陳仕才， 宋新明， 陳志輝， 李明哲， 何裕隆， 詹文華

(中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院胃腸胰外科,廣東 廣州 510080)

CD133和CD44在結(jié)直腸癌細(xì)胞中的表達(dá)及其與患者5年生存率的相關(guān)性分析*

陳仕才， 宋新明△， 陳志輝， 李明哲， 何裕隆， 詹文華

(中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院胃腸胰外科,廣東 廣州 510080)

目的： 探討不同CD133/CD44細(xì)胞亞群的成瘤能力及CD133、CD44的表達(dá)水平對(duì)根治性結(jié)直腸癌患者術(shù)后生存率的影響，明確CD133和CD44作為結(jié)直腸癌腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志物的意義。方法利用流式細(xì)胞術(shù)分選出SW480細(xì)胞系中CD133和CD44標(biāo)記的不同細(xì)胞亞群，比較其在裸鼠皮下成瘤情況；并利用免疫組化的方法觀察CD133和CD44在90例結(jié)直腸癌患者石蠟切片標(biāo)本的表達(dá)情況，對(duì)CD133、CD44與患者臨床病理資料及生存率進(jìn)行分析。結(jié)果CD133+CD44+細(xì)胞群成瘤能力明顯優(yōu)于其它各組。CD133和CD44均在細(xì)胞膜上表達(dá)，兩者均與患者性別、年齡 、腫瘤位置、腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度及UICC分期無關(guān)(Pgt;0.05)。Kaplan-Meier生存分析法顯示，CD133高表達(dá)組5年生存率為45.2％，CD133低表達(dá)組5年生存率為83.8％，兩者有明顯差異(Plt;0.01)；而CD44高表達(dá)組5年生存率(75.6％)與低表達(dá)組(70.1％)無明顯差異(Pgt;0.05)；其中CD133/CD44同時(shí)高表達(dá)者5年生存率明顯較差(Plt;0.01)。Cox風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析結(jié)果表明，CD133、肝轉(zhuǎn)移、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的幾個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素(Plt;0.05)。結(jié)論CD133可作為結(jié)直腸癌腫瘤干細(xì)胞的良好標(biāo)志物。CD133是影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，其表達(dá)水平越高，預(yù)后越差；盡管CD44與結(jié)直腸癌患者預(yù)后無明顯相關(guān)性，但聯(lián)合檢測(cè)CD133/CD44卻能更好地判斷患者的預(yù)后情況。

CD133； CD44； 結(jié)直腸腫瘤； 預(yù)后

結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)是最常見的惡性腫瘤之一。近年來，盡管通過外科手術(shù)、放化療等手段使其治療效果有了顯著提高，但其所致的死亡率仍高居癌癥死因第二位[1]，復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移是影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的根本原因。

腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cells)是目前腫瘤研究中的熱點(diǎn)問題。該學(xué)說認(rèn)為腫瘤組織中存在極少量腫瘤細(xì)胞，在腫瘤發(fā)展中充當(dāng)干細(xì)胞的角色，具有自我更新和無限分化、增殖潛能，在啟動(dòng)腫瘤形成和生長中起著關(guān)鍵性的作用，決定了腫瘤的形成、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移；而其余的大多數(shù)腫瘤細(xì)胞經(jīng)過短暫的分化后最終死亡。自1997年Bonnet等[2]分離出人急性粒細(xì)胞白血病干細(xì)胞以來，至今已有多種實(shí)體腫瘤如乳腺癌、膠質(zhì)瘤等分離純化出腫瘤干細(xì)胞[3,4]。目前用來分離腫瘤干細(xì)胞的方法主要是利用腫瘤細(xì)胞不同表面抗原標(biāo)記，將特殊標(biāo)記的單抗結(jié)合到細(xì)胞上，經(jīng)流式細(xì)胞儀或免疫磁珠將腫瘤細(xì)胞分選為不同的亞群，再檢測(cè)各亞群細(xì)胞的體外克隆傳代及體內(nèi)成瘤能力，從而篩選出腫瘤干細(xì)胞的表面標(biāo)記。CD133和CD44是目前研究較多的2種結(jié)直腸癌腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物[5-9]。CD133抗原的相對(duì)分子量為120 kD，有5個(gè)跨膜片段的糖蛋白，包括細(xì)胞膜外的氨基末端、2個(gè)短的細(xì)胞內(nèi)環(huán)、2個(gè)長的細(xì)胞外環(huán)以及細(xì)胞內(nèi)的羧基端，并且CD133集中在膜突出部。CD44是一種跨膜糖蛋白，參與許多細(xì)胞功能，包括生長、生存、分化及死亡等；在細(xì)胞的黏附、移動(dòng)及轉(zhuǎn)移過程中起著重要的作用。

