楊異 趙天成 高宗禮 王修珍

[摘要] 目的：探究非小細(xì)胞肺癌患者外周血血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2（vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR-2）和內(nèi)皮抑素（endostatin，ES）與臨床特征的相關(guān)性及其意義。方法：選取2009年在上海市第六人民醫(yī)院心胸外科接受手術(shù)治療的38例非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者，用ELISA法檢測(cè)其術(shù)前血清VEGFR-2、ES水平，分析二者相關(guān)性，并分析它們與年齡、性別、病理類型、腫瘤最大直徑、腫瘤內(nèi)血管密度（micro vessel density，MVD）、臨床分期相關(guān)性及意義。結(jié)果：患者血清ES水平為（20.29±6.10）μg/L，VEGFR-2水平為（7.42±4.28）μg/L，ES表達(dá)水平與VEGFR-2表達(dá)水平無明顯相關(guān)性（P＞0.05），ES與肺癌病灶內(nèi)MVD呈直線負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.867，r2=0.752），直線回歸方程為Y=32.002-0.499X（μg/L）（P＜0.001）；ES、VEGFR-2表達(dá)水平與其他臨床特征無明顯相關(guān)性（P＞0.05）。結(jié)論：胸外科NSCLC患者外周血ES水平可能影響肺癌病灶內(nèi)腫瘤內(nèi)血管密度，從而影響腫瘤的生長(zhǎng)，VEGFR-2、ES可能無法單獨(dú)作為接受手術(shù)治療NSCLC患者分期及預(yù)后判斷的有效指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 非小細(xì)胞肺癌；內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2；內(nèi)皮抑素

[中圖分類號(hào)] R734.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1673-7210（2011）11（c）-024-03

Research of the correlations between serum levels of VEGFR-2, endostatin and clinical characters in patients with non-small cell lung cancer

YANG Yi1,2, ZHAO Tiancheng2, GAO Zongli2, WANG Xiuzhen1

1.Department of Pathology, Medical College of Soochow University, College of Basic Medical and Biological Sciences, Jiangsu Province, Soochow 215006, China; 2.Department of cardio thoracic Surgery, the 6th People's Hospital Afficicated to Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200233, China

[Abstract] Objective: To study the relationship between clinical significance and the serum levels of vascular endothelial growth factor receptor 2 (VEGFR-2), endostatin (ES) inpatients with non-small cell lung cancer (NSCLC). Methods: The serum VEGFR-2, ES levels were detected by ELISA method in 38 patients with NSCLC in Shanghai 6th People's Hospital cardiothoracic surgery department in 2009. The correlations were analyzed among VEGFR-2, ES and the clinical characters, age, sex, pathology, diameter of tumor, clinical stage, micro vessel density (MVD) of tumor. Results: The serum level of ES [(20.29±6.10) μg/L] was uncorrelated with that of VEGFR-2 [(7.42±4.28) μg/L] (P＞0.05); the serum level of ES was correlated with MVD of tumor (r=-0.867, r2=0.752), the linear regression equation was [Y=32.002-0.499X (μg/L)] (P＜0.001); ES and VEGFR2 were uncorrelated with the other clinical characters. Conclusion: The serum level of ES may change the MVD of tumor, ES, VEGFR-2 and the clinical characters are uncorrelated in NSCLC patients. It suggests that VEGFR-2 and ES may be failed to be used as effective markers to predict stages and prognosis in NSCLC patients.

[Key words] Non-small cell lung cancer; Growth factor receptor 2; Endostatin

研究表明，肺癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素、多階段的過程，其發(fā)生、生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移依賴血管新生，腫瘤自身能產(chǎn)生或刺激人體產(chǎn)生血管生長(zhǎng)因子[以血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）為代表]，能促進(jìn)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，從而促使腫瘤生長(zhǎng)[1]；但是，腫瘤也會(huì)產(chǎn)生或促進(jìn)人體產(chǎn)生血管生長(zhǎng)抑制因子[以內(nèi)皮抑素（Endostatin，ES）為代表]，腫瘤新生血管的形成受上述兩方面的調(diào)節(jié)[1-4]。有研究顯示，非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者血清中ES和VEGF水平可能是評(píng)估肺癌惡性行為及預(yù)后的有用指標(biāo)[5-8]，但研究所統(tǒng)計(jì)病例多為非手術(shù)患者，為了解二者與接受手術(shù)治療的NSCLC患者臨床體征及病理類型、分期的相關(guān)性及意義，本文中筆者檢測(cè)了接受外科手術(shù)治療的NSCLC患者血清血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2（vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR-2）、ES水平，現(xiàn)將結(jié)果及分析報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

