李平 江幸福 孟令賀 程云霞 張蕾 翟保平

摘要 為探討?zhàn)はx被球孢白僵菌侵染后生長發(fā)育情況及其體內的免疫反應，設置孢子濃度為104、5×104、105、5×105、106個/mL及5×106個/mL的球孢白僵菌菌液注射黏蟲6齡初幼蟲，研究球孢白僵菌對黏蟲校正死亡率、羽化率、蛹重等生長發(fā)育指標的影響以及成瘤反應的濃度依賴效應。結果表明，6齡幼蟲的校正死亡率隨菌液濃度升高而逐漸增加。蛹重隨菌液濃度增加而下降，但僅在106、5×106個/mL濃度處理時蛹重顯著低于對照。同時，在孢子濃度為5×105、106、5×106個/mL時羽化率較對照顯著降低，雌雄成蟲壽命也顯著縮短，而6齡幼蟲至成蟲羽化的發(fā)育歷期在105、5×105、106、5×106個/mL濃度處理時較對照顯著延長。此外，白僵菌侵染誘發(fā)黏蟲免疫成瘤反應，并且具有明顯的時間和濃度效應。注射84 h內，黏蟲體內成瘤的數(shù)量隨注射時間延長而遞增，其后不再增加;同時，成瘤數(shù)量隨著菌液濃度升高而增加，至106個/mL濃度時不再顯著上升。該結果為揭示黏蟲抵抗真菌侵染的免疫防御機制以及所產(chǎn)生的免疫代價提供了科學依據(jù)。

關鍵詞 黏蟲; 白僵菌; 生長發(fā)育; 成瘤

中圖分類號： S 433.4

文獻標識碼： A

DOI： 10.16688/j.zwbh.2020560

Changes in the development and nodule formation of the 6th-instar

Mythimna separata larvae after infection by Beauveria bassiana

LI Ping1，2， JIANG Xingfu2， MENG Linghe2， CHENG Yunxia2， ZHANG Lei2*， ZHAI Baoping1*

（1. College of Plant Protection，Key Laboratory of Integrated Management of Crop Disease and Pests，Ministry of

Education，Nanjing Agricultural University，Nanjing 210095， China;? 2. State Key Laboratory for Biology of Plant

Disease and Insect Pests，Institute of Plant Protection，Chinese Academy of Agricultural Sciences， Beijing 100193，China）

Abstract

In order to explore the effects of Beauveria bassiana on the growth and development of Mythimna separata and its induction of immune response， the spore concentration was set to 104， 5×104， 105， 5×105， 106 and 5×106 spores/mL， respectively. The 6th-instar larvae of M.separata were injected with Beauveria bassiana spore suspensions to study the effects of B.bassiana on the growth and developmental indicators such as corrected mortality， emergence rate， pupa weight， and the injection concentration-dependent effect of nodule formation. The results showed that the corrected mortality of the 6th-instar larvae increased with increasing injection concentration. Pupa weight decreased with increasing injection concentration， but decreased significantly at the concentrations of 106 and 5×106 spores/mL. At the same time， the emergency rate decreased significantly with the increase of treatment concentration only under the concentration of 5×105， 106， 5×106 spores/mL. The life spans of male and female adults were also significantly shortened. The developmental duration from the 6th-instar larvae to emergency was significantly longer than that of the control at the concentration of 105 spores/mL and above. In addition， infection by B.bassiana induced immune responses of M.separata with significant time and concentration effects. Within 84 h after injection， the number of nodules increased with time， but did not increase significantly thereafter. In addition， the number of nodules increased with increasing fungal liquid concentration， but the number of nodules did not increase significantly when the concentration reached 106 spores/mL. The results provide a scientific basis for revealing the immune defense mechanism of M.separata against fungal infection and immune cost.

Key words

Mythimna separata; Beauveria bassiana; development; nodule formation

病原真菌進入昆蟲體內會受到寄主免疫系統(tǒng)的識別和抵抗[1-2]。昆蟲的免疫系統(tǒng)是一個完整地存在于開放血淋巴系統(tǒng)的防御體系，通常由血漿中抗菌肽、溶菌酶、酚氧化酶等活性因子參與的體液免疫系統(tǒng)以及多種功能的血細胞參與的細胞免疫系統(tǒng)組成[3-4]。其中昆蟲的細胞免疫主要依賴血細胞對外來抗原或異物的吞噬、集結和包囊作用，所以昆蟲體內血細胞的數(shù)量、微聚成瘤等反應可作為判斷昆蟲免疫力的主要指標[5-7]。細菌、病毒和真菌都可以有效誘導昆蟲免疫反應，而注射孢子或分生孢子是實驗室研究中真菌感染昆蟲的常用手段[8]，例如Shamakhi通過注射球孢白僵菌Beauveria bassiana證實了在不同溫度脅迫條件下二化螟Chilo suppressalis免疫系統(tǒng)的調節(jié)主要發(fā)生在短時間內[9];注射轉錄因子MaSom1缺失的蝗綠僵菌孢子后，蝗蟲的免疫反應顯著增強，體壁內側成瘤數(shù)增加[10];黑腹果蠅Drosophila melanogaster免疫的性別二態(tài)性并不完全表現(xiàn)在表皮防御方面，注射接種和表面噴霧接種球孢白僵菌時雄蟲的防御均強于雌蟲[11]。研究發(fā)現(xiàn)，寄生物可能對宿主的生活史進化、性選擇和種群動態(tài)產(chǎn)生影響，而昆蟲免疫系統(tǒng)的維持和免疫反應的完成需要消耗大量的能量，所以宿主往往會做出適應與權衡，利用繁殖的資源以防止寄生物的感染及其隨后的增殖[12]。在免疫系統(tǒng)上能量的投入會導致昆蟲在免疫脅迫下生存的整體健康狀況下降，體現(xiàn)為昆蟲生長發(fā)育受損、繁殖能力的下降、存活率降低、壽命縮短，甚至第二性征發(fā)育受到抑制[13-16]。

