張 冰 宮紅梅 李曉艷 張亞琴

鄭州市第一人民醫(yī)院新生兒科，河南鄭州 450052

新生兒窒息是以腦損傷、心臟損傷等為主的多臟器損害性疾病，病情重，病死率高。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外大量的研究表明，膽紅素可有效抑制各種活性氧的產(chǎn)生及脂質(zhì)過(guò)氧化。在氧化應(yīng)激時(shí)發(fā)揮對(duì)心血管系統(tǒng)的保護(hù)作用[1]。為此選用7日齡SD乳鼠，建立HIR模型作為窒息程度的標(biāo)準(zhǔn)，用膽紅素干預(yù)缺氧缺血致心肌損傷時(shí)的乳鼠，檢測(cè)心肌超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）變化，探討缺氧缺血性腦損傷時(shí)的心肌損傷并觀察膽紅素在其中的保護(hù)作用，并期望能以此提供臨床依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（渝）20020001，選用健康SD大鼠，雌雄不限，7日齡，12～15 g，SOD活力、MDA含量及考馬斯亮蘭總蛋白試劑盒均購(gòu)于南京建成試劑公司。CYS-1測(cè)氧儀由上海嘉定學(xué)聯(lián)儀器廠生產(chǎn)。微型動(dòng)脈夾由上海手術(shù)器械廠生產(chǎn)。

1.2 動(dòng)物模型

參照張國(guó)慶等[2]動(dòng)物模型的制作方法。SD大鼠（7 d齡），稱(chēng)重后編號(hào)，乙醚麻醉，取仰臥位固定，消毒皮膚后頸部正中切口，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，用微型動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈，消毒紗布覆蓋切口。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物置于缺氧箱（8%氧濃度）中，1 h后松開(kāi)動(dòng)脈夾后再次放回箱內(nèi)，缺氧2 h后取出，絲線（6-0號(hào)）縫合切口，備用。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組

選實(shí)驗(yàn)動(dòng)物24只，隨機(jī)分為3組：對(duì)照組取頸部正中切口后暴露頸總動(dòng)脈，不建立腦缺氧缺血再灌注損傷模型；模型組為建立模型后向?qū)嶒?yàn)動(dòng)物腹腔注射生理鹽水（生理鹽水劑量同膽紅素組膽紅素的劑量）；膽紅素組為模型建立后即刻給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腹腔注射膽紅素10 mg/kg；各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于術(shù)后6 h處死。

1.4 取材和標(biāo)本制作

解剖實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后快速取心肌組織塊，勻漿，低溫離心，取上清，保存于-80℃超低溫冰箱中，備用。

1.5 指標(biāo)檢測(cè)

取心肌組織，勻漿后測(cè)SOD活性及MDA含量，黃嘌呤氧化酶法測(cè)定心肌組織SOD活性用，硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA含量。SOD活力、MDA含量及考馬斯亮蘭總蛋白方法嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，采用波長(zhǎng)分別為550、532、539 nm處比色，比色杯光徑為1 cm，測(cè)定采用島津紫外可見(jiàn)分光光度儀。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS13.0軟件包進(jìn)行，數(shù)據(jù)以（）表示，兩組之間采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

對(duì)照組、膽紅素組與模型組相比，模型組心肌組織SOD活性水平明顯下降，MDA含量明顯升高，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；膽紅素組與模型組比較，膽紅素組心肌組織中SOD活性升高，MDA含量下降，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05

3 討論

新生兒窒息時(shí)，缺氧窒息后血液重新分布，以保證腦、心等重要器官的血供[3]。窒息致缺氧缺血性心肌損傷機(jī)理：若缺氧時(shí)間的持續(xù)延長(zhǎng)及程度的繼續(xù)加重，肺循環(huán)阻力增高，右心室后負(fù)荷增加，耗氧量增加，加重心內(nèi)膜下心肌和左室壁的心肌缺血[4]。搶救復(fù)蘇時(shí)吸氧，復(fù)氧致心肌組織發(fā)生再灌注損傷，產(chǎn)生大量氧自由基[5]。大量氧自由基使細(xì)胞膜的不飽合脂肪酸發(fā)生過(guò)氧化而損傷細(xì)胞膜；O2-、H2O2與DNA鏈中糖磷酸鹽反應(yīng)，使DNA發(fā)生斷裂而破壞DNA的結(jié)構(gòu)；氧自由基與蛋白分子中的甲硫氨酸、半胱氨酸等殘基直接發(fā)生反應(yīng)破壞蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)[6]，故而損傷心肌細(xì)胞。本研究顯示，對(duì)照組與模型組比較，模型組SOD活性顯著下降，而MDA含量明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。說(shuō)明窒息致心肌損傷時(shí)產(chǎn)生大量氧自由基，消耗較多超氧化物歧化酶，并產(chǎn)生大量脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛。

膽紅素是血紅蛋白的代謝產(chǎn)物，多年來(lái)一直被認(rèn)為是人體的排泄物， 近年的研究表明它是內(nèi)源性抗氧化劑，能有效清除氧自由基，防止氧自由基對(duì)組織產(chǎn)生損傷作用。研究證實(shí)膽紅素為生理性抗氧化劑，可能與膽紅素的分子結(jié)構(gòu)有關(guān)，其分子結(jié)構(gòu)中白蛋白的不對(duì)稱(chēng)性使膽紅素C10上的氫轉(zhuǎn)化為活性氫原子，而與超氧陰離子等自由基結(jié)合更容易，進(jìn)而使氧自由基清除等有關(guān)[1]。本研究證實(shí)，膽紅素組與模型組比較，膽紅素組心肌組織SOD活性顯著高于模型組MDA含量低于模型組，說(shuō)明膽紅素具有清除自由基的作用。

綜上所述，窒息新生SD大鼠心肌損傷時(shí)，膽紅素使心肌組織中SOD的活性升高，MDA含量下降，提示在新生大鼠窒息心肌損傷時(shí)膽紅素具有清除心肌組織產(chǎn)生的氧自由基，提高心肌組織抗氧自由基的能力。

[1] 楊俊娟，程宇彤，張鈞華.膽紅素和氧自由基與心血管疾病的關(guān)系[J].中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志，2006，14（8）：728-730.

[2] 張國(guó)慶，陳惠金，蔣明華，等.新生大鼠腦缺氧缺血再灌注損傷模型的建立[J].上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2003，23（1）：39-42.

[3]沈曉明，王衛(wèi)平.兒科學(xué)[M].第7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：98.

[4]金漢珍，黃德珉，宮希吉.實(shí)用新生兒學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：408.

[5] 金惠銘，王建枝.病理生理學(xué)[M].第7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：209-212.

[6] 何平等.三七總皂甙對(duì)新生鼠腦缺氧缺血再灌注損傷時(shí)心肌抗氧化系統(tǒng)的影響 [J].中國(guó)婦幼雜志 ，2010，21（4）：104-105.