彭曉鈴，邵劍挺，盛卓君

（新疆維吾爾自治區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，新疆 烏魯木齊 830063）

豬繁殖與呼吸綜合征（又稱藍(lán)耳?。≒RRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的豬的一種高度接觸性傳染病，以母豬流產(chǎn)、死胎、弱胎、木乃伊胎以及仔豬呼吸困難、敗血癥、高死亡率等為主要特征[1]。2006年，我國(guó)爆發(fā)了豬“無(wú)名高熱病”的疫情，其死亡率高并且呈多發(fā)態(tài)勢(shì)，故而造成了一定程度的恐慌，最終確定了變異豬藍(lán)耳病病毒是豬“無(wú)高熱病”主要病原，并定名為高致病性藍(lán)耳病[2]。為了解新疆地區(qū)高致病性PRRS疫苗免疫情況，本試驗(yàn)應(yīng)用ELISA方法對(duì)2011年全年來(lái)自新疆地區(qū)送檢的豬血清進(jìn)行了PRRSV抗體檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 檢測(cè)樣品

2011 年通過(guò)對(duì)不同飼養(yǎng)類(lèi)型豬場(chǎng)各個(gè)階段豬群隨機(jī)采集15個(gè)地州80個(gè)縣的510個(gè)豬場(chǎng)（戶）的PRRS免疫豬的血清樣品3932份，置于冰箱4 ℃保存，備檢。

1.1.2 主要儀器與試劑

豬繁殖與呼吸綜合征病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)置西班牙雅雷薩公司；酶標(biāo)儀（TECAN）購(gòu)置于澳大利亞公司；洗滌器，50 μL，100 μL微量移液器，一次性移液器吸頭，稀釋樣品的U型96孔稀釋板。

1.2 方法

1.2.1 操作步驟

將待檢血清用稀釋液100倍稀釋?zhuān)谟妹赶♂屢阂?:100稀釋濃縮酶，同時(shí)做2份陽(yáng)性對(duì)照和2份陰性對(duì)照，均添加到酶標(biāo)板上，37 ℃孵育1 h；棄去酶標(biāo)板中的溶液 ，酶標(biāo)板每孔加300 μL洗滌液洗滌5次，最后一次用吸水紙拍干；再向洗滌好的酶標(biāo)板每孔加100 μL酶標(biāo)記物，封板，20 ℃～25 ℃孵育45 min；棄去酶標(biāo)板中的溶液 ，酶標(biāo)板每孔加300 μL洗滌液再洗滌5次，向洗滌好的酶標(biāo)板每孔加100 μL底物溶液，室溫孵育15 min；最后再向溫育好的酶標(biāo)板每孔加終止液100 μL終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀測(cè)定OD405值。

1.2.2 結(jié)果判定 陽(yáng)性對(duì)照的OD值要高于1.5，陰性對(duì)照的OD值要低于0.25。

1.2.3 CUT OFF值計(jì)算方法

CUT OFF值：陽(yáng)性對(duì)照的OD值×0.15。樣品的OD值高于CUT OFF值，PRRS抗體陽(yáng)性。樣品的OD值低于CUT OFF值，PRRS抗體陰性。

S/P計(jì)算：S/P=樣品OD值/陽(yáng)性對(duì)照的OD值。

2 結(jié)果

2.1 不同養(yǎng)殖類(lèi)型豬場(chǎng)抗體檢測(cè)

對(duì)來(lái)自510個(gè)散養(yǎng)戶、商品代飼養(yǎng)場(chǎng)（戶）、種豬場(chǎng)的PRRS弱毒疫苗免疫豬場(chǎng)的3932份血清樣品進(jìn)行PRRS免疫抗體檢測(cè)，結(jié)果表明，不同類(lèi)型的豬場(chǎng)PRRS免疫抗體整體水平較好，散養(yǎng)戶免疫抗體水平合格率為78.05%，商品代飼養(yǎng)場(chǎng)戶免疫抗體水平合格率為84%，種豬場(chǎng)免疫抗體水平合格率78.54%（表1）。

表1 不同類(lèi)型豬場(chǎng)PRRS免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 不同日齡豬PRRS免疫抗體檢測(cè)

將血清樣品按照不同日齡和生長(zhǎng)發(fā)育期分為母豬、育肥豬和仔豬，抗體檢測(cè)結(jié)果顯示，母豬群的PRRS免疫抗體合格率高于仔豬群與育肥豬群，達(dá)到90.24%；育肥豬群的免疫抗體合格率稍高于仔豬群，達(dá)到80.97%；仔豬最低群，為77.6%（表2）。

