許華

摘要：廣東省清遠(yuǎn)地區(qū)３群肉雞臨床表現(xiàn)不同程度的腫眼、流鼻水等癥狀，臨床治療處理效果不理想。在3群病雞中各取病雞鼻竇腔分泌液進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)、革蘭氏和瑞氏染色，并對(duì)分離菌株進(jìn)行了玻片凝集和生化試驗(yàn)。結(jié)果表明，革蘭氏染色呈陰性，瑞氏染色呈藍(lán)色，油鏡下可見細(xì)菌呈短桿菌或球桿菌，兩極著色，３群分離株均與副雞嗜血桿菌Ａ型血清完全凝集反應(yīng)，與Ｂ和Ｃ型血清無凝集反應(yīng)，確定腫眼肉雞病原為Ａ型副雞嗜血桿菌。同時(shí)選用多種藥物研究了該病原菌的藥敏性，結(jié)果顯示，Ａ型副雞嗜血桿菌對(duì)頭孢噻呋、氟苯尼考和青霉素３種藥物均表現(xiàn)極敏。

關(guān)鍵詞：副雞嗜血桿菌；病原診斷；藥敏試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：Ｓ８５２．６１文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０12）04－0782-03

副雞嗜血桿菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｇａｌｌｉｎａｒｕｍ，ＨＰＧ）是引起雞上呼吸道疾病的一種致病菌，俗稱雞傳染性鼻炎，以鼻腔和鼻竇發(fā)炎、流鼻汁、臉部腫脹和眼結(jié)膜炎為主要特征。１９２０年，Ｂｅａｃｈ首先報(bào)道該病，Ｄｅｂｌｉｅｋｃ于１９３１年首次分離到了該病的病原菌［１］。本病呈世界性分布，主要引起產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋量下降，育成雞的生長(zhǎng)發(fā)育緩慢，給養(yǎng)禽業(yè)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。我國從１９８０年起就有許多疑似該病的病例出現(xiàn)，馮文達(dá)［２］于１９８７年首先在北京分離到１株病原菌。２０１０年１１月，廣東省清遠(yuǎn)市某肉雞養(yǎng)殖合作社３群肉雞表現(xiàn)不同程度的腫眼、流鼻水癥狀，并有嚴(yán)重的呼吸道疾病，病雞表現(xiàn)為精神沉郁、咳嗽、腫頭等癥狀，雞群經(jīng)治療處理，效果不理想，死淘較大，給肉雞合作社農(nóng)戶造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。筆者對(duì)這３群發(fā)病肉雞的病原菌進(jìn)行了分離鑒定，同時(shí)進(jìn)行了藥物敏感試驗(yàn)，旨在篩選出臨床上有效治療該致病菌株的敏感藥物，為防治該病提供一定的參考。

１材料與方法

１．１材料

病料采集于廣東省清遠(yuǎn)市某肉雞養(yǎng)殖合作社（３群，分群采集），副雞嗜血桿菌A、B、C 3種血清型的陽性血清均購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；常規(guī)培養(yǎng)基、生化試劑和藥敏紙片購于杭州天和微生物試劑有限公司。

１．２方法

１．２．１細(xì)菌分離培養(yǎng)在無菌操作條件下，用棉拭子蘸取病雞鼻竇腔內(nèi)分泌物，劃線接種于巧克力瓊脂培養(yǎng)基，置于３７ ℃恒溫箱燭缸培養(yǎng)２４ ｈ，之后挑取單個(gè)菌落進(jìn)行純培養(yǎng)。分群采集，培養(yǎng)。

１．２．２染色鏡檢挑取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色及瑞氏染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)菌的形態(tài)特征。

１．２．３血清學(xué)鑒定采用快速血清平板凝集試驗(yàn)方法，取所分離純培養(yǎng)的各菌株分別與副雞嗜血桿菌的Ａ、Ｂ、Ｃ 3種血清型的陽性血清分別進(jìn)行玻片凝集試驗(yàn)。

１．２．４生化試驗(yàn)對(duì)所分離的３株病原菌進(jìn)行葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和海藻糖發(fā)酵試驗(yàn)，并進(jìn)行接觸酶、吲哚試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)及Ｈ２Ｓ試驗(yàn)等生化指標(biāo)的測(cè)定。

１．２．５藥敏試驗(yàn)細(xì)菌純培養(yǎng)后，挑選分離的單個(gè)菌落，用無菌生理鹽水洗下混勻，?。埃?ｍＬ接種于巧克力培養(yǎng)基上涂布均勻，均勻貼上各藥敏紙片，置于３７ ℃恒溫箱燭缸培養(yǎng)２４ ｈ后觀察結(jié)果，并記錄抑菌圈直徑大小。

