倫立軍，李強(qiáng)榮

(1.濟(jì)南宏濟(jì)堂制藥有限責(zé)任公司，山東 濟(jì)南 250100;2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，山東 濟(jì)南 250011)

前列欣膠囊具有活血化瘀，清熱利濕的功效。用于治療瘀血凝聚，濕熱下注所致的慢性前列腺炎及前列腺增生。前列欣膠囊中赤芍具有行瘀、止痛、涼血、消腫等功效，是主要藥味之一。為確保前列欣膠囊的質(zhì)量，我們對赤芍的有效成分芍藥苷進(jìn)行了含量測定方法的研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC－20AT高效液相色譜儀配SPD－20A紫外檢測器(島津公司)、Mettler toledo電子天平(梅特勒公司)。

1.2 試藥 前列欣膠囊(批號:1001002、1003001、1005001、1005003、1005002、1006001，濟(jì)南宏濟(jì)堂制藥有限責(zé)任公司);芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號0736－200015);所用提取溶劑甲醇、乙醇、磷酸(分析純，天津市廣成試劑有限公司)，甲醇(色譜純，天津市四有精細(xì)化學(xué)品有限公司)、乙腈(色譜純，TEDIA)。

2 方法與結(jié)果

2.1 流動相的選擇 取本品內(nèi)容物細(xì)粉約0.5 g，精密稱定，精密加入甲醇20mL，回流提取30min，采用不同的流動相甲醇 －0.05%磷酸二氫鉀溶液(40∶65)［1］、乙腈 －0.5% 磷酸二氫鉀溶液(15∶85);乙腈 －0.1%磷酸二氫鉀(0.1%磷酸)溶液(15∶85);乙腈 －0.1%磷酸二氫鉀(0.1%磷酸)溶液(20∶80););甲醇 －0.05% 磷酸溶液(15∶85)進(jìn)行試驗(yàn)，通過比較采用流動相為乙腈－0.1%磷酸二氫鉀(0.1%磷酸)溶液(15∶85)分離效果較好，故采用其作流動相。

2.2 色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈－0.1%磷酸二氫鉀(0.1%磷酸)溶液(15∶85)為流動相;檢測波長為230 nm［1］。理論板數(shù)按芍藥苷計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.3 溶液制備

2.3.1 對照品溶液制備 精密稱取芍藥苷10mg，置50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1mL溶液，置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(1mL含0.02mg的溶液)。

2.3.2 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物細(xì)粉約0.5 g精密稱定，置60mL具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇20mL，密塞，稱定重量，超聲提取30min，稱重，用50%甲醇補(bǔ)足重量，過濾，濾液作供試品溶液。

2.3.3 陰性對照液的制備 按供試品的處方比例和制備工藝，制成缺赤芍的陰性對照膠囊。取本品0.5 g，按2.3.2項(xiàng)下方法制成陰性對照溶液，即得。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性考察 精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇分別制成每 1mL 含7.0312、14.0625、28.125、56.25、118.5 μg的對照品溶液，分別吸取20μL，按上述色譜條件測定，以芍藥苷量為橫坐標(biāo)X，峰面積為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程:Y=11906 X+7249.9，r=0.9999。結(jié)果表明，芍藥苷在7.0312 ～ 118.5 μg·mL－1范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.4.2 專屬性考察 取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品液各20μL進(jìn)樣，結(jié)果陰性對照液在與對照品溶液、供試品溶液相應(yīng)位置無相應(yīng)色譜峰，結(jié)果表明，樣品的其他成分對芍藥苷測定無干擾，見圖1。

圖1 HPLC色譜圖

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別在0、4、8、12、24、28、32 h進(jìn)樣測定，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.79%。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 對同一供試品分取6份，分別精密稱定，按擬定的方法制備供試品溶液，測定含量，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD為0.60%，結(jié)果見表1。

表1 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.4.5 準(zhǔn)確度考察 采用加樣回收試驗(yàn)，精密稱取對照品10.00023mg，置 20mL 容量瓶中，加 50% 甲醇制成 0.500mg·mL－1的標(biāo)準(zhǔn)加樣液;另取已經(jīng)測知含量的同一供試品內(nèi)容物細(xì)粉6份約0.25 g，精密稱定，分置60mL具塞錐形瓶中，精密加入芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)加樣液0.5mL，再精密量取50%甲醇19.5mL，密塞，稱定重量，超聲提取 30min，稱重，用50%甲醇補(bǔ)足重量，過濾，濾液作供試品溶液。按擬定的方法測定，計(jì)算平均回收率98.39%，RSD=1.37%，結(jié)果表明，本法具有良好的回收率，結(jié)果見表2。

表2 回收率測定結(jié)果

2.5 樣品含量測定 取供試品5批，按擬定的方法制備供試品溶液，在擬定的色譜條件下測定，結(jié)果見表3。

表3 5批樣品測定結(jié)果

3 結(jié)論

本試驗(yàn)用高效液相色譜法測定前列欣膠囊中芍藥苷含量，對方法線性、專屬性、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性、精密度進(jìn)行了考察，芍藥苷在 7.0312 ～118.5 μg·mg－1范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，空白無干擾，說明用高效液相色譜法測定芍藥苷方法可靠。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(一部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:147－148.