將生產(chǎn)母豬與后備母豬進(jìn)行比較顯示：后備母豬的PRRS免疫抗體合格率（92.93%）高于生產(chǎn)母豬（77.93%）（表2）。

表2 不同日齡PRRS血清免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 不同月份樣品豬 PRRS 免疫抗體檢測(cè)

將血清樣品按照采集樣品的不同月份進(jìn)行分組統(tǒng)計(jì)和分析，結(jié)果表明，第一季度免疫抗體合格率比起其它三個(gè)季度較低，為65.95%；第二季度、第三季度、第四季度則分別為84.24%、79.24%、81.94%（表3）。

表3 不同季度PRRS血清免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討論

免疫抗體水平是反映豬群免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)[3]，豬群中 PRRSV免疫狀態(tài)，對(duì)于本病的防治具有重要意義。

目前，國(guó)內(nèi)外診斷PRRS常用的血清學(xué)方法較多[4]。本試驗(yàn)選用西班牙雅雷薩公司的ELISA試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，該方法用PRRSV ORF7基因在大腸桿菌中的表達(dá)產(chǎn)物純化重組蛋白，作為包被抗原，從而保證了整個(gè)試劑盒中不存在感染性物質(zhì)，降低了試驗(yàn)誤差，提高了準(zhǔn)確度，所測(cè)結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好，操作簡(jiǎn)單快速，可用于大規(guī)模血樣檢測(cè)。

本研究對(duì)不同飼養(yǎng)養(yǎng)殖模式類(lèi)型的豬場(chǎng)PRRS免疫抗體進(jìn)行監(jiān)測(cè)，結(jié)果顯示合格率差距不大，說(shuō)明新疆地區(qū)豬群PRRS疫苗免疫情況比較好，免疫密度達(dá)到較高水平，PRRS綜合防疫措施基本到位。生產(chǎn)母豬群的血清陽(yáng)性率高于仔豬，低于后備母豬。生產(chǎn)母豬PRRS抗體合格率低于后備母豬，可能是由于生產(chǎn)母豬分泌乳汁時(shí)，造成大量的抗體通過(guò)乳汁轉(zhuǎn)給了仔豬，導(dǎo)致體內(nèi)的抗體含量降低。斷奶仔豬的免疫合格率最低，這是斷奶后乳汁的母源抗體來(lái)源被終斷，體內(nèi)原有的母源抗體逐漸消耗下降，而疫苗免疫的抗體尚未大量產(chǎn)生的緣故。因此，檢測(cè)母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律，科學(xué)確定仔豬初次免疫的日齡時(shí)非常必要的。

加強(qiáng)PRRS疫情監(jiān)測(cè)，將常規(guī)抗體監(jiān)測(cè)和動(dòng)態(tài)分析，納入日常防疫工作中去，確定PRRSV最易發(fā)生循環(huán)傳播的水平和機(jī)體抗感染最薄弱的的時(shí)間，采取措施實(shí)施有效控制。當(dāng)PRRS抗體水平處于臨界值之下時(shí)，應(yīng)該及時(shí)進(jìn)行有效控制（如緊急疫苗注射或補(bǔ)注疫苗）。通過(guò)豬群的綜合系統(tǒng)檢測(cè)，綜合防控技術(shù)措施的實(shí)施，逐步凈化才能有效地控制PRRS的發(fā)生，并建立與國(guó)際接軌的豬健康養(yǎng)殖生物技術(shù)體系[5]。

[1]殷 震，劉景華. 動(dòng)物病毒學(xué)[M].2 版.北京：科學(xué)出版社，1997： 619-625.

[2]Zhou Y J，Hao X F，Tian Z J，et al. Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome virus emerged in China[J].Transbound Emerg Dis，2008，55（3-4）：52-64.

[3]Albina E，Madec F，Cariolet R，et al. Immune response and persistence of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus in infected pigs and farm units[J].Vet Rec，1994（134）：567-573.

[4]蔡寶祥，姜平. 我國(guó)PRRS診斷技術(shù)與疫苗研究進(jìn)展[J].畜牧與獸醫(yī)，2007（8）：1-4.

[5]鄭杰，寧宜寶，趙啟祖，等.高致病性變異株引起的豬繁殖與呼吸綜合征在我國(guó)的發(fā)生與流行[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2007，43（6）：48-50.