于學江 張博靜 于江

曲美他嗪對糖尿病心肌病大鼠心肌細胞凋亡的影響

于學江 張博靜 于江

目的 探討曲美他嗪對糖尿病心肌病大鼠心肌細胞凋亡的影響。方法 SD大鼠50只，隨機分為對照組，糖尿病心肌病組，曲美他嗪治療組。第12周末采用Tunel法檢測光鏡下觀察心肌細胞凋亡指數(shù)，免疫組化法測定Bcl-2，Bax及p53基因蛋白表達。結果 曲美他嗪治療組減少p53、Bax的表達，增加Bcl-2表達，抑制細胞凋亡指數(shù)。結論 曲美他嗪能有效減少糖尿病大鼠心肌細胞凋亡。

曲美他嗪;糖尿病心肌病;細胞凋亡

糖尿病心肌病目前發(fā)病機制尚未闡明，近來研究發(fā)現(xiàn)與心肌細胞凋亡有密切關系。曲美他嗪作為改善心肌細胞代謝藥物已在臨床中廣泛應用，但對糖尿病心肌細胞凋亡的研究報道較少。本實驗觀察曲美他嗪對糖尿病心肌病大鼠心肌細胞凋亡的影響，為臨床治療該病應用中提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 從SD大鼠50只隨機分出10只作為正常對照組(NC)組，其余尾靜脈注射1%STZ溶液，3 d后采尾靜脈血測血糖，濃度大于16.7 mmol/L為糖尿病成模。普通飼料喂食6周，隨機抽取10只，糖尿病心肌病成模標準:微血管內皮細胞腫脹，線粒體變形，排列紊亂，基底膜不規(guī)則增厚，間質成纖維數(shù)量增多，細胞外基質膠原積聚。按隨機數(shù)字表方法將糖尿病大鼠隨機分為兩組:糖尿病心肌病組(DCM)組，曲美他嗪(QMTQ)組。其后治療組給予曲美他嗪7.5 mg/d，每天灌胃一次，給藥容量為10 m l/kg，NC組和DCM組給予等容量純凈水，持續(xù)6周。

1.2 指標測定 大鼠心肌常規(guī)石蠟切片后，心肌細胞凋亡按末端脫氧核苷酸轉移酶(TdT酶)介導帶熒光的dUTP缺口末端標記法(TUNEL)標記凋亡細胞核，切片計高倍視野鏡下的凋亡陽性細胞核數(shù)/總細胞核數(shù)，其平均值為細胞凋亡指數(shù)。Bcl-2，Bax及p53基因蛋白表達按試劑盒說明書免疫組織化學染色法檢測。

2 結果

心肌細胞凋亡指數(shù)與Bcl-2、Bax、p53基因蛋白表達 與NC組相比，TXL組和QMTQ組心肌細胞凋亡指數(shù)均增多;Bcl-2表達減弱，Bax、p53表達增強。與DCM組相比，QMTQ組心肌細胞凋亡指數(shù)明顯減少:Bcl-2表達顯著增強，Bax、p53表達顯著減弱。

3 討論

細胞凋亡是導致糖尿病心肌病心功能不全重要事件之一。p53、Bax以及Bcl-2蛋白是目前公認的影響細胞凋亡的重要因素。Kirshenbaum等研究心肌細胞凋亡的分子調節(jié)機制，結果證實p53基因為心肌細胞凋亡的激活因子，并且指導促凋亡基因Bax的轉錄，而且由p53激活的心肌細胞凋亡可以被抗凋亡基因Bcl-2所阻斷，支持了Bcl-2是一個強有力的抗凋亡因子。本實驗結果顯示DCM組大鼠心肌凋亡細胞數(shù)目明顯升高，與Backlund報道一致［1］。高血糖通過活性氧簇線粒體途徑誘導心肌細胞凋亡，并激活了p53基因并使p53蛋白糖基化，引起血管緊張素Ⅱ合成增加，血管緊張素Ⅱ再通過P38有絲分裂原激活蛋白激酶(MAPK)使p53蛋白磷酸化，最終引起心肌細胞凋亡［2］。同時，氧自由基亦可直接引起p53表達增加，抑制Bcl-2的表達，增強Bax的表達。應用曲美他嗪后，治療組大鼠心肌細胞中p53、Bax表達減弱、Bcl-2表達增強，與DCM組比較差異有顯著性，提示曲美他嗪可以通過調節(jié)p53、Bax、Bcl-2表達抑制心肌細胞凋亡。使心肌凋亡細胞數(shù)目顯著減少，考慮曲美他嗪可能通過阻斷上述途徑抑制糖尿病大鼠心肌細胞凋亡。

曲美他嗪是一種新型的改善心肌代謝的藥物，其細胞保護作用是通過直接抑制線粒體的一種酶獲得，使心肌能量代謝由脂肪酸代謝轉移為葡萄糖氧化［3］。在心肌代謝障礙的情況下，葡萄糖裂解ATP的再合成中需要的氧減少，因此能夠改善心肌的能量代謝，提高對低氧應激的耐受能力，抑制氧自由基的產(chǎn)生，從而保護了心肌細胞。但曲美他嗪對心肌細胞凋亡相關蛋白的作用機制，有待于進一步的研究。

［1］Backlund T，Palojoki E，Saraste A，Eriksson A，F(xiàn)inckenberg P，Kyto V，etal.Sustained cardiomyo-cyte apoptosis and left ventricular remodelling after myocardial infarction in experimental diab-etes.Diabetologia，2004，47(2):325-330.

［2］程國杰，崔亮.糖尿病心肌病與心肌細胞凋亡.北京醫(yī)學，2008，30(1):46-47.

［3］楊建華.曲美他嗪治療糖尿病心肌病的臨床觀察.臨床合理用藥，2011，2(4):30-31.

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