丁 艷，林 春

(1.威海市藥品檢驗所，山東威海264200;2.迪沙藥業(yè)集團有限公司，山東威海264200)

普盧利沙星是第三代氟喹諾酮類廣譜抗菌藥物，其殺菌機理是以細菌的DNA為作用靶，通過阻礙DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱ和Ⅳ發(fā)揮作用，使細菌DNA無法形成超螺旋進而造成染色體不可逆損害，導致細菌細胞無法分裂繁殖而產(chǎn)生抗菌作用。在該藥的合成、精制過程中用到了ICH限制的多種有機溶劑，但目前各生產(chǎn)廠家均根據(jù)自己的生產(chǎn)工藝，僅對生產(chǎn)中涉及的溶劑進行檢查。經(jīng)過查閱相關資料［1～3］，本文建立了同時測定該藥中乙醇、乙腈、正己烷、三氯甲烷、四氫呋喃、二氧六環(huán)、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺、二甲苯九種殘留溶劑的頂空氣相色譜測定法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津GC－2014型氣相色譜儀;HSJ－05B頂空進樣器;Metler Toledo AE240電子天平。

1.2 試藥 乙腈為色譜純;乙醇、正己烷、三氯甲烷、四氫呋喃、二氧六環(huán)、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺、二甲苯以及二甲基亞砜均為分析純;普盧利沙星樣品(威海迪素制藥有限公司提供，批號為110801、110802、110803)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為5%二苯基—95%二甲基硅氧烷共聚物為固定相的毛細管柱，柱長為30 m，內(nèi)徑為0.32 mm，膜厚為0.25 μm，柱溫采取程序升溫，初始溫度為40℃保持10 min，以10℃·min－1升溫至150℃，保持10 min;載氣為氮氣;柱流速為1.7 mL·min－1。分流比為1∶10;進樣口溫度為200℃，檢測器溫度:FID，250℃;頂空預熱溫度為110℃，保持時間為30 min，取頂空瓶上氣體1.0 mL進樣測定。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗 對照溶液的配制:精密量取乙醇500 mg、乙腈44 mg、正己烷29 mg、三氯甲烷6 mg、四氫呋喃72 mg、二氧六環(huán) 38 mg、甲苯 89 mg、N，N－二甲基甲酰胺(DMF)88 mg、二甲苯217 mg至100 mL容量瓶中，加二甲亞砜稀釋至刻度搖勻，作為對照溶液。

取上述對照溶液1 mL，至20 mL頂空瓶中，頂空預熱溫度為110℃，保持30 min，取頂空瓶上部氣體1 mL在上述色譜條件下進樣測定。得到的色譜圖經(jīng)過色譜工作站積分，計算分離度，符合《中國藥典》2010年版規(guī)定的大于1.5的要求，且峰對稱性良好，各殘留溶劑的出峰時間及分離度見表1。

表1 各殘留溶劑的出峰時間及分離度列表

2.3 線性關系試驗 精密稱取乙醇50 mg、乙腈4.1 mg、正己烷2.9 mg、三氯甲烷0.6 mg、四氫呋喃7.2 mg、二氧六環(huán)3.8 mg、甲苯8.9 mg、DMF 8.8 mg和二甲苯21.7 mg置50 mL容量瓶中，以二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻作為標準曲線儲備溶液;按比例精密稀釋成不同濃度的標準溶液5瓶，照上述方法進行測定，記錄色譜圖，通過積分確定峰面積，以濃度為橫坐標，以乙醇、乙腈、正己烷、三氯甲烷、四氫呋喃、二氧六環(huán)、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺、二甲苯的峰面積為縱坐標，進行線性回歸，結(jié)果見表2。

表2 回歸方程和線性范圍(n=5)

