楊秀芳， 汪 洋， 馬養(yǎng)民

(陜西科技大學(xué) 教育部輕化工助劑化學(xué)與技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西 西安 710021)

0 引言

杜仲Eucommia ulmoides Oliv.為杜仲科(Eucommiaceae)屬落葉喬木，為我國(guó)特產(chǎn)，主產(chǎn)于四川、陜西、湖北等地[1].綠原酸是杜仲中的重要成分，具有利膽、抗菌、抗病毒、降壓、增高白血球及興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等多種藥理作用，是保健、醫(yī)藥等工業(yè)的重要原料[2].杜仲中綠原酸的含量常作為評(píng)價(jià)杜仲葉品質(zhì)的重要依據(jù)，王太霞對(duì)杜仲葉生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中綠原酸含量的變化進(jìn)行了研究，但對(duì)不同栽培模式下葉、皮中有效成分動(dòng)態(tài)變化情況較少提及.

杜仲栽培的模式有兩種——喬林模式和葉林模式，喬林模式是以獲得木材為主要目的，按傳統(tǒng)方法進(jìn)行種植的一種栽培模式，其生長(zhǎng)周期較長(zhǎng)；葉林模式是利用杜仲較強(qiáng)萌芽能力，定植后每年春天從靠近地面處平茬，并在主干上萌生出的枝條中選育3個(gè)不同方向、分布均勻的萌條構(gòu)成開(kāi)放型樹(shù)冠，以后每年春天進(jìn)行平茬.葉林模式是將高大喬木改育為灌木的種植模式[3].本文采用HPLC法，以綠原酸含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，研究了杜仲不同栽培模式、生長(zhǎng)期有效成分積累動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，探討了杜仲的最佳采收時(shí)間，為杜仲規(guī)范化種植提供依據(jù).

1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑

1.1.1 材料處理

葉林栽培模式的杜仲葉、皮于2010年4月至10月每月15日采自西北農(nóng)林科技大學(xué)苗圃平茬林；喬林栽培模式的杜仲葉、皮于2010年4月至10月每月15日采于西北農(nóng)林科技大學(xué)苗圃杜仲喬林.隨機(jī)采集同一株植物東、南、西、北各個(gè)方向的杜仲皮及杜仲葉.用濕布將杜仲葉擦拭干凈，殺青、陰干后，密封保存?zhèn)溆?；杜仲皮陰干后，密封保存?zhèn)溆?樣品使用前，將其粉碎并于60℃真空干燥箱中烘至恒重.

1.1.2 試劑

綠原酸(中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所)；甲醇(色譜純)；乙酸(色譜純).

1.1.3 主要儀器

島津LC-10ATvp型高效液相色譜儀(日本島津制造)；SPD-10A紫外檢測(cè)器(日本島津制造)；KH5200B型超聲波清洗器(成都一科儀器設(shè)備有限公司).

1.2 方法

1.2.1 測(cè)定方法的建立

綠原酸含量測(cè)定采用高效液相法.參考文獻(xiàn)后[4]，確定色譜條件：色譜柱為ODS(250 mm×4.6 mm)；以甲醇-水-乙酸(體積比24∶75∶1)作流動(dòng)相；流速為1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為240 nm；進(jìn)樣量為5μL；柱溫為30℃.用甲醇配制濃度為0.075，0.150，0.300，0.600，1.200 mg/mL的一組綠原酸對(duì)照品溶液，分別吸取10μL進(jìn)行高效液相色譜儀分析測(cè)定，建立回歸方程，考察在測(cè)定濃度范圍內(nèi)進(jìn)樣濃度與峰面積之間的線性關(guān)系.

1.2.2 樣品處理及含量檢測(cè)

分別準(zhǔn)確稱取60 ℃真空干燥后的樣品1 g，加入50 mL體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇，80 ℃加熱回流提取2 h,過(guò)濾，并將濾液定容至50 mL.用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾后，置于冰箱中冷藏待測(cè).以選定的色譜條件下精密吸取供試樣品溶液10μL進(jìn)樣測(cè)定.

