孫洪勝，傅春升，張紅艷（.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，濟(jì)南市 500；.山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南市50355）

葛根素固體自微乳制劑的制備及其質(zhì)量評(píng)價(jià)Δ

孫洪勝1＊，傅春升1，張紅艷2（1.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，濟(jì)南市 250011；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南市250355）

目的：制備葛根素固體自微乳制劑，并評(píng)價(jià)其質(zhì)量。方法：通過改變處方組成、稀釋倍數(shù)、介質(zhì)、溫度等考察影響自微乳化效率和粒徑大小的因素，采用激光粒度分析儀測(cè)定成乳后粒徑，并通過透射電鏡對(duì)成乳后的微乳進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察；通過3個(gè)月的加速試驗(yàn)考察葛根素固體自微乳的穩(wěn)定性。結(jié)果：處方組成、溫度等因素對(duì)自微乳化效率和粒徑大小都有影響；稀釋倍數(shù)、分散介質(zhì)等在一定范圍內(nèi)影響不大。葛根素固體自微乳成乳后為圓球形，平均粒徑為30nm。結(jié)論：葛根素固體自微乳粒徑小，穩(wěn)定性好。

葛根素；自微乳化效率；固體自微乳

葛根素（Puerarin）是豆科植物野葛或同屬植物根中提取的一種有效成分，為異黃酮類化合物[1]。具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、降低血壓、改善微循環(huán)等作用，臨床上廣泛應(yīng)用于心腦血管疾病的治療[2]。但其水溶性和脂溶性都較差，口服吸收少，生物利用度低，這在一定程度上影響了其療效的發(fā)揮。三七總皂苷具有跟葛根素相似的藥理活性[3]，口服無毒，且具有乳化劑的作用，可作為表面活性劑使用。為了提高葛根素的口服生物利用度和穩(wěn)定性，降低乳化劑用量，本課題組在葛根素普通自微乳的基礎(chǔ)上加入三七總皂苷作為乳化劑的一部分，將其制成固體自微乳制劑，并對(duì)其進(jìn)行了質(zhì)量評(píng)價(jià)。

1 儀器與試藥

85-2恒溫磁力攪拌器（江蘇金壇中大儀器廠）；60C醫(yī)用低速離心機(jī)（安新縣白洋離心機(jī)廠）；MS3000激光粒度分析儀（英國(guó)馬爾文儀器有限公司）；GEM-100CXR透射電鏡（日本電子株式會(huì)社）；分析天平（奧豪斯國(guó)際貿(mào)易（上海）有限公司）；5200H超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；HH·S21·6雙列六孔電熱恒溫水浴鍋（山東醫(yī)療器械廠）。

葛根素原料（含量＞99%，安康禾燁麥迪森植物藥業(yè)有限公司）；三七總皂苷原料（含量＞90%，云南植物藥業(yè)有限公司）；油酸乙酯（上海千為油酯科技有限公司）；Cremophor聚氧乙烯蓖麻油（EL）-40（德國(guó)BASF公司）；吐溫-80（天津市天大化工實(shí)驗(yàn)廠）；聚乙二醇（PEG）400（天津市科密歐化學(xué)試劑發(fā)展中心）；甘露醇（天津市大茂化學(xué)試劑廠）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 葛根素自微乳處方

通過考察葛根素在各種表面活性劑中的飽和溶解度，初步篩選出油相、乳化劑和助乳化劑，再通過考察兩種乳化劑的混合使用及混合乳化劑與不同油相的配伍變化，確定油相為油酸乙酯，乳化劑為吐溫-80∶EL-40＝1∶2，助乳化劑為PEG400。

2.1.1 偽三元相圖的研究 采用偽三元相圖的方法，在干燥潔凈的燒杯中，精密稱取油相與混合乳化劑按1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、4∶6、7∶3、8∶2、9∶1的比例混合，兩者的重量比記為Km，置于37℃保溫，逐滴加入水，攪拌混勻，繪制偽三元相圖（見圖1），因1∶9、9∶1這兩個(gè)比例的微乳面積太小，故不易繪圖，圖中陰影區(qū)為微乳區(qū)。各微乳區(qū)均延伸到水相頂點(diǎn)，即可被水無限稀釋。由圖1可知，當(dāng)Km＝5∶5時(shí)，微乳區(qū)域最大，所以選擇Km＝1。