腫瘤干細(xì)胞與結(jié)直腸癌的起源、發(fā)展密切相關(guān)，然而CD133、CD44可否作為結(jié)直腸癌腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)志物目前尚存在較大的爭議[10，11]；且兩者與結(jié)直腸癌患者預(yù)后的關(guān)系尚未明確。有報(bào)道提示CD133是影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的一個(gè)重要因素[12-15]，表達(dá)水平越高，預(yù)后越差；然而另有報(bào)道指出CD133表達(dá)與生存率無關(guān)[16,17]。而關(guān)于CD44與結(jié)直腸癌患者預(yù)后的關(guān)系更鮮有報(bào)道。本文擬通過裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)比較SW480細(xì)胞系中不同CD133/CD44細(xì)胞亞群的成瘤能力，并利用免疫組化的方法觀察兩者在腫瘤組織中的原位表達(dá)情況與結(jié)直腸癌患者臨床病理特點(diǎn)及預(yù)后的關(guān)系，為結(jié)直腸癌患者的治療找到更好的靶點(diǎn)。

材 料 和 方 法

1裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)

1.1材料 SW480細(xì)胞系及5-6周雄性裸鼠由中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。Anti-CD133-PE和anti-CD44-PECY5抗體均購自BD公司，DMEM/F12培養(yǎng)基、0.25％胰酶、0.02％EDTA和青、鏈霉素混合液購自南京凱基生物公司；特級(jí)新生小牛血清購自杭州四季青公司。使用的流式細(xì)胞儀為Beckman Coulter產(chǎn)品，另配備超凈工作臺(tái)、CO2恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱(Thermo)、高速離心機(jī)和倒置顯微鏡(Olympus)等。

1.2方法 將SW480細(xì)胞系接種于含10％小牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基中，置于5％CO2、37 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞，PBS清洗后用含0.25％胰蛋白酶和0.02％EDTA的消化液消化，小心吹打制成單細(xì)胞懸液，臺(tái)盼藍(lán)染色并計(jì)數(shù),按1×1010cells/L重懸于PBS緩沖液中，取2支無菌試管，每管分別加入2 mL細(xì)胞懸液，即每管2×107個(gè)細(xì)胞，然后每管加入anti-CD133-PE和anti-CD44-PECY5抗體各20 μL，立即用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)、分選。將分選出來不同數(shù)量級(jí)的各亞群細(xì)胞分別接種于雄性裸鼠前腋皮下，由中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心負(fù)責(zé)飼養(yǎng)動(dòng)物，每周觀察各組腫瘤形成過程，測(cè)量其長軸(a)、短軸(b)，并根據(jù)公式V=ab2/2計(jì)算腫瘤體積，8周后處死動(dòng)物，行HE染色檢查。

2結(jié)直腸癌患者標(biāo)本免疫組化實(shí)驗(yàn)

2.1入選病人資料 選取曾于我院行根治性切除術(shù)的結(jié)直腸癌患者標(biāo)本90例，組織類型均為腺癌，并取其中10 例癌旁正常組織(距離癌組織10 cm以上)作對(duì)照。所有入選病人確診時(shí)均無多源性腫瘤、家族性腺瘤性息肉病或炎癥性腸病病史；手術(shù)前后均未行放化療；有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者均為肝轉(zhuǎn)移，且可行根治性切除。為減少手術(shù)因素的影響，術(shù)后3個(gè)月內(nèi)死亡者未納入該研究，排除年齡大于80歲患者。所有入選患者隨訪不少于5年，只有確定為術(shù)后因結(jié)直腸癌死亡者視為隨訪結(jié)束，中位隨訪時(shí)間為54.5個(gè)月。腫瘤分化程度依照WHO分類標(biāo)準(zhǔn)；結(jié)直腸癌分期參照國際抗癌聯(lián)盟(International Union against Cancer,UICC)分期。腫瘤侵潤深度分期,T1：腫瘤侵及黏膜下層;T2：腫瘤侵及腸壁肌層;T3：腫瘤侵潤達(dá)漿膜或漿膜外;T4：腫瘤侵犯周圍臟器。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分期，N0：無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;N1：有1-3個(gè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，N2：有4個(gè)或以上淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