2 結(jié)果和分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

將綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液注入高效液相色譜儀中，重復(fù)進(jìn)樣3次，并對(duì)所得的峰面積進(jìn)行平均，以綠原酸濃度為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖1.

圖1 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線 圖2 杜仲葉中綠原酸積累動(dòng)態(tài)規(guī)律

由此可知，綠原酸在0.075～1.2 mg/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，由此得到回歸方程：y=8×106x+1.197 33×105，r=0.999 7.

2.2 杜仲體內(nèi)綠原酸積累動(dòng)態(tài)規(guī)律

通過(guò)對(duì)待測(cè)樣品峰面積的測(cè)定，可由回歸方程得到待測(cè)樣中綠原酸的濃度.再以各個(gè)植物樣品的采樣月份為橫坐標(biāo)，綠原酸含量為縱坐標(biāo)繪圖，得到綠原酸在杜仲體內(nèi)隨時(shí)間變化的規(guī)律.

2.2.1 杜仲葉中綠原酸積累動(dòng)態(tài)規(guī)律

杜仲葉中綠原酸的積累動(dòng)態(tài)規(guī)律見(jiàn)圖2.喬林葉和葉林葉中綠原酸的積累動(dòng)態(tài)具有一定的相似性，綠原酸含量均在6月份達(dá)到最大值，兩種栽培模式進(jìn)行比較，葉林葉中的綠原酸含量明顯高出喬林葉.

2.2.2 杜仲皮中綠原酸積累動(dòng)態(tài)規(guī)律

葉林皮和喬林皮中綠原酸積累動(dòng)態(tài)規(guī)律見(jiàn)圖3.葉林皮綠原酸含量在10月份達(dá)到全年最大值，喬林皮6月份綠原酸含量達(dá)到全年最大值，葉林皮綠原酸的最高含量高于喬林皮，但喬林皮在一年當(dāng)中存在三個(gè)綠原酸含量較高的時(shí)期.

圖3 杜仲皮中綠原酸積累動(dòng)態(tài)規(guī)律 圖4 綠原酸積累動(dòng)態(tài)比較

2.2.3 綠原酸積累動(dòng)態(tài)規(guī)律比較

將杜仲中的綠原酸積累規(guī)律進(jìn)行對(duì)比,結(jié)果見(jiàn)圖4.兩種栽培模式中杜仲葉中綠原酸含量要明顯高于杜仲皮的含量，尤其是葉林葉的綠原酸含量每月均超過(guò)其他3種樣品.顯示出葉林葉作為提取綠原酸植物原料方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì).若以綠原酸作為提取目標(biāo)，杜仲栽培應(yīng)選擇葉林模式，并且以6月作為杜仲葉的最佳采收期.

3 結(jié)束語(yǔ)

采用高效液相色譜檢測(cè)方法，對(duì)不同栽培模式下同一植株葉、皮中綠原酸積累規(guī)律進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)杜仲葉是綠原酸合成、積累的主要器官；與喬林葉相比，葉林模式栽培的杜仲葉中綠原酸含量更高，且在6月達(dá)到全年峰值.該結(jié)果對(duì)藥用植物用藥部位確定、用藥原料采收時(shí)間、種植資源可持續(xù)利用及生態(tài)保護(hù)具有重要意義.

參考文獻(xiàn)

[1] 楊 云，馮衛(wèi)生. 中藥化學(xué)成分提取分離手冊(cè)[M]. 北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，1998：172.

[2] 王太霞，趙紅艷，柴志艷，等. 杜仲葉生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中結(jié)構(gòu)和綠原酸含量的變化[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009：20(3)：635-636.

[3] 徐詠梅，蘇印泉，彭 鋒，等. 杜仲喬林與葉林樹(shù)皮中次生代謝物含量的比較[J]．西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2006：34(4)：55-57.

[4] 董娟娥，馬希漢．反相高效液相色潽法同時(shí)分離測(cè)定杜仲雄花及其產(chǎn)品中的京尼平苷酸和綠原酸[J]．色譜，2007，25(2)：217-220.