization(FISH)in detecting cytogenetic aberrations in Chinese patients with chronic lymphocytic leukemia(CLL)and explore the characteristics and prognostic significance of cytogenetic aberrations in Chinese patients with CLL.MethodsEighty-four cases of CLL detected by FISH with a panel of probes(CSP12(12p11.1 ~12q11.1),D13s25(13q14.3),ATM(11q22.3),RB1(13q14),p53(17p13.1))were retrospectively analyzed by clinical manifestations,laboratory tests and prognosis.ResultsCytogenetic aberrations were found in 62 of the 84 CLL patients(73.8%).The most frequent abnormality detected was del(13q14)(56%),followed by del(17p13)(28.6%),del12(16.7%),del(11q22.3)(13.1%),trisomy 12(13.1%).There was no significant relationship among cytogenetic aberrations and sex,Binet stages,level of lactate dehydrogenase,expression of CD38.The proportion of CD38 expression in LDH elevation group was significantly higher than that of LDH normal group.The median survival time with del(17p13),or del(11q22.3)or complex cytogenetic aberrations was 75 months,the median survival time with sole del(13q14)was 150 months,the median survival time with the others was 120 months,but there was no significant deference with each other.ConclusionsFISH is a rapid,accurate and sensitive technique for detection of cytogenetic aberration in CLL.The frequencies of the chromosomal abnormalities in Chinese CLL patients are similar to those in Western countries,but the aberration of 12 deletion is a novel discovery.
Leukemia;lymphocytic;chronic;fluorescence in situ hybridization
R 557+.4
A
1001-6325(2012)01-0001-06
2011-09-30
2011-11-23