房春燕，孫文啟，史立宏，張秀榮，王琳，康白#（.濰坊醫(yī)學院應用藥理學實驗室，濰坊市6053；.山東濰坊市皮膚病防治所，濰坊市 606）

綜合評分法優(yōu)選絲瓜絡中利尿成分的提取工藝

房春燕1＊，孫文啟2，史立宏1，張秀榮1，王琳1，康白1#（1.濰坊醫(yī)學院應用藥理學實驗室，濰坊市261053；2.山東濰坊市皮膚病防治所，濰坊市 261061）

目的：優(yōu)選絲瓜絡中利尿成分的最佳提取工藝。方法：通過大鼠尿量選擇合適的提取方法；以大鼠24h尿量、絲瓜絡總提取物百分率的綜合評分為評價指標，以乙醇濃度、回流時間和乙醇用量為影響因素進行正交試驗，優(yōu)選提取絲瓜絡利尿成分的最佳工藝。結果：醇回流法為最合適的提取方法。乙醇濃度對評價指標有顯著影響，回流時間及乙醇用量對評價指標無顯著影響。最佳提取工藝為用70%的乙醇回流提取2次，第1次加8倍量乙醇提取1.5h，第2次加8倍量乙醇提取1h。結論：該方法簡便、科學，可為開發(fā)絲瓜絡的藥理作用、臨床應用提供理論依據。

絲瓜絡；提??；正交試驗；綜合評分法

充血性心力衰竭是臨床常見病、多發(fā)病，利尿劑可以減輕患者的水鈉潴留。絲瓜絡是葫蘆科植物絲瓜（Luffa cylindrica（L.）Roem.）的成熟果實維管束，作為一種具有通經活絡、清熱解毒功效的藥材[1]，常應用于中藥方劑中。現代藥理學研究表明，絲瓜絡具有抗炎、鎮(zhèn)痛、強心利尿、降血脂等功效[2，3]，但目前對絲瓜絡的研究不夠深入。為了更好地開發(fā)利用絲瓜絡，本研究對不同的提取方法進行比較，采用正交試驗法，利用藥效學指標進行綜合評分，深入探討影響絲瓜絡利尿成分提取的諸多因素，旨在驗證藥效的同時達到篩選工藝的目的，以期為開發(fā)絲瓜絡的藥理作用、臨床應用提供理論依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

KDM型調溫電熱套（龍口市電爐制造廠）；KQ-500型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；SHZ-D型循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責任公司）；RE-52AA型旋轉蒸發(fā)器（上海振捷實驗設備有限公司）；簡易代謝籠，由濰坊醫(yī)學院應用藥理學實驗室自制。

1.2 試藥

絲瓜絡，購于濰坊市藥材公司，由筆者鑒定為真品；乙醇為分析純。

1.3 動物

Wistar大鼠32只，♀♂兼用，體重（200±25）g，由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司動物中心提供（動物生產許可證號：SCXK（魯）2008-0002）。

2 方法

2.1 前處理

將鑒定好的絲瓜絡用清水洗凈，置于日光下干燥，干燥完全后用粉碎機粉碎，然后置于恒溫干燥箱內干燥，備用。

2.2 絲瓜絡利尿成分提取方法的優(yōu)選

2.2.1 水煎煮法 取絲瓜絡粉末100g，加6倍量水，浸泡0.5h，加熱煎煮1.5h，過濾；藥渣再加6倍量水，煎煮1h，合并2次濾液，過濾，濃縮，定容至100mL，備用。

2.2.2 醇回流法 取絲瓜絡粉末100g，加6倍量70%乙醇，浸泡0.5h，加熱回流1.5h，過濾；藥渣再加6倍量70%乙醇，回流1h，過濾，合并2次濾液，減壓回收乙醇，定容至100mL，備用。

2.2.3 超聲波提取法 取絲瓜絡粉末100g，加6倍量70%乙醇，浸泡0.5h，超聲提取2次（功率：150W，頻率：30kHz），每次20min，合并超聲液，定容至100mL，備用。

2.2.4 3種提取方法的比較 預先將大鼠置于代謝籠中適應3d，選用篩選合格的大鼠（2h內的排尿量超過所給水負荷的40%）隨機分為4組（即空白對照、水煎煮、醇回流、超聲波組），分別ig生理鹽水和3種方法所得提取液10g·kg-1，ig 5d后，采用代謝籠法，測定大鼠24h尿量變化。實驗前24h大鼠禁食不禁水，先給予50mL·kg-1生理鹽水負荷后，逐個充分擠壓大鼠下腹部使膀胱排空，末次給藥30min后將大鼠置入代謝籠內，連續(xù)記錄24h尿量（每4h收集尿液1次，避免揮發(fā)）。

2.3 統計學方法

3 結果

3.1 不同提取方法所得利尿成分對尿量的影響

通過比較水煎煮法、醇回流法、超聲波提取法對大鼠尿量的影響可知，3種提取方法所得絲瓜絡提取物均可使大鼠24h尿量顯著增加（P＜0.01或P＜0.05），其中以醇回流法所得提取物作用最為顯著，故選擇醇回流法提取絲瓜絡利尿成分。不同提取方法所得利尿成分對尿量的影響見表1。

表1 不同提取方法所得利尿成分對尿量的影響Tab 1 Effects of diuretic ingredients by different methods on urine volum（e

表1 不同提取方法所得利尿成分對尿量的影響Tab 1 Effects of diuretic ingredients by different methods on urine volum（e

與空白對照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.blank control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別空白對照組水煎煮組醇回流組超聲波組24h尿量/mL 12.06±3.0014.30±2.43＊18.04±1.76＊＊16.09±2.28＊＊

