國大亮，朱曉薇，張艷軍

(天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193)

姜黃素是從姜科植物姜黃(Curcuma longa L.)的干燥根莖中提取的一種二苯基庚二酮類化合物［1］。姜黃素是姜黃的主要有效成分之一，有重要的經(jīng)濟價值和廣泛的藥理作用，動物實驗和文獻報道表明其具有降血脂、抗腫瘤、抗氧化、抗凝、抗淀粉樣蛋白聚合、抑制HIV－1整合酶活性等作用［2］。姜黃素親脂性強，難溶于水，對酸、堿、光、熱、金屬離子均不穩(wěn)定，口服吸收差，生物利用度低，因而限制了姜黃素在臨床上的應(yīng)用和進一步的研究開發(fā)［3］。

鑒于此，本實驗在無水的條件下，首先將姜黃素、油相、非離子表面活性劑、助表面活性劑按適當(dāng)比例混合，制備得較穩(wěn)定的姜黃素自微乳?？诜S素自微乳后，在胃液中因胃蠕動和乳化劑作用下自發(fā)形成O/W型微乳，微乳可提高姜黃素的水溶性，提高其口服吸收和生物利用度［4］。由于姜黃素自微乳室溫下呈液態(tài)，不宜攜帶與服用，因此本實驗又篩選適宜的吸收劑，令姜黃素自微乳固化，制成了顆粒劑，使自微乳的攜帶與服用更加方便。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 TN－100B型托盤天平(上海精科天平)，恒溫磁力加熱攪拌器(江蘇省金壇市榮華機器制造有限公司，85－2型)，精密電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司，F(xiàn)A1004N)。

1.2 試藥 肉豆蔻酸異丙酯(國藥集團化學(xué)試劑有限公司，化學(xué)純)，聚乙二醇400(天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑有限公司，分析純)，聚氧乙烯蓖麻油EL 35(徳國BASF公司)，淀粉(天津市干腌食品公司，食品級)，糊精(西安宏昌藥業(yè))，微晶纖維素(臺灣明臺化工股份有限公司)，葡萄糖(天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑有限公司，分析純)，蔗糖粉(天津中醫(yī)藥大學(xué)藥物制劑實驗室提供)，甘露醇、枸櫞酸(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，分析純)，山梨酸(天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑有限公司，分析純)，聚乙二醇4000、聚乙二醇6000(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，化學(xué)純)，聚乙二醇8000(天津市瑞金物化學(xué)品有限公司，化學(xué)純)，聚維酮(天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心)，姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所，批號0823－9802)，其余試劑均為分析純。

2 實驗方法

2.1 姜黃素自微乳的制備稱取32g聚氧乙烯蓖麻油EL、8 g聚乙二醇400，置于100mL三角瓶中，37℃水浴加熱，以恒溫磁力加熱攪拌器攪拌30min，加入10g肉豆蔻酸異丙酯，攪拌均勻。精密稱取2g姜黃素，少量多次加入三角瓶中，室溫攪拌24 h。

2.2 吸收劑的篩選 將吸收劑粉碎，分別過100目篩，備用。稱取1.00g姜黃素自微乳，置于小蒸發(fā)皿中，少量多次加入吸收劑，以玻棒攪拌均勻，將吸附固化的自微乳過篩，以自由通過14目篩，輕壓后可通過60目篩為度，記錄加入吸收劑的質(zhì)量，分別計算各吸收劑的吸收比(固化比=自微乳質(zhì)量:吸收劑質(zhì)量)，重復(fù)3次，計算平均值。

2.3 自微乳顆粒的制備 稱取5 g姜黃素自微乳，加入吸收劑攪拌均勻，滴入適量30%聚維酮溶液，制成軟材，以14目篩濕法制粒，50℃干燥，整粒，16目篩整粒，密閉保存。

2.4 自微乳顆粒的溶出 分別量取250mL人工胃液，加于溶出杯中，依2010版《中國藥典》附錄“溶出度測定法”，設(shè)定轉(zhuǎn)速為 100 rpm，于 0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10min 吸取溶出液3mL，以0.45μm微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液，以人工胃液為空白，于420 nm測定吸光度，以溶出液最大吸光度為100%，求算各時間點相對累積溶出率，以時間為橫坐標(biāo)，相對累積溶出率為縱坐標(biāo)，繪制累積溶出曲線，以excel軟件按式－1進行Weibull概率模型擬合［5］，求算Td和T50。

2.5 姜黃素自微乳顆粒的含量測定

2.5.1 供試品溶液的制備 取約20mg姜黃素自微乳顆粒，精密稱定，置于50mL量瓶中，加入約40mL甲醇，超聲震蕩5min，溶液自然冷卻至室溫，以甲醇稀釋至刻度，混勻，精密吸取5mL稀釋至10mL，混勻，取適量溶液以0.45μm微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液，以甲醇為空白，于420 nm測定吸光度，外標(biāo)法計算含量。