2.1.2 含三七總皂苷的葛根素自微乳處方 在偽三元相圖的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)幾個(gè)葛根素自微乳處方，并在此基礎(chǔ)上加入適當(dāng)比例的三七總皂苷，通過綜合考慮自微乳化后的澄清度、自微乳化完全時(shí)間長(zhǎng)短以及自微乳后粒徑的大小，確定最佳處方比例為油酸乙酯∶吐溫-80/EL-40（1∶2）∶PEG 400∶葛根素∶三七總皂苷＝15∶35∶35∶6∶9。

圖1 偽三元相圖A.Km=8:2；B.Km=7:3；C.Km=6:4；D.Km=5:5；E.Km=4:6；F.Km=3:7；G.Km=2:8Fig 1 Pseudo-ternary phase diagramsA.Km=8:2；B.Km=7:3；C.Km=6:4；D.Km=5:5；E.Km=4:6；F.Km=3:7；G.Km=2:8

2.1.3 固體吸附材料的選擇 通過考察各種常用可溶性固體吸附材料的吸附能力，確定了由甘露醇為吸附材料，充分吸附自微乳濃縮液將其固體化，手動(dòng)轉(zhuǎn)入硬膠囊殼。

2.2 葛根素固體自微乳制劑的制備

2.2.1 葛根素自微乳處方組成 葛根素（主藥）占6%、油酸乙酯占15%、吐溫-80∶EL-40＝2∶1占35%、PEG400占35%、三七總皂苷占9%和甘露醇（固體吸附材料）。

2.2.2 制備方法 稱取適量的葛根素原料，加入處方量的混合乳化劑、助乳化劑、三七總皂苷和油酸乙酯，37℃混勻，得到均一的葛根素自微乳濃縮液。按1g甘露醇吸附0.4g葛根素自微乳濃縮液的比例，稱取適量甘露醇，將葛根素自微乳濃縮液加入到甘露醇中，邊加邊攪拌均勻。加少量水制軟材，過14目篩制備顆粒，40℃干燥2h，整粒，手工裝入硬膠囊。每粒膠囊約重500mg。

2.2.3 制劑性狀 所制備的葛根素固體自微乳為淡黃色顆粒。

2.3 自微乳化效率的影響因素考察

影響自微乳化效率的因素包括處方組成、溫度、轉(zhuǎn)速、介質(zhì)、稀釋倍數(shù)以及胃腸道酯解作用等。本試驗(yàn)就處方中藥物含量、處方中油相含量、稀釋倍數(shù)、分散介質(zhì)、溫度等因素對(duì)自微乳化效率的影響進(jìn)行考察。

2.3.1 處方中藥物含量的影響 為了考察處方中載藥量對(duì)粒徑的影響，將處方中藥物比例從2%增至12%，考察粒徑的變化情況，繪制藥物含量-粒徑曲線圖。結(jié)果，當(dāng)藥物含量由2%增至6%時(shí)，粒徑的增大不明顯；隨著載藥量的繼續(xù)增大，其引起的粒徑增大明顯，當(dāng)載藥量達(dá)到10%時(shí)，乳滴的粒徑增至100nm左右，體系變得不穩(wěn)定，澄清度明顯下降，室溫久置后有藥物從體系中析出。藥物含量-粒徑曲線見圖2。

圖2 藥物含量-粒徑曲線圖Fig 2 Drug content-particle size curves

2.3.2 處方中油相含量的影響 為了考察處方中含油量對(duì)粒徑的影響，將油相比例從10%增至25%，考察粒徑變化情況，繪制油相含量-粒徑曲線圖。結(jié)果，含油量由10%增至20%，粒徑的增大變化不明顯，都低于50nm；當(dāng)含油量超過20%后，隨著油相含量的增大，粒徑增大明顯，到含油量為30%時(shí)，粒徑接近120nm。油相含量-粒徑曲線見圖3。

