林江紅 武培彪

(巴彥淖爾市中心血站 內(nèi)蒙古巴彥淖爾 015000)

為了保障臨床用血安全,我國的法律法規(guī)明確規(guī)定獻(xiàn)血者血液樣本必須進(jìn)行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP等項目的檢測,只有陰性的血液才能允許用于臨床。我們用ELISA檢測方法對巴彥淖爾地區(qū)無償獻(xiàn)血者血清樣本進(jìn)行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP項目的檢測,在實際操作中?？梢姷綑z測結(jié)果為假陽性或假陰性的錯誤結(jié)果。為了避免或減少ELISA檢測實際操作中的影響因素,我們對2010年至2011年巴彥淖爾地區(qū)2萬余份無償獻(xiàn)血者血液樣本檢測,就影響檢測結(jié)果比較常見的因素進(jìn)行了初淺的分析和探討,報道如下。

1 材料與方法

(1)樣本。

巴彥淖爾地區(qū)無償獻(xiàn)血者血液樣本。

(2)儀器STAR全自動加樣器,FAME全自動酶免分析系統(tǒng);Wellscan MK3酶標(biāo)儀,Wellscan 4MK2洗板機(jī)。

(3)試劑方法ELLSA診斷試劑盒由金豪制藥股份有限公司、萬泰生物藥業(yè)股份有限公司、英科(廈門)科技有限公司提供,嚴(yán)格按照各廠家提供的ELISA試劑說明書,對所有被檢血液樣本進(jìn)行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP項目的檢驗操作。

2 結(jié)果

ELISA試驗檢測工作中會出現(xiàn)假陽性或假陰性的錯誤結(jié)果。

3 分析

3.1 試劑的影響因素

在對無償獻(xiàn)血者血清樣本檢測時我們遵照《血站管理辦法》的規(guī)定,每一份樣本都用ELISA法進(jìn)行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP等項目的初、復(fù)檢驗,初、復(fù)檢均選用有批準(zhǔn)文號、批批檢定報告、防偽標(biāo)簽的2個不同廠家的試劑盒進(jìn)行篩檢,常會遇到同一份樣本同一檢測項目在相同條件下檢測,一家試劑檢測陰性,另一家試劑檢測陽性,這是因為不同廠家的試劑抗體、抗原組合不同,來源和用量方面也有差異,造成我們在篩檢獻(xiàn)血員時,容易發(fā)生漏檢。因此,試劑的選擇是保證ELISA試驗測質(zhì)量的關(guān)鍵要素。我們在試驗前一定要對購進(jìn)ELISA試劑進(jìn)行血清盤的檢測。試驗前將試劑盒從冰箱中取出后,需要在與室溫平衡再進(jìn)行測定,目的是能使反應(yīng)微孔的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿足測定需求。不同批號、不同廠家的試劑,不能混合使用。對于超過有效期的試劑則嚴(yán)禁使用。

4 操作中的影響因素

ELISA試驗操作過程有加樣、溫育、洗板、顯色、結(jié)果判定5個步驟。加樣時間過長會導(dǎo)致孔間差異加大,更不可先把陰陽性及質(zhì)控血清加好后長時間等待樣品;加酶試劑及樣品,要加在孔底,不能加在孔壁上,加入量不準(zhǔn),導(dǎo)致試驗結(jié)果不準(zhǔn)確;溫育對于ELISA檢測是最關(guān)鍵的因素,根據(jù)試劑盒的說明書選擇溫育的時間和溫度,加完樣本或試劑后將微孔板從室溫放入水浴箱或溫箱中時,孔內(nèi)溫度從室溫升至37℃需要一定時間,如果是將微孔板放入溫箱即開始計時,這樣就容易造成實際測定中溫育時間不夠,易致弱陽性樣本測不出來;洗板的關(guān)鍵是洗板次數(shù)選擇。洗板次數(shù)較少,造成殘留,可引起假陽性結(jié)果。洗板次數(shù)過多,可造成抗原抗體結(jié)合物洗脫,造成假陰性結(jié)果;在實際的操作中,往往對于顯色的時間不夠重視,顯色時間過短容易造成弱陽性樣本的漏檢。顯色時間過長會使質(zhì)控值偏高,影響質(zhì)控圖的繪制;讀取結(jié)果可定性分析也能定量分析,但要在15～30min內(nèi)完成,定性測定用肉眼判讀試驗結(jié)果時,反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10～15cm;定量測定時用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果,需先預(yù)熱15～30min再進(jìn)行測定。

5 樣本質(zhì)量的影響因素

樣本質(zhì)量的好壞直接影響ELISA檢測的結(jié)果。樣本溶血、被細(xì)菌污染、樣本貯存時間過長反復(fù)凍融、樣本凝固不全,這些因素均可導(dǎo)致ELISA檢測獻(xiàn)血者血液樣本時,造成假陽性或假陰性的錯誤結(jié)果。樣本乳糜的血清中有大量的脂肪顆粒,將其加入微孔中易粘附于微孔內(nèi)壁,洗板時不易洗去,干擾ELISA檢測結(jié)果。

樣本采集時必須注意避免人為因素引起的溶血和細(xì)菌污染;檢測的血清樣本不能立即檢測時,5d內(nèi)檢測的樣本可存放于4℃冰箱,1周后檢測的樣本應(yīng)低溫保存,凍存后融解的樣本,應(yīng)輕柔的充分混勻后再檢測;采集血清樣本時用帶分離膠的采血試管或在采血試管中加入適量的促凝劑,避免樣本凝固不全。大力宣傳無償獻(xiàn)血相關(guān)知識,加強(qiáng)獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前的問診,防止采集到乳糜的血液,確保血液檢測質(zhì)量。

綜上所述,ELISA檢測已廣泛應(yīng)用于血站對無償獻(xiàn)血者的篩檢和血液的檢測工作中。在實際工作中,ELISA試驗影響測定結(jié)果的因素較多,應(yīng)采取相應(yīng)措施,避免或減少影響因素,才能保證血液檢測質(zhì)量,為臨床提供合格安全的血液。

[1]李金明.臨床酶免疫測定技術(shù)[M].人民軍醫(yī)出版社,2005:87～94.

[2]李會英.酶聯(lián)免疫吸附實驗影響因素的分析[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2007,4(10):985～986.