２結(jié)果與分析

２．１菌落形態(tài)、染色、鏡檢和血清學(xué)鑒定結(jié)果

對(duì)臨床的３群肉雞均分離到疑似副雞嗜血桿菌菌株，具體表現(xiàn)為在巧克力培養(yǎng)基上形成灰白色、邊緣整齊、光滑隆起、半透明、針尖大小、露珠樣的菌落。由表1可知，３群肉雞分離的菌株革蘭氏染色陰性，瑞氏染色藍(lán)色，油鏡下可見細(xì)菌呈短桿菌或球桿菌，兩極著色，３群肉雞病原分離株與副雞嗜血桿菌的Ａ型陽性血清均發(fā)生完全凝集反應(yīng)，而與其他兩種血清均無凝集反應(yīng)，故鑒定這３群分離菌株為Ａ型副雞嗜血桿菌。

２．２生化試驗(yàn)結(jié)果

生化試驗(yàn)結(jié)果見表2，３群肉雞病原分離菌株的生化特性完全一致，即細(xì)菌不發(fā)酵海藻糖，發(fā)酵葡萄糖、蔗糖和麥芽糖；能還原硝酸鹽，吲哚試驗(yàn)陰性，接觸酶陰性，不產(chǎn)生Ｈ２Ｓ。

２．３藥敏試驗(yàn)結(jié)果

由表3可見，該病原菌對(duì)頭孢噻呋、氟苯尼考和青霉素極敏，對(duì)丁胺卡那、阿莫西林高敏，對(duì)多西環(huán)素中敏，對(duì)泰樂菌素低敏，對(duì)磺胺嘧啶不敏感。

３小結(jié)與討論

本研究通過巧克力燭缸培養(yǎng)，Ａ型副雞嗜血桿菌分離率較高，屬于致病菌，由于該次培養(yǎng)未能完全達(dá)到５％ ＣＯ２培養(yǎng)箱的條件，導(dǎo)致菌株生長(zhǎng)不良，出現(xiàn)菌落數(shù)偏少的現(xiàn)象。

本研究３群清遠(yuǎn)肉雞病原分離菌株在生化特性上表現(xiàn)為發(fā)酵葡萄糖、蔗糖和麥芽糖，而且分離菌株能還原硝酸鹽，接觸酶陰性，吲哚試驗(yàn)陰性，不產(chǎn)生Ｈ２Ｓ，這些結(jié)果與羅廷榮等［３］確定副雞嗜血桿菌的生物化學(xué)特性完全一致；３群肉雞病原菌分離株與副雞嗜血桿菌的Ａ型陽性血清產(chǎn)生均完全凝集反應(yīng)，而與其他兩種血清均無凝集反應(yīng)。由以上這些特性可鑒定這３群分離菌株均為Ａ型副雞嗜血桿菌，說明目前清遠(yuǎn)地區(qū)肉雞Ａ型副雞嗜血桿菌的流行占據(jù)主導(dǎo)地位［４］。但從近年的文獻(xiàn)報(bào)道來看，我國部分地區(qū)已經(jīng)有Ｂ、Ｃ型副雞嗜血桿菌的存在［５－７］，呈現(xiàn)為近年來我國雞傳染性鼻炎流行的新特點(diǎn)。因此，養(yǎng)殖過程中對(duì)肉雞進(jìn)行免疫時(shí)應(yīng)注意該流行病的這一特點(diǎn)，同時(shí)在疫苗研發(fā)時(shí)也應(yīng)注重多價(jià)苗或全價(jià)苗的研究與開發(fā)［８］。雖然，目前肉雞的鼻炎疫苗均有效，但菌苗的保護(hù)率一般不能達(dá)到１００％，所以肉雞養(yǎng)殖過程中需要增強(qiáng)雞群的抵抗力，做好環(huán)境的消毒及病雞的隔離。由于康復(fù)帶菌雞是主要的傳染源，所以肉雞合作社各存欄雞舍內(nèi)的動(dòng)物用具要做好隔離，以避免病原菌的群間傳播。

從藥敏試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Ａ型副雞嗜血桿菌對(duì)頭孢噻呋、氟苯尼考、青霉素、丁胺卡那和阿莫西林都表現(xiàn)出了很高的敏感性，其中對(duì)頭孢噻呋、氟苯尼考和青霉素這３種藥物的敏感性最高。根據(jù)本研究藥敏試驗(yàn)結(jié)果，筆者選用了頭孢噻呋、氟苯尼考和青霉素這３種極敏感藥物對(duì)該肉雞養(yǎng)殖合作社３個(gè)發(fā)病雞群進(jìn)行了注射治療，同時(shí)投服藥物輔助治療，并補(bǔ)充電解多維等增強(qiáng)肉雞機(jī)體抵抗力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)雞群采食量逐漸恢復(fù)，精神好轉(zhuǎn)，呆立、嗜睡雞明顯減少，４ ｄ后基本恢復(fù)正常。因此，肉雞感染Ａ型副雞嗜血桿菌后可以考慮選擇這３種藥物進(jìn)行臨床治療。治療時(shí)，除了注射給藥和口服給藥外，也可考慮滴鼻或者噴霧治療。

參考文獻(xiàn)：

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