2.5.2 線性范圍 精密稱取2.8mg姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品，置于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，精密吸取此溶液，分別稀釋成濃度為 4.48、3.36、2.24、1.12、0.56 μg·mL－1的溶液，于420 nm測定吸光度，以姜黃素濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)進行線性回歸，建立回歸方程。姜黃素在0.26～5.20 μg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=0.1964X－0.0048，相關(guān)系數(shù) R2=0.9999。

2.5.3 精密度 以甲醇為空白對照，分別取姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品溶液高濃度(4.48 μg·mL－1)、中濃度(2.24 μg·mL－1)、低濃度(1.12 μg·mL－1)，以甲醇為空白，于 420 nm 下測定吸光度，連續(xù)測定5次，求算RSD。高濃度的RSD為0.15%，中濃度的RSD為0.39%，低濃度的RSD為0.97%。

2.5.4 穩(wěn)定性 將2.24 μg·mL－1的姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品溶液室溫放置，分別于 0、2、4、6、8、10 h 取樣，以甲醇為空白，于 420 nm測定吸光度，計算RSD。姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品溶液在測定條件下10 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為1.13%。

2.5.5 回收率 取空白顆粒適量，置于50mL量瓶中，加入姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5mL，以甲醇稀釋至刻度，超聲震蕩5min，取適量溶液以0.45μm微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液，以甲醇為空白，于420 nm測定吸光度，外標(biāo)法測定姜黃素含量，計算回收率和RSD。姜黃素平均加樣回收率為100.31%，RSD 為 0.80%。

3 實驗結(jié)果

3.1 吸收劑的選擇 多糖類輔料對姜黃素自微乳有較好的吸附性，糖醇酸類輔料的吸附性次之，聚乙二醇類輔料的吸附性較差，但枸櫞酸和山梨酸吸附性最差。固化比詳見表1。

表1 吸收劑的固化比

3.2 自微乳顆粒的溶出速率 從每類吸收劑中選擇吸收比最小的兩種吸收劑制備自微乳顆粒，以人工胃液為溶出介質(zhì)測定顆粒的溶出速率，經(jīng)Weibull概率模型擬合，可見微晶纖維素和甘露醇的Td和T50明顯小于其他吸收劑，由于纖維素類吸收劑一般對藥物都有一定吸附損失，綜合考慮以甘露醇作為吸收劑制備姜黃素自微乳顆粒劑較為合適。以甘露醇為吸收劑的姜黃素自微乳顆粒外標(biāo)法測得姜黃素含量為0.63%。結(jié)果如圖1和表2所示。

圖1 各吸收劑的相對累積溶出百分率

表2 溶出曲線的Weibull概率模型擬合

4 討論

以糊精作為吸收劑，顆粒的成型性較好，但顆粒硬度較大，崩解緩慢;以淀粉作為吸收劑，顆粒軟硬適中，顆粒成型率較高，但崩解速度不及微晶纖維素快。多糖類吸收劑制得的顆粒的溶出液較混濁，不溶性輔料可能會對藥物有一定吸附，因此對于姜黃素而言不宜選用多糖類吸收劑。

以檸檬酸為吸收劑時發(fā)現(xiàn)檸檬酸吸附自微乳后粘度增大，易結(jié)成片狀，不易過篩。曾經(jīng)嘗試以聚乙二醇2000為吸收劑，但發(fā)現(xiàn)聚乙二醇2000質(zhì)軟，極易互相粘結(jié)成球狀，難于制劑成型。總體來看聚乙二醇的顆粒成型性不如多糖類和糖醇酸類。

姜黃素對水、對熱均不穩(wěn)定，因此濕法制粒中制軟材時的粘合劑使用了30%的PVP乙醇溶液，粘性適中，且PVP有助于顆粒迅速崩解，使顆粒的自乳化時間縮短。以本實驗條件下，以甘露醇為吸收劑制備姜黃素自微乳的顆粒，成型良好，顆粒易溶于水，溶出時間短，而且溶液澄清，姜黃素?zé)o吸附損失。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(一部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:247.

［2］馮為，胡林峰.姜黃素的研究進展及其抗腫瘤作用概況［J］.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2011，5(13):117 －118.

［3］張立康，汪小珍，李婉姝，等.姜黃素在大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)和生物利用度研究［J］.中國藥理學(xué)通報，2011，27(10):1458－1462.

［4］崔晶，翟光喜，趙宇，等.姜黃素微乳的體內(nèi)吸收研究［J］.中草藥，2007，38(3):368 －372.

［5］張莉，夏運岳.用電子表格 Excel計算藥物溶出度Weibull分布參數(shù)［J］.藥學(xué)進展，2002，26(1):48－50.