2.2免疫組化方法 將10％甲醛固定、石蠟包埋的腫瘤樣本切片，每個(gè)樣本各2張。白片先置于60 ℃烤箱，烤片過夜。石蠟切片脫蠟和梯度水化后，用PBS(pH7.4)沖洗3次，每次3 min。在檸檬酸抗原修復(fù)液中對(duì)抗原進(jìn)行修復(fù)，修復(fù)條件為微波修復(fù)CD133約10 min；高壓修復(fù)CD44約3 min。自然冷卻、PBS沖洗后每張切片滴加3％過氧化氫溶液50 μL，室溫下孵育10 min。PBS沖洗后每個(gè)樣本的2張切片分別滴加50 μL CD133Ⅰ抗(anti-CD133 rabbit polyclonal antibody,1∶200,ab19898; Abcam)及CD44Ⅰ抗(anti-CD44 rabbit monoclonal antibody,1∶100,ab51037; Abcam)，4 ℃過夜。PBS沖洗后每張切片滴加50 μLⅡ抗(即用型快捷免疫組化Maxvision試劑盒，KIT-5010,MAIXIN_Bio)，室溫下孵育10-15 min。PBS沖洗3次，每次3 min，除去PBS液，每張切片滴加100 μL新鮮配制的DAB液，顯色3-5 min后自來水沖洗，蘇木素復(fù)染8 s，再用自來水反復(fù)沖洗。切片經(jīng)過梯度乙醇脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封片，置顯微鏡下觀察。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

1CD133+CD44+細(xì)胞致裸鼠成瘤結(jié)果

SW480細(xì)胞系中CD133+CD44+、CD133+CD44-、CD133-CD44+及CD133-CD44-細(xì)胞亞群的比例分別為：0.82％、0.05％、96.79％和2.34％，見圖1。各瘤體行HE染色檢查均可見腫瘤細(xì)胞成團(tuán)排列，細(xì)胞異型性大，有病理性核分裂，并可見壞死，證實(shí)為結(jié)腸癌組織，見圖2、3。由表1可看出，103個(gè)CD133+CD44+細(xì)胞即可見腫瘤形成(1/4)，104個(gè)CD133+CD44+細(xì)胞的成瘤率為100％(8/8)；104個(gè)CD133+CD44-細(xì)胞的成瘤率為62.5％(5/8)；未分選細(xì)胞需105個(gè)以上才能成瘤；而105個(gè)CD133-CD44+及106個(gè)CD133-CD44-細(xì)胞均未成瘤。對(duì)各亞群細(xì)胞的成瘤能力進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，主要致瘤細(xì)胞為CD133+細(xì)胞，且CD133+CD44+細(xì)胞亞群的致瘤能力明顯強(qiáng)于其它各組細(xì)胞，自第4周始，體積差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)，見圖4。

Figure 1.CD133/CD44 subpopulations from SW480 cell line.

Figure 2.Transplanted tumor in nude mice.

Figure 3.HE staining of mouse xenograft(×100).

Figure 4.Tumorigenicity of five different cell subpopulations: unsorted cells(n=6),CD133+CD44+(n=8),CD133+CD44-(n=5),CD133-CD44+(n=8 ) and CD133-CD44-(n=8).*Plt;0.05,**Plt;0.01 vs unsorted cells CD133+CD44+ cells and CD133+CD44- cells.