2.4 精密度試驗 精密量取對照溶液各1.0 mL，分別置6個20 mL的頂空瓶中，密封后在110℃下預熱30 min后，進樣1.0 mL，記錄氣相色譜圖，通過積分確定峰面積(圖1)。分別計算6份對照液中各組分(乙醇、乙腈、正己烷、三氯甲烷、四氫呋喃、二氧六環(huán)、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺、二甲苯)峰面積的RSD。得到乙醇、乙腈、正己烷、三氯甲烷、四氫呋喃、二氧六環(huán)、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺、二甲苯的RSD分別為3.60%、4.21%、3.01%、4.99%、4.84%、3.09%、3.34%、2.90%、3.58%，均小于10.0%，符合《中國藥典》2010年版對殘留溶劑檢查外標法系統(tǒng)適用性的要求。

圖1 普盧利沙星對照溶液GC圖譜

2.5 最低檢測限 S/N＞3，本方法溶液中的乙醇、乙腈、正己烷、三氯甲烷、四氫呋喃、二氧六環(huán)、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺、二甲苯的最低檢測限分別為0.5、0.04、0.029、0.06、0.072、0.38、0.089、0.88、2.17 mg·L－1。

2.6 回收率試驗 精密稱取同一批號的普盧利沙星約0.1 g于頂空瓶中，共稱5份，精密加入配制好的對照溶液各1.0 mL，各份樣品按上述方法進行測定，同時進未加對照的樣品溶液和對照溶液(按外標法計算樣品內(nèi)各項殘留溶劑均為未檢出)，乙醇、乙腈、正己烷、三氯甲烷、四氫呋喃、二氧六環(huán)、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺、二甲苯的平均回收率(n=5)分別為99.77%、99.99%、99.51%、98.51%、98.76%、98.50%、99.10%、99.24%、99.05%;RSD=0.96%、0.73%、0.97%、1.03%、1.05%、0.62%、0.78%、0.60%、0.88%。

2.7 樣品測定 分別精密稱取普盧利沙星樣品3批各0.1 g，至頂空瓶中，精密加入二甲基亞砜1 mL使溶解，密封瓶口，在110℃下平衡30 min后，取頂空瓶上部氣體1.0 mL進樣，照上述方法進行測定，記錄色譜圖，通過積分確定其峰面積，用外標法計算試樣中的乙醇、乙腈、正己烷、三氯甲烷、四氫呋喃、二氧六環(huán)、甲苯、DMF、二甲苯的含量，見表3。

表3 三批普盧利沙星的殘留溶劑測定結(jié)果

3 討論

3.1 平衡時間的選擇 本試驗根據(jù)樣品的熱穩(wěn)定性情況選擇了在恒溫(110℃)下加熱平衡，分別在10、20、30、40以及60 min時進行測定，比較乙醇、乙腈、正己烷、三氯甲烷、四氫呋喃、二氧六環(huán)、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺、二甲苯的峰面積。開始的時候承受時間的增加，峰面積明顯增加，20 min后，峰面積的增加變得緩慢;30 min時，各峰面積與加熱40及60 min時各峰面積幾乎一致。這意味著，30 min后(110℃)各待測成分的分壓已基本平衡。因此，本試驗采用預熱時間為30 min。

3.2 程序升溫的選擇 經(jīng)過比較本試驗要檢測的有機溶劑的沸點以及極性，我們采用了上述程序升溫的條件，先采用40℃較低溫度保持10min，使沸點低的溶劑能在該條件下出峰，然后以比較小的升溫速率升至較高的溫度，保障了后面的溶劑也能得到比較好的分離，在150℃保持10 min以保證溶媒二甲基亞砜的全部被吹出，而不影響下一針的測定。

3.3 溶媒的選擇 根據(jù)普盧利沙星的溶解特性，同時考慮沸點與出峰時間，我們使用了二甲基亞砜為溶媒，測定樣品中的乙醇、乙腈、正己烷、三氯甲烷、四氫呋喃、二氧六環(huán)、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺、二甲苯，得到了比較理想的分離，可以準確地測定該藥中的殘留溶劑。

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(二部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄61－ 65.

［2］ 劉冬，戰(zhàn)寒秋，王茜，等.頂空氣相色譜法測定西維來司鈉中的殘留溶劑［J］.中國藥品標準，2010，11(3):199－202.

［3］ ICH指導委員會.藥品注冊的國際技術要求(質(zhì)量部分)［M］.周海鈞，譯.北京:人民衛(wèi)生出版社，2000.