2.3.3 處方中三七總皂苷含量的影響 為了考察處中三七總皂苷含量對(duì)粒徑的影響，將三七總皂苷比例從0增至30%，考察粒徑變化情況，繪制三七總皂苷含量-粒徑曲線圖。結(jié)果，隨著三七總皂苷含量的增加，粒徑增大不明顯，但在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，三七總皂苷含量由0增至9%，體系流動(dòng)性好，自微乳化時(shí)間短，此后，隨著三七總皂苷含量的增加，體系的黏稠度增加，自微乳化時(shí)間變長(zhǎng)，且體系的穩(wěn)定性降低。三七總皂苷含量-粒徑曲線見圖4。

圖3 油相含量-粒徑曲線圖Fig 3 Oil phase content-particle size curves

圖4 三七總皂苷含量-粒徑曲線圖Fig 4 Total saponins of panax pseudoginseng content-particle size curves

2.3.4 稀釋體積的影響 按處方比例制備葛根素固體自微乳，分別采用10、50、100、200、250、500倍37℃保溫的蒸餾水稀釋，以自微乳化效率和粒徑為指標(biāo)，考察稀釋體積對(duì)自微乳化性能的影響。結(jié)果，各種比例下均能得到澄清度良好的自微乳溶液，且自微乳化時(shí)間均＜1min，但當(dāng)稀釋倍數(shù)過大時(shí)（＞200倍），光密度太低，激光粒度儀因散射光強(qiáng)度不足難以測(cè)定粒子的粒徑。

2.3.5 分散介質(zhì)的影響 按處方比例制備葛根素固體自微乳，分別用水、9%NaCl、0.1mol·L-1HCl和pH6.8的PBS稀釋相同倍數(shù)，以自乳化效率和粒徑為指標(biāo)，分別考察分散介質(zhì)的影響。結(jié)果，不同分散介質(zhì)對(duì)自微乳化效率和粒徑的影響未見明顯區(qū)別，所形成的微乳均保持淡藍(lán)色透明有乳光的狀態(tài)。

2.3.6 溫度的影響 一般隨溫度升高，藥物在水相中溶解度增加，但當(dāng)溫度過高（接近曇點(diǎn)時(shí)），由于分子熱運(yùn)動(dòng)加劇，表面活性劑與水分子間的氫鍵斷裂，導(dǎo)致油滴間互相碰撞和合并，使液滴增大，微乳乳滴周圍的結(jié)構(gòu)變化也會(huì)使液滴增大，粒徑增加，穩(wěn)定性降低，不利于微乳的穩(wěn)定存在，因此通常制備和放置時(shí)的溫度都應(yīng)控制在表面活性劑的曇點(diǎn)之下。

本試驗(yàn)中，按處方比例制備葛根素固體自微乳，分別于25、37、60℃水浴下操作，通過對(duì)自微乳化時(shí)間、成乳后粒徑大小和穩(wěn)定性的考察，比較不同溫度的影響。結(jié)果，隨著溫度的升高，葛根素固體自微乳化的時(shí)間減少，成乳后的粒徑也減小，但相差不大，均小于50nm。并且60℃下自微乳化的粒徑最小，但室溫靜置過夜后，粒徑稍微變大，說明此溫度下制得的自微乳不穩(wěn)定。溫度對(duì)自微乳化效率的影響見表1。

表1 溫度對(duì)自微乳化效率的影響Tab 1 Effect of temperature on the efficiency of self-microemulsifying

2.4 葛根素固體自微乳在自微乳化后的形態(tài)考察

取葛根素固體自微乳適量，用100倍37℃保溫的蒸餾水稀釋，至自微乳化完全后，取自微乳化溶液適量，滴加到載有Formvar支持膜的銅網(wǎng)上，自然晾干后將銅網(wǎng)置于蠟板上。取2%磷鎢酸1滴滴在蠟板上，將晾干的銅網(wǎng)倒覆于染液上，負(fù)染15min，然后用蒸餾水沖洗、吸干，上透射電鏡觀察。結(jié)果，葛根素固體自微乳加水后形成的微乳均呈圓球形，液滴粒徑在10～50nm范圍的，平均粒徑在30nm左右。葛根素固體自微乳透射電鏡照片見圖5。