2009年在上海市第六人民醫(yī)院心胸外科接受手術(shù)治療的部分NSCLC患者38例，其中，男26例，女12例；年齡45～84歲，平均63.8歲；吸煙指數(shù)：0～1 200支/年，平均378支/年；術(shù)后病理：腫瘤最大直徑0.8～8 cm，平均3.7 cm；腺癌24例，鱗癌13例，腺鱗混合型1例；按2009年UICC分期標(biāo)準(zhǔn)分期：Ⅰ期20例，Ⅱ期11例，Ⅲ期7例。

1.2 主要試劑和儀器

ES ELISA試劑盒為美國(guó)Phoenix公司產(chǎn)品；VEGFR-2 ELISA試劑盒及腫瘤血管酶標(biāo)試劑CD34為美國(guó)R&D;公司生產(chǎn)，EGFR ELISA試劑盒為奧地利Bender公司產(chǎn)品，酶標(biāo)儀為芬蘭Thermo公司生產(chǎn)，型號(hào)DENLEY GRAGON WELLSCAN MK3。顯微鏡型號(hào)為Olympus BX-51，圖像捕捉系統(tǒng)型號(hào)為L(zhǎng)eica DFC-320。

1.3 標(biāo)本的收集、保存及制作

全組均于術(shù)前抽取外周靜脈血5 ml，5 000 r/min離心10 min，分離血清，然后將血清放入2 ml Eppendorf管中，-80℃低溫凍存?zhèn)溆?。血管密度檢測(cè)切片由上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院病理科制作，腫瘤蠟塊常規(guī)切片脫蠟后用標(biāo)準(zhǔn)方法CD34免疫組化染色。

1.4 檢測(cè)方法

ES、VEGFR-2：由上海西唐生物科技有限公司代為檢測(cè)，嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。血管密度：先用低倍顯微鏡掃視整個(gè)玻片尋找CD34染色標(biāo)記血管密度最高的區(qū)域即“熱點(diǎn)”后，在高倍顯微鏡視野下計(jì)數(shù)被染色的微血管數(shù)目，計(jì)數(shù)血管密度最高的3個(gè)區(qū)域，計(jì)平均值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，應(yīng)用方差分析和Pearson相關(guān)性分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 內(nèi)皮抑素與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2表達(dá)水平之間的相關(guān)性

血清ES水平為（20.29±6.10）μg/L，血清VEGFR-2水平為（7.42±4.28）μg/L，ES水平與VEGFR-2水平無明顯相關(guān)性（r=0.466，P＞0.05），見圖1。

2.2 內(nèi)皮抑素、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2表達(dá)水平與臨床特征、病理、分期之間相關(guān)性

ES表達(dá)水平與肺癌病灶內(nèi)MVD呈直線負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.867，r2=0.752），直線回歸方程為Y=32.002-0.499X（μg/L）（P＜0.001），見圖2。VEGFR-2表達(dá)水平與肺癌病灶內(nèi)MVD無相關(guān)關(guān)系（r=0.372，P＞0.05）。

ES表達(dá)水平與年齡、吸煙指數(shù)、腫瘤直徑相關(guān)性檢驗(yàn)r值分別為0.342、-0.269、0.428，均P＞0.05，與性別、病理、分期組間方差分析F值分別為0.254、0.571、0.750，均P＞0.05；VEGFR-2表達(dá)水平與年齡、吸煙指數(shù)、腫瘤直徑相關(guān)性關(guān)系檢驗(yàn)r值分別為0.298、0.337、0.413，均P＞0.05，與性別、病理、分期組間方差分析F值分別為0.492、0.542、0.381，均P＞0.05，各相關(guān)數(shù)據(jù)見表1。