表1 SW480細(xì)胞系中不同數(shù)量細(xì)胞亞群成瘤情況

2免疫組化結(jié)果

2.1臨床特點(diǎn) 入選患者的臨床病理資料見表2。其中男54例，女36例，年齡24-80歲，平均(61.8±13.5)歲。結(jié)腸癌51例，直腸癌39例；腫瘤lt;5 cm共30例，≥5 cm共60例。腫瘤浸潤深度T1、T2、T3、T4分別為12、 14、63、1例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分別為N0 61例、N1 17例、N2 12例；有肝轉(zhuǎn)移者4人。高、中、低分化者為30、31和29例；UICC分期為Ⅰ期19人、Ⅱ期40人、Ⅲ期27人及Ⅳ期4人。

2.2CD133、CD44的表達(dá)情況與臨床病理特征 顯微鏡下，可見CD133表達(dá)方式主要位于結(jié)直腸癌腺體靠管腔一側(cè)的細(xì)胞膜上，而在胞漿基本不表達(dá)，部分腺體管腔內(nèi)還可見脫落的CD133+細(xì)胞碎片，見圖5。將腫瘤組織中CD133+腺體數(shù)比例低于50％者定義為CD133低表達(dá)組；CD133+腺體比例大于50％為CD133高表達(dá)組[12]。據(jù)此，CD133低表達(dá)組共65例(72.2％)，高表達(dá)組25例(27.8％)。CD44只在細(xì)胞膜上表達(dá)，見圖6。將CD44+細(xì)胞數(shù)比例低于50％ 為CD44低表達(dá)組；CD44+細(xì)胞比例大于50％為CD44高表達(dá)組[15]，則CD44低表達(dá)組40例(44.4％)，高表達(dá)組為50例(55.6％)。經(jīng)2檢驗(yàn)，CD133和CD44均與患者性別、年齡、腫瘤位置、腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度及UICC分期無關(guān)。

表2 CD133、CD44的表達(dá)情況與結(jié)直腸癌患者臨床病理資料的關(guān)系

Figure 5.Expression of CD133 in colorectal cancer glands and normal colorectal glands.A: CD133 was located on the luminal surface of colorectal cancer glands and intraglandular fragments of CD133+ cells were observed.B: no CD133 expression had been found in normal colorectal glands.

Figure 6.Expression of CD44 in colorectal cancer glands and normal colorectal glands.A: CD44 was immunostained along the membrane.B: no CD44 expression had been found in normal colorectal glands and only CD44+ lymphoid tissues among the glands were observed.

2.3CD133、CD44的表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者術(shù)后5年生存率的關(guān)系 利用Kaplan-Meier生存分析法對(duì)CD133、CD44的表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者預(yù)后關(guān)系進(jìn)行比較。CD133低表達(dá)組5年生存率為83.8％，CD133高表達(dá)組5年生存率為45.2％，兩組有明顯差異(Plt;0.01)，見圖7A。 CD44低表達(dá)組5年生存率為75.6％，CD44高表達(dá)組5年生存率為70.1％，兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Pgt;0.05)，見圖7B。且經(jīng)單因素生存分析表明，影響患者術(shù)后總體生存率的因素有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移、分化程度、UICC分期及CD133，而性別、年齡、腫瘤位置、腫瘤大小、浸潤深度及CD44水平與總體生存率無關(guān)，見表3。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型提示，CD133、肝轉(zhuǎn)移、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的幾個(gè)重要因素(Plt;0.05)，見表3。CD133的相對(duì)危險(xiǎn)度(RR)為0.151(95％CI0.057-0.402)，Plt;0.01，說明CD133的表達(dá)與患者的預(yù)后為負(fù)相關(guān)，即CD133的表達(dá)水平越高，患者的預(yù)后越差。

在本研究中，90例結(jié)直腸癌患者中，CD133-low/CD44-low 29例，CD133-low/CD44-high 36例，CD133-high/CD44-low 11例，CD133-high/CD44-high 14例。這4組病人的5年生存率分別為78.3％、86.8％、68.2％和26.8％，其中CD133-high/CD44-high組5年生存率明顯差于其它3組(Plt;0.01)，見圖7C。

Figure 7.Analysis of CD133 and CD44 expression in colorectal cancer and patient survival.A: CD133-high group(n=25) showed worse survival than that in CD133-low group(n=65)by log-rank test (Plt;0.01).B: no correlation was found between patient survival and CD44 expression(Pgt;0.05.CD44-low: n=40,CD44-high: n=50).C: CD133-high/CD44-high expression group had the worst prognosis(Plt;0.01.CD133-low/CD44-low: n=29; CD133-low/CD44-high: n=36; CD133-high/CD44-low: n=11; CD133-high/CD44-high: n=14).

