劉馨蓮，殷 舞

(1成都醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，成都610083;2廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院)

微小染色體維持蛋白(MCMs)是一組與DNA復(fù)制和細(xì)胞增生密切相關(guān)的蛋白家族［1］，其能與復(fù)制子結(jié)合，使DNA復(fù)制成為可能，是DNA復(fù)制啟動(dòng)和延伸的必需因子之一，屬于一種與DNA復(fù)制有關(guān)的解鏈酶［2］。細(xì)胞增殖核抗原(Ki-67)是目前公認(rèn)的評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖狀態(tài)的指標(biāo)，其在病理診斷中應(yīng)用最為廣泛。2005年9月～2009年9月，我們觀察了前列腺癌組織中MCM5和Ki-67的表達(dá)，旨在進(jìn)一步探討前列腺癌的發(fā)生機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 選擇廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院病理科前列腺癌組織標(biāo)本50份(腫瘤組)，患者年齡52～86(73±8.4)歲，均經(jīng)病理檢查確診，其中高分化12例、中分化15例、低分化23例;Jewett分期為A期8例、B期16例、C期17例、D期9例。另選取15份良性前列腺增生組織作為對(duì)照(增生組)。兩組患者一般資料無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。主要試劑:MCM5單克隆抗體(NeomakersFremont公司)，鼠抗人Ki-67單克隆抗體與S-P試劑盒(北京中杉生物技術(shù)開發(fā)公司)，DAB試劑盒(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司)。

1.2 MCM5和Ki-67表達(dá)檢測 標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定，普通石蠟包埋，4μm連續(xù)切片。采用免疫組化SP法檢測MCM5和Ki-67表達(dá):DAB顯色。石蠟切片脫蠟水化后，微波抗原修復(fù)，過氧化酶阻斷劑滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性，羊血清工作液封閉，滴加一抗4℃過夜，滴加生物素標(biāo)記的二抗，滴加鏈親和素—過氧化物酶溶液。DAB顯色，蘇木精復(fù)染。用已知宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織切片為陽性對(duì)照，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):MCM5和Ki-67的陽性信號(hào)均定位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒。以標(biāo)記指數(shù)(LI)表示陽性表達(dá)情況:選取組織結(jié)構(gòu)良好、背景清晰的不重復(fù)高倍視野10個(gè)(其中包括陽性信號(hào)集中區(qū)及稀疏區(qū))，計(jì)算每高倍視野下100個(gè)腫瘤細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)，取10個(gè)視野的平均值，即為LI。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量數(shù)據(jù)采用±s表示，進(jìn)行One-way ANOVA分析或組間均數(shù)差異t檢驗(yàn)，Bivariate Correlation行相關(guān)性分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 MCM5、Ki-67表達(dá)情況 腫瘤組及增生組MCM5 的 LI分別為 21.36 ±7.50、2.05 ±1.18，P ＜0.05;Ki-67 的 LI分別為13.56 ±6.62、1.05 ±0.53，P ＜0.05。

2.2 MCM5、Ki-67表達(dá)與前列腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 見表1。

表1 MCM 5、K i-67表達(dá)與前列腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(±s)

表1 MCM 5、K i-67表達(dá)與前列腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(±s)

臨床病理參數(shù) n MCM5(LI) Ki-67(LI) P值病理分級(jí)高分化 12 13.67 ±1.83 6.75 ±1.54中分化 15 16.40±3.29 9.20±1.37 ＜0.05低分化 23 28.61 ±3.58 19.96 ±3.77臨床分期A 期 8 12.88 ±1.64 6.13 ±1.46 B 期 16 15.50 ±2.61 8.63 ±1.09 ＜0 17 26.06 ±4.12 17.39 ±4.26 9 30.44 ±3.91 22.25 ±3.92.05 C 期D期

2.3 相關(guān)性分析 前列腺癌中MCM5與Ki-67表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.954，P ＜0.01)。

3 討論

細(xì)胞增殖失控、成熟受阻是腫瘤發(fā)生的重要機(jī)制之一。評(píng)價(jià)腫瘤細(xì)胞的增殖狀態(tài)對(duì)研究腫瘤的生物學(xué)行為及提示預(yù)后有重要意義。

MCM蛋白是一類存在于真核生物中高度保守的蛋白質(zhì)，其表達(dá)水平隨細(xì)胞周期的進(jìn)展而變化。G1早期，其同復(fù)制起始點(diǎn)識(shí)別復(fù)合物的結(jié)合被認(rèn)為是DNA復(fù)制合成的開始，其表達(dá)水平在G1/S轉(zhuǎn)換點(diǎn)達(dá)到峰值，當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入G0期或分化、衰老時(shí)，MCM表達(dá)水平迅速下降甚至不表達(dá)［3］。說明MCM蛋白與細(xì)胞周期密不可分，是啟動(dòng)真核細(xì)胞DNA復(fù)制、調(diào)控細(xì)胞由G1進(jìn)入S期的關(guān)鍵蛋白，可作為細(xì)胞增殖早期的特殊標(biāo)記物［4］。MCM5是MCM蛋白復(fù)合物成分之一，其表達(dá)穩(wěn)定，可直接反映MCM蛋白的表達(dá)水平，是判斷細(xì)胞增殖的可靠標(biāo)志物［5］。Murphy等［6］檢測宮頸標(biāo)本時(shí)發(fā)現(xiàn)，正常宮頸鱗狀上皮中幾乎沒有MCM5表達(dá)，而在宮頸上皮內(nèi)瘤變標(biāo)本及宮頸鱗癌標(biāo)本中MCM5的表達(dá)卻逐漸增強(qiáng)，提示MCM5能較好反映腫瘤細(xì)胞的增殖特性，對(duì)腫瘤的診斷有一定意義。

Ki-67是目前在病理診斷中應(yīng)用最為廣泛的細(xì)胞增殖標(biāo)記。研究顯示，Ki-67在細(xì)胞的G0期不表達(dá)，到G1的中、后期出現(xiàn)表達(dá)，S期和G2期表達(dá)逐漸增強(qiáng)，在有絲分裂期達(dá)到高峰，分裂后迅速降解，半衰期為1 h左右。隨著上皮細(xì)胞損傷程度增加，Ki-67表達(dá)率也明顯升高［7］，但與MCM5相比，部分處于G1早、中期的增殖細(xì)胞不表達(dá)Ki-67，因此由Ki-67的表達(dá)水平估計(jì)的腫瘤的生長分?jǐn)?shù)可能會(huì)低于實(shí)際的生長分?jǐn)?shù)［1］。本研究腫瘤組MCM5、Ki-67表達(dá)均明顯高于增生組，MCM5、Ki-67陽性表達(dá)與前列腺癌病理分級(jí)、臨床分期均有相關(guān)性，前列腺癌組織中MCM5與Ki-67陽性表達(dá)呈正相關(guān)，提示MCM5、Ki-67表達(dá)水平與前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

總之，MCM5和Ki-67在前列腺腺細(xì)胞增殖過程中起關(guān)鍵作用;MCM5較Ki-67更能反映癌細(xì)胞的增殖情況。MCM5蛋白表達(dá)水平可作為前列腺癌的輔助診斷指標(biāo)并為判斷預(yù)后提供依據(jù)。

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