圖5 葛根素固體自微乳透射電鏡照片（×45000）Fig 5 TEM of Puerarin solid SMEDDS（×45000）

2.5 葛根素固體自微乳穩(wěn)定性考察

制備3批葛根素固體自微乳，以其外觀和自微乳化時(shí)間、成乳后粒徑為指標(biāo)，考察葛根素固體自微乳的穩(wěn)定性。

2.5.1 光穩(wěn)定性試驗(yàn) 將裝有葛根素固體自微乳的安瓿封口，置于光照強(qiáng)度為4000lx的條件下，放置10d，分別于放樣后5、10d取樣，考察光穩(wěn)定性，結(jié)果見表2。

2.5.2 熱穩(wěn)定性試驗(yàn) 將裝有葛根素固體自微乳的安瓿封口，分別置于40、60℃的恒溫箱中考察10d，分別于放樣5、10d取樣，考察熱穩(wěn)定性，結(jié)果見表2。

2.5.3 相對(duì)濕度試驗(yàn) 將裝有葛根素固體自微乳的安瓿封口，置于相對(duì)濕度為75%和92.5%的條件下，放置10d，分別于放樣后5、10d取樣，考察不同濕度下的穩(wěn)定性，結(jié)果見表2。

表2 穩(wěn)定性考察結(jié)果（n＝3）Tab 2Results of stability tests（n＝3）

由表2可知，葛根素固體自微乳性質(zhì)較為穩(wěn)定，不易受溫度、濕度和光照的影響。

2.5.4 恒溫加速試驗(yàn) 將3批裝有葛根素固體自微乳的安瓿封口，室溫放置1～3個(gè)月，考察其穩(wěn)定性，結(jié)果見表3。

表3 加速試驗(yàn)考察結(jié)果Tab 3 Results of accelerated test

由表3可知，葛根素固體自微乳的性狀、含藥量均符合要求，表面在3個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3 討論

本研究通過對(duì)葛根素固體自微乳的性狀及其自乳化效率影響因素的考察對(duì)葛根素固體自微乳進(jìn)行了質(zhì)量評(píng)價(jià)?？梢钥闯觯幏街兴幬锖?、油相含量、乳化劑含量、三七總皂苷含量和溫度等因素對(duì)自乳化效率都有影響；稀釋倍數(shù)、分散介質(zhì)等在一定范圍內(nèi)影響不大。通過透射電鏡觀察了葛根素固體自微乳自微乳化完全后為圓球形，且粒徑均在50nm以內(nèi)。從穩(wěn)定性考察可以看出，葛根素固體自微乳性質(zhì)較為穩(wěn)定，不易受溫度、濕度和光照的影響。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:925.

[2] 馬佳佳，李紅梅，董志宇，等.葛根素的藥理作用及其臨床應(yīng)用[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，23：64.

[3] 張玉軍.三七總皂苷的藥理研究進(jìn)展[J].廣西醫(yī)學(xué)，2009，4（31）：589.

Preparation of Puerarin Solid Self-microemulsifying Drug Delivery System and Quality Evaluation of It

SUN Hong-sheng，F(xiàn)U Chun-sheng（The Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250011，China）
ZHANG Hong-yan（Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China）

OBJECTIVE：To prepare Puerarin solid self-microemulsifying drug delivery system（SMEDDS），and to evaluate its quality.METHODS：The influencing factors of the efficiency of self-emulsifying and the particle size were investigated by changing the formulation composition，dilution，medium，temperature etc.The particle size was determined by the laser particle size analyzer，and the morphology was investigated by TEM.Besides，the stability of Puerarin solid SMEDDS was studied by 3months of accelerated test.RESULTS：The composition，temperature，etc.had some impactions to the efficiency of self-emulsifying and particle size，but the dilution，dispersion，etc.had little effect in a certain range.Puerarin solid SMEDDS was round after it was dissolved into ME and the average diameter was 30nm.CONCLUSION：Puerarin solid SMEDDS are stable with small particle size.

Puerarin；Efficiency of self-microemulsifying；Solid self-microemulsifying drug delivery system

R283.69；R284.2

A

1001-0408（2011）39-3677-03

Δ山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（2009-086）

＊主任藥師，碩士研究生導(dǎo)師。研究方向：中藥制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與控制。電話：0531-82929059。E-mail：shs7777@163.com

2011-02-13

2011-05-26）