林 翀，廖 源，蘇應(yīng)仙，林明冠

(海南省農(nóng)墾總醫(yī)院，海口570311)

血漿凝固酶試驗是鑒別金黃色葡萄球菌的重要試驗之一，結(jié)合凝固酶結(jié)合于菌體表面并不釋放，在該菌株的表面起纖維蛋白原的特異受體作用，當(dāng)細(xì)菌混懸于人或兔血漿中時，纖維蛋白原與菌體受體交聯(lián)而使細(xì)菌凝聚。近年來，許多商家為提高對金黃色葡萄球菌的鑒定水平，而生產(chǎn)了各種鑒定結(jié)合凝固酶的試劑，如廣東環(huán)凱微生物科技有限公司生產(chǎn)的HM43葡萄球菌乳膠凝聚試劑。本研究采用兩種檢測方法檢測118株葡萄球菌，評價兩種檢測方法的特異性。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 菌株來源 收集2010年9～12月從海南省農(nóng)墾總醫(yī)院住院及門診患者的前列腺液43例、痰液20例、血液15例、分泌物10例、白帶8例、透出液4例、清潔中段尿9例、腦脊液3例、膿液2例、精液2例、膽汁和腹水各1例等12種臨床標(biāo)本中分離出的葡萄球菌118株。其中東湖門診31株、總院門診22株、神經(jīng)外科11株、ICU 9株、兒科6株、腫瘤內(nèi)科和呼吸內(nèi)科各5株及其他科室29株。質(zhì)控菌采用金黃色葡萄球菌 ATCC25923，表皮葡萄球菌ATCC26069作為陰性對照菌株，均購于衛(wèi)生部臨床檢驗中心。

1.2 試劑來源 新鮮抗凝血漿試劑:每天收集10份不同新鮮抗凝血漿各0.5 mL，放在10 mL的無菌試管內(nèi)，混勻備用。HM43葡萄球菌乳膠凝聚試劑盒:購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，試劑嚴(yán)格控制在有效期內(nèi)使用。

1.3 細(xì)菌培養(yǎng)的鑒定和方法 細(xì)菌鑒定按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第3版進(jìn)行操作。取在哥倫比亞血平板上生長16～24 h的菌落，菌落圓形，凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤，不透明;革蘭染色陽性，光鏡下菌體球形或橢圓形，直徑1.0 μm左右，呈葡萄串狀排列;觸酶陽性。采用美華MA120微生物分析系統(tǒng)鑒定及用HM43葡萄球菌乳膠凝聚試劑法檢測結(jié)合凝固酶。再用新鮮抗凝血漿檢測以上118株葡萄球菌的結(jié)合凝固酶。

1.4 結(jié)合凝固酶試驗的操作步驟 HM43葡萄球菌乳膠凝聚試劑法:取一小滴試劑加在反應(yīng)卡上，用接種環(huán)挑取待檢菌2～3個菌落于試劑中混勻，1 s內(nèi)凝固者為陽性，否則為陰性。新鮮抗凝血漿法:取1滴蒸餾水于潔凈的玻片上，用接種環(huán)挑取待檢菌一環(huán)置于蒸餾水中，制成濃的菌懸液，無自凝現(xiàn)象。然后加一環(huán)新鮮抗凝血漿混合，10 s內(nèi)觀察結(jié)果，出現(xiàn)明顯細(xì)菌凝聚塊為陽性，否則為陰性。以上試驗同時作陰性、陽性對照。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 統(tǒng)計HM43葡萄球菌乳膠凝聚試劑法及新鮮抗凝血漿法的檢測特異性并采用配對χ2檢驗進(jìn)行比較分析。以P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種結(jié)合凝固酶試劑的檢測結(jié)果 用HM43葡萄球菌乳膠凝聚試劑檢測的結(jié)合凝固酶陽性率為19.5%(23/118)，新鮮抗凝血漿試劑檢測的陽性率為72.9%(86/118)，見表1。

表1 兩種結(jié)合凝固酶試劑檢測結(jié)果比較(株)

2.2 敏感度和特異度比較 HM43葡萄球菌乳膠凝聚試劑的敏感度為100.0%(22/22)，特異度為99.0%(95/96);而新鮮抗凝血漿試劑的敏感度為77.3%(17/22)，特異度為28.1%(27/96)。χ2檢驗結(jié)果顯示，HM43葡萄球菌乳膠凝聚試劑的敏感度和特異度均高于新鮮抗凝血漿檢測法(P＜0.05)。