表3 90例結(jié)直腸癌患者總體生存率的Kaplan-Meier單因素及Cox多因素分析

討 論

腫瘤干細(xì)胞最早報(bào)道存在于急性粒細(xì)胞性白血病中，Bonnet等[2]成功地提取、純化了具有CD34+CD38-表型的AML細(xì)胞，這些細(xì)胞只占AML細(xì)胞總數(shù)的0.2％，卻能在NOD/SCID小鼠體內(nèi)成瘤；而占AML細(xì)胞大部分的CD34+CD38+細(xì)胞無法形成腫瘤。在實(shí)體腫瘤方面，有學(xué)者先后在乳腺癌及腦腫瘤中成功地分離出腫瘤干細(xì)胞[3，18,19]。

在結(jié)直腸癌腫瘤干細(xì)胞的研究方面，2007年O’Brien等[5]及Ricci-Vitiani等[6]首先報(bào)道了結(jié)直腸癌腫瘤起源細(xì)胞均存在于CD133+細(xì)胞群中。CD133+細(xì)胞群除了能在體外含有生長因子的無血清培養(yǎng)基中以未分化腫瘤細(xì)胞球的形式快速增長，還能在免疫缺陷小鼠體內(nèi)連續(xù)成瘤。據(jù)估計(jì)，在5.7×104個(gè)未分類腫瘤細(xì)胞中只有1個(gè)細(xì)胞具有致瘤性，而在262個(gè)CD133+細(xì)胞中就有1個(gè)致瘤性細(xì)胞，這幾乎富集了200倍；而占瘤體大部分的CD133-細(xì)胞卻無成瘤能力。然而有學(xué)者對(duì)此亦提出了異議。Shmelkov等[10]指出，CD133不一定局限表達(dá)于干細(xì)胞表面，在結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移瘤中CD133+及CD133-細(xì)胞均可致瘤。另有報(bào)道CD44亦可作為結(jié)直腸癌腫瘤干細(xì)胞的良好標(biāo)志物[7,8]；而且聯(lián)合CD133、CD44 2種標(biāo)志物能更好地分選、純化出結(jié)直腸癌的腫瘤干細(xì)胞[9]。本研究顯示在SW480細(xì)胞系中，CD133+細(xì)胞具備較強(qiáng)的成瘤能力，而占大部分比例的CD44+細(xì)胞無明顯致瘤性。

盡管結(jié)直腸癌腫瘤干細(xì)胞是腫瘤形成、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的決定因素，且對(duì)放化療治療均不敏感[20]，但其表面標(biāo)志物CD133、CD44的表達(dá)情況與其預(yù)后的關(guān)系目前尚無定論。研究發(fā)現(xiàn)，CD133抗原是影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的一個(gè)重要獨(dú)立因素，CD133高表達(dá)者其生存率明顯低于CD133低表達(dá)者[13,14]；然而，也有學(xué)者對(duì)此提出不同的觀點(diǎn)，認(rèn)為CD133的表達(dá)水平對(duì)患者的生存率并無影響[1,16]。另一方面，Horst等[15]及Choi等[17]認(rèn)為CD44與結(jié)直腸癌患者的預(yù)后無明顯相關(guān)性；更有意思的是，Lugli等[16]通過對(duì)1 261例結(jié)直腸癌患者研究發(fā)現(xiàn)，盡管不排除T分期、淋巴結(jié)分級(jí)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等因素的干擾，CD44低表達(dá)者的5年生存率為53.4％，而高表達(dá)者的5年生存率為59.3％，兩組生存率有明顯差異，這說明與CD133相反，CD44表達(dá)水平越低，預(yù)后越差。本文通過免疫組化的方法證實(shí)結(jié)直腸癌腫瘤細(xì)胞膜上的確有CD133和CD44的原位表達(dá)，而細(xì)胞漿內(nèi)基本無表達(dá)。研究結(jié)果表明CD133的表達(dá)水平與患者預(yù)后顯著相關(guān)(Plt;0.01)，高表達(dá)組5生存率(45.2％)明顯差于低表達(dá)組5年生存率(83.8％)；而CD44低表達(dá)組5年生存率為75.6％，CD44高表達(dá)組5年生存率為70.1％，兩組患者的預(yù)后無明顯相關(guān)性。CD133/CD44均高表達(dá)者5年生存率明顯差于其它3組患者(Plt;0.01)。