3.2 絲瓜絡醇回流提取工藝參數優(yōu)選

3.2.1 正交試驗設計 根據預試驗結果，選用乙醇濃度（A）、回流時間（B）、乙醇用量（C）作考察因素，每個因素采用3個水平，以L9（34）正交表進行正交試驗。因素水平見表2。

表2 因素水平Tab 2 Factors and levels

3.2.2 正交試驗的樣品制備 稱取適量絲瓜絡藥材9份，每份按正交試驗表的設計進行提取，加入乙醇，加熱回流，過濾后將所得的濾液減壓回收乙醇后濃縮為100mL，備用。

3.2.3 總提取物百分率的測定 精密量取樣品適量，置于已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘渣于105℃干燥3h，取出，置干燥器中放置30min后迅速稱重，計算總提取物百分率（總提取物百分率＝干凈膏重（g）×提取液總體積（mL）/取樣體積（mL）×原藥材重×100%）。

3.2.4 正交試驗結果 以大鼠24h尿量、絲瓜絡總提取物百分率的綜合評分為評價指標，評分時以各指標的最大值為參照將數據進行歸一化，再給出不同的權重[4]。根據指標的貢獻，大鼠24h尿量、絲瓜絡總提取物百分率的權重系數分別設為0.7、0.3，綜合評分（M）＝0.7X×100/21.57+0.3Y×100/3.70（X、Y分別為24h尿量、絲瓜絡總提取物百分率）。結果，各因素作用的主次順序為A＞C＞B，即乙醇濃度對提取效果影響最大，且具有顯著性差異（P＜0.05），乙醇用量影響較小，而提取時間影響最小。從節(jié)約生產成本、縮短生產周期等方面綜合考慮，確定最佳提取工藝為A2B2C3，即用70%的乙醇回流提取2次，第1次加8倍量乙醇提取1.5h，第2次加8倍量乙醇提取1h。正交試驗結果見表3；方差分析結果見表4。

表3 正交試驗結果Tab 3 Results of orthogonal test

表4 方差分析結果Tab 4 Results of variance analysis

4 討論

通過對不同提取方法的比較發(fā)現，醇回流法適合絲瓜絡利尿成分的浸出。通過正交試驗看出，乙醇濃度對大鼠24h尿量和總提取物百分率有顯著影響，說明乙醇濃度為影響絲瓜絡利尿成分提取的主要因素，這為絲瓜絡利尿成分的提取提供了理論依據。

本研究以大鼠24h尿量、絲瓜絡總提取物百分率為指標進行考察，根據指標的貢獻，將大鼠24h尿量、絲瓜絡總提取物權重系數分別設為0.7和0.3，有利于兼顧各指標的綜合效應，避免用單一指標進行工藝優(yōu)化時產生偏差。采用正交設計，綜合評分優(yōu)選醇提工藝條件，得出乙醇回流法提取絲瓜絡利尿成分的優(yōu)化工藝條件為用70%的乙醇回流提取2次，第1次加8倍量乙醇提取1.5h，第2次加8倍量乙醇提取1h。該提取工藝簡單、科學、經濟、穩(wěn)定，具有很強的可操作性，可為指導制劑生產提供參考數據，也可為開發(fā)絲瓜絡的利尿應用價值提供理論依據。

[1] 李廣勛主編.中藥藥理毒理與臨床[M].天津：天津科技翻譯出版公司，1992：50.

[2] 康 白，張義軍，李華洲.絲瓜絡藥理作用的研究[J].中草藥，1993，24（5）：248.

[3] 李 菁，付詠梅，朱偉杰，等.絲瓜絡對實驗性高血脂大鼠的降血脂效應[J].中國病理生理雜志，2004，20（7）：1264.

[4] 于魯海，李艷菊，孫 力，等.綜合評分法篩選驅蟲斑鳩菊水提取液澄清工藝[J].中國藥房，2007，18（33）：2577.

Optimization of Extraction Technology of the Diuretic Ingredients in Luffae cylindrica by Grading Methods

FANG Chun-yan，SHI Li-hong，ZHANG Xiu-rong，WANG Lin，KANG Bai（Applied Pharmacology Laboratory，Weifang Medical University，Weifang 261053，China）
SUN Wen-qi（Weifang Dermatosis Preventive Institute，Weifang 261061，China）

OBJECTIVE：To optimize the extraction technology of diuretic ingredients in Luffae cylindrica.METHODS：The appropriate method for the diuretic ingredients extraction was chosen.The extraction technology of diuretic ingredients in L.cylindrica was optimized by orthogonal experiment with urine volume and itegracted assessment of percent of extracts of L.cylindrica as index and with concentration of alcohol，the extracting time and the amount of alcohol as factors.RESULTS：Alcohol backflow technology was the most appropriate method.The extracting efficiency was affected by the concentration of alcohol significantly，and the influence of the extracting time and the amount of alcohol had no significance.The optimal process is as follows：extracting for 2times in 70%alcohol，8folds alcohol，1.5hour for the first time，and 1hour for the second time.CONCLUSION：The method is simple，science，and coulde be provided the theory basis for pharmacological effects and clinical application of L.cylindrica.

Luffae cylindrica；Extraction；Orthogonal experiment；Grading methods

R285；R284.2

A

1001-0408（2011）39-3686-02

＊講師，碩士研究生。研究方向：心血管藥理學。E-mail：chunyanfang@yahoo.com.cn

#通訊作者：教授，碩士研究生導師。研究方向：心血管藥理學。電話：0536-8462498。E-mail：kb615@163.com

2010-11-06

2011-04-13）