3 討論

實(shí)體腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)依賴于新生血管生成，抑制新生血管生成就能抑制其生長(zhǎng)[2]。VEGF是最重要的新生血管生成促進(jìn)因子之一，VEGFR-2是其發(fā)揮促血管生成效應(yīng)因子的主要受體，其在VEGF的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及血管內(nèi)皮生成中起主導(dǎo)作用[9]。血管內(nèi)皮抑素是最有效的內(nèi)源性血管抑制因子[10]。因此，筆者選擇ES及VEGFR-2水平作為血管生成和抑制血管的代表，了解NSCLC患者二者之間及其與病理、分期等臨床特征的相關(guān)性。

盡管大量研究發(fā)現(xiàn)ES與VEGFR-2作用相對(duì)立，可能互為對(duì)方的下調(diào)因子[11]，但本研究發(fā)現(xiàn)兩者并沒有相關(guān)關(guān)系，提示NSCLC患者腫瘤的血管生成是各種血管生成促進(jìn)因子和抑制因子綜合作用的結(jié)果，而VEGF與ES僅是腫瘤血管生成中兩個(gè)最重要的促進(jìn)因子和抑制因子而已。

本研究發(fā)現(xiàn)，ES與肺癌病灶內(nèi)MVD呈直線負(fù)相關(guān)關(guān)系，即NSCLC患者血中ES表達(dá)水平越高，腫瘤內(nèi)MVD越少，r=-0.867，直線回歸方程為Y=32.002-0.499X（μg/L），P＜0.001，r2=0.752，X能夠解釋Y變異的75.2%，說明術(shù)前ES與MVD直線相關(guān)性有較好的專業(yè)意義，但也提示除了該自變量“MVD”對(duì)應(yīng)變量“術(shù)前ES”的影響外，還存在其他的自變量。此結(jié)果證明ES是最有效的內(nèi)源性血管抑制因子之一，同時(shí)也提示如果給予外源性ES，人為提高其在NSCLC患者血中水平，很有可能可以減少腫瘤MVD，從而抑制腫瘤生長(zhǎng)，為腫瘤治療指出了新的方向。

由于VEGF與ES在實(shí)體腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中有重要作用，能夠影響二者在體內(nèi)水平，就有可能影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，筆者試圖找出可能影響二者的臨床特征，但結(jié)果顯示，ES、VEGFR-2表達(dá)水平與年齡、性別、吸煙指數(shù)、病理類型均無明顯相關(guān)性，提示NSCLC患者體內(nèi)二者的表達(dá)是一個(gè)復(fù)雜、多因素作用的結(jié)果，還需進(jìn)一步研究。有研究觀察到肺癌患者外周血清中VEGF和ES的水平隨肺癌臨床分期的升級(jí)而增高[12-13]，因而認(rèn)為檢測(cè)二者水平可以了解腫瘤進(jìn)展及預(yù)后，但本組數(shù)據(jù)顯示，二者與腫瘤最大直徑、臨床分期均無明顯相關(guān)性（P＞0.05），而國(guó)際TNM臨床分期能夠很大程度預(yù)測(cè)預(yù)后，因此筆者推斷ES、VEGFR-2表達(dá)水平與NSCLC患者預(yù)后沒有明確相關(guān)性，也就很難根據(jù)此指標(biāo)來了解預(yù)后。分析報(bào)道ES、VEGFR-2可以預(yù)測(cè)預(yù)后的文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，不難發(fā)現(xiàn)，其病例大多是Ⅲ～Ⅳ期患者，而本組均為Ⅰ～Ⅲ期可手術(shù)患者，是否因期別明顯不同導(dǎo)致二者結(jié)果差異，有待深入研究。

雖然VEGF、ES分別作為新生血管生成促進(jìn)和抑制因子在肺癌發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用，但在本研究結(jié)果顯示可手術(shù)的NSCLC患者中二者并無明顯相關(guān)性，其與臨床特征之間也無明確的相關(guān)性，VEGFR-2、ES可能無法單獨(dú)作為NSCLC患者分期及預(yù)后判斷的有效指標(biāo)，ES與肺癌病灶內(nèi)MVD呈直線負(fù)相關(guān)關(guān)系，提示抑制血管生成治療可能是NSCLC治療的一個(gè)有效方法。

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（收稿日期：2011-10-11）