3 討論

葡萄球菌是醫(yī)院感染的主要病原菌之一，海南省農(nóng)墾總醫(yī)院分離的118株葡萄球菌均來自醫(yī)院感染患者。有資料表明［1～4］，血漿凝固酶陽性的葡萄球菌(SA)，特別是耐苯唑西林金黃色葡萄球菌(MRSA)，與醫(yī)院感染關(guān)系極為密切。MRSA在歐美造成頑固性醫(yī)院感染，開始流行于60年代后期到70年代，耐藥性逐年增加并遍及全球。MRSA的迅速發(fā)展，造成治療上的困難及病死率增高，已成為全球關(guān)注的嚴(yán)重感染癥。血漿凝固酶陰性葡萄球菌(CNS)屬人體正常菌群，但80年代后，隨著介入性診療手段的廣泛應(yīng)用、免疫抑制劑的廣泛使用及腫瘤、糖尿病等復(fù)雜的疾病基礎(chǔ)，使其成為重要的機(jī)會致病菌，并出現(xiàn)多重耐藥菌株。耐苯唑西林凝固酶陰性葡萄球菌(MRCNS)比例也逐年升高，均成為難以控制的醫(yī)院感染菌。因此，做好葡萄球菌的監(jiān)測與鑒定，尤其是選好鑒定其結(jié)合凝固酶的試劑，對控制醫(yī)院感染意義重大。

HM43葡萄球菌乳膠凝聚試劑檢測結(jié)合凝固酶的原理是乳膠顆粒表面包被有纖維蛋白原和免疫球蛋白，與金黃色葡萄球菌懸液混合后，乳膠顆粒可見迅速凝集，缺少凝固酶/A蛋白的葡萄球菌不會發(fā)生時顯凝集，影響因素少。而血漿凝固酶檢測的結(jié)果受肝素、枸櫞酸鹽等抗凝劑的影響，甚至服用某些中草藥的患者也會影響實驗結(jié)果，而且需要時間比較長［5］。因此，血漿凝固酶陽性的葡萄球菌會出現(xiàn)假陰性，而血漿凝固酶陰性的葡萄球菌也會出現(xiàn)假陽性，從而使特異性降低了。本研究采用HM43葡萄球菌乳膠凝聚試劑和新鮮抗凝血漿檢測118株葡萄球菌中結(jié)合凝固酶的情況，結(jié)果顯示，HM43葡萄球菌乳膠凝聚試劑檢測的陽性率19.5%(23/118)，其中有1株路鄧葡萄球菌呈凝固酶陽性，可能是該菌株有膜結(jié)合型酶(聚集因子)，容易誤以為凝固酶陽性菌株，可能要采用別的試劑或方法對路鄧葡萄球菌進(jìn)行鑒定;而新鮮抗凝血漿試劑檢測的陽性率為72.9%(86/118)，其中有69株出現(xiàn)假陽性。同時統(tǒng)計分析結(jié)果顯示，HM43葡萄球菌乳膠凝聚試劑的敏感度和特異度(100.0%和99.0%)均高于新鮮抗凝血漿試劑者(77.3%和28.1%)。

綜上所述，在檢測結(jié)合凝固酶技術(shù)中，HM43葡萄球菌乳膠凝聚試劑是一系列基于乳膠凝集技術(shù)原理的病原菌快速檢測方法，其特異性高于新鮮抗凝血漿試劑，且操作簡單，檢測結(jié)果快速(只需2 min即可確證可疑菌落)、準(zhǔn)確、誤診率低，且無需特殊儀器，值得臨床微生物室推廣。

［1］黃艷飛，王玫，孔憲璽，等.一種快速檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌方法的評價［J］.中華實驗診斷學(xué)，2010，14(12): 1928-1930.

［2］夏涵.耐甲氧西林金黃色葡萄球菌耐藥機(jī)制及檢測方法研究進(jìn)展［J］.國外醫(yī)學(xué):臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊，2009，26 (11):844.

［3］田剛，李清，古麗娜爾·依明，等.血漿凝固酶陰性葡萄球菌的簡易鑒定［J］.臨床檢驗雜志，2008，26(4):286-287.

［4］張紅升.三種鑒定葡萄球菌凝固酶方法的評價［J］.實用醫(yī)技雜志，2007，14(2):256-257.

［5］王天江.凝固酶與乳膠凝固試驗對金黃色葡萄球菌的檢測分析［J］.中國醫(yī)藥指南，2008，6(15):373-374.