CD133、CD44的表達(dá)情況與結(jié)直腸癌患者預(yù)后的關(guān)系可能受樣本量的限制、免疫組化取材方式的不同(組織芯片或石蠟切片)、定義陽性標(biāo)本的標(biāo)準(zhǔn)不一等因素影響[16]。如Horst等[12,15]將腫瘤組織中CD133陽性腺體數(shù)大于50％定義為CD133高表達(dá)組，小于50％定義為CD133低表達(dá)組；而有學(xué)者將CD133+細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)10％以上定義為CD133+標(biāo)本[13,15]；更有學(xué)者將5％的CD133+細(xì)胞數(shù)作為界限[16]。上述定義標(biāo)準(zhǔn)的不同必然會(huì)帶來統(tǒng)計(jì)結(jié)果的差異。

關(guān)于CD133、CD44與結(jié)直腸癌患者臨床病理資料的關(guān)系特點(diǎn)目前亦尚未明確。有研究顯示，CD133的表達(dá)情況與腫瘤的分化程度呈負(fù)相關(guān)， CD133表達(dá)水平越高，分化程度越低[6,21]，這似乎也合理地解釋了為何CD133高水平表達(dá)者意味著預(yù)后不佳。而本文研究結(jié)果提示CD133、CD44與患者性別、年齡、腫瘤位置、腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度及UICC分期均無關(guān)。其中，CD133的表達(dá)水平與腫瘤的分化程度并無相關(guān)性，這與既往的文獻(xiàn)報(bào)道相符合[15]。

綜上所述，CD133可作為結(jié)直腸癌腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)志物，其表達(dá)水平越高，生存率越差；雖然CD44與結(jié)直腸癌患者預(yù)后無關(guān)，但聯(lián)合檢測(cè)CD133/CD44卻有助于更好地判斷患者的預(yù)后情況。

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CorrelationanalysisofCD133/CD44expressionincolorectalcancertissuesand5-yearsurvivalrateincolorectalcancerpatients

CHEN Shi-cai,SONG Xin-ming,CHEN Zhi-hui,LI Ming-zhe,HE Yu-long,ZHAN Wen-hua

(DepartmentofGastrointestinalandPancreaticSurgery,TheFirstAffiliatedHospital,SunYat-senUniversity,Guangzhou510080,China.E-mail:songxm888@163.com)

AIM: To compare the tumorigenicity of different CD133/CD44 subpopulations in colorectal cancer cell line and to evaluate relationship between the expression of CD133/CD44 in colorectal cancer tissues and the prognosis of colorectal cancer patients.METHODSThe cells of CD133/CD44 subpopulations from SW480 cell line were sorted by flow cytometry and vaccinated into nude mice.The expression of CD133 and CD44 in 90 colorectal cancer specimens from the patients with radical resection was analyzed by immunohistochemistry.The clinicopathological factors and survival rate of the selected patients were evaluated.RESULTSThe tumorigenicity of CD133+/CD44+cells was stronger than that of other cells.Both CD133 and CD44 were expressed on the cell membrane and CD133 was mainly located at the glandular luminal surface of colorectal cancer cells.No correlation were found between CD133/CD44 and the clinicopathological parameters including gender,age,tumor location,tumor size,T category,N category,liver metastasis,tumor grade and UICC stage (Pgt;0.05).However,the patients with CD133-high tumors were associated with a significantly worse 5-year survival rate than those with CD133-low tumors (45.2％vs83.8％,Plt;0.01) using Kaplan-Meier analysis.No difference was observed in survival rate when CD44 was taken into account (75.6％vs70.1％,Pgt;0.05).The CD133-high/CD44-high group had the worst 5-year survival rate than others (Plt;0.01).Multivariate Cox analysis demonstrated that CD133 as well as liver metastasis,tumor grade and lymph node metastasis was closely associated with the prognosis of the patients (Plt;0.05).CONCLUSIONCD133 can be considered as a robust marker for cancer stem cells in colorectal cancer.Rather than CD44,CD133 is strongly associated with a poorer prognosis in patients with colorectal cancer.Evaluation of CD133 combined with CD44 may help to judge the outcome of colorectal cancer.

CD133; CD44; Colorectal neoplasms; Prognosis

1000-4718(2011)05-0883-07

R735.3

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2011.05.010

2011-03-23

2011-05-03

廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.8151008901000207)

△通訊作者 Tel：020-87755766；E-mail：songxm888@163.com