球孢白僵菌 Beauveria bassiana具有容易培養(yǎng)、致病力強、廣譜以及對溫血動物和植物無害的特點，是目前世界上研究和應用最多的蟲生真菌之一[17]?？杉纳?5個目149個科的700多種昆蟲及蜱螨類，是田間及野外最常見的致病真菌，同時被認為是防治蛾類的最佳選擇[18-19]。球孢白僵菌已經(jīng)廣泛運用于煙粉虱Bemisia tabaci、亞洲玉米螟Ostrinia furnacalis等農(nóng)林害蟲的防治[20-21]。研究病原真菌與害蟲的互作關系對昆蟲病原真菌的田間實際應用有重要意義。目前關于白僵菌誘導昆蟲細胞免疫的研究多是關于血淋巴中血細胞數(shù)量、類型變化及包囊作用，研究發(fā)現(xiàn)甜菜夜蛾Spodoptera exigua幼蟲、蔥蠅Delia antiqua成蟲、亞洲玉米螟幼蟲對球孢白僵菌孢子的侵入均產(chǎn)生強烈的細胞防御，血細胞能夠一定程度上抑制菌絲增殖[22-24]。

黏蟲Mythimna separata是一種典型的遠距離遷飛害蟲，可取食玉米、小麥、水稻等多種禾谷類糧食作物，還可為害棉花與蔬菜等經(jīng)濟作物，其飛行能力強、發(fā)生范圍廣、為害世代多，每年在我國南北地區(qū)有4～5次大范圍的往返遷飛為害，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成重大損失，除新疆外，其他地區(qū)均發(fā)現(xiàn)黏蟲為害[25-26]。近年來，隨著氣候變化以及種植結構的改變，黏蟲適應能力更強，在我國的發(fā)生為害呈現(xiàn)出新的特點[27]。目前有關白僵菌防治黏蟲的研究報道較少，防御機制的研究多針對黏蟲體內相關保護酶的變化，如黏蟲3齡幼蟲被球孢白僵菌Bb314侵染初期，可通過增強保護酶和解毒酶的活性來維持蟲體的正常生理功能[28]。關于白僵菌誘發(fā)的黏蟲體內細胞免疫反應以及侵染對黏蟲后續(xù)生長發(fā)育影響的相關研究鮮見報道。

本試驗以白僵菌這種田間主要生防菌作為免疫誘導物，用不同濃度的菌液注射黏蟲確保其受到不同強度的免疫刺激，探究對其后續(xù)生長發(fā)育和體內成瘤反應的影響，旨在更全面地了解真菌誘導的昆蟲免疫反應機制以及昆蟲免疫防御代價，為研制高效的真菌殺蟲劑、指導白僵菌的應用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試蟲源及菌株

試驗用黏蟲采自吉林省四平市公主嶺市田間，在實驗室內繁殖飼養(yǎng)多代。幼蟲用新鮮玉米苗飼養(yǎng)，培養(yǎng)箱溫度設置為（24±1）℃，相對濕度設置為70%左右，光周期L∥D=14 h∥10 h，密度設置為10頭/瓶（9 cm×13 cm）。

試驗所用球孢白僵菌GZGY-1-3由中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所蔬菜害蟲研究組提供。用SDA 培養(yǎng)基對菌株進行活化。在（25±2）℃下培養(yǎng)7～10 d后用0.05%吐溫-80無菌水沖洗平板獲取孢子，過濾離心再懸浮進行清洗，最終獲取新鮮孢子懸浮液。用血球計數(shù)法（25×16個方格）測定孢子濃度。最終配制成濃度為104、5×104、105、5×105、106、5×106、107個/mL及108個/mL的孢子懸浮液，用于注射接種。對照組注射含0.05% 吐溫-80的無菌水。

孢子懸浮液濃度=（80個方格內總孢子數(shù)/80）×4×106×懸浮液稀釋倍數(shù)。

1.2 試驗方法

1.2.1 注射法接種球孢白僵菌

選擇6齡蛻皮后24 h內的幼蟲進行注射。在注射之前，將幼蟲在冰上放置30 min麻醉，并使用70%乙醇對穿刺部位周圍的表皮進行消毒。使用5 μL的注射器（30號針頭）（Hamilton，瑞士）吸取1 μL新鮮配制的孢子懸浮液通過幼蟲第3腹足與腹部的連接處表皮注射入幼蟲體內，注射過程中要避免刺破中腸。選取出血量很少且生命體征明顯的幼蟲進行后續(xù)觀察。對照組注射1 μL含0.05%吐溫-80的無菌水。

1.2.2 不同濃度球孢白僵菌免疫誘導對黏蟲生長發(fā)育的影響

6齡幼蟲經(jīng)不同濃度球孢白僵菌注射處理后，繼續(xù)在10頭/瓶的密度條件下采用新鮮玉米苗飼喂，每30頭為一組，3個重復，每天觀察記錄幼蟲死亡日期。幼蟲老熟時，加入含水量10%左右的土壤供其化蛹，并記錄成蟲羽化日期及死亡日期，幼蟲化蛹3 d后用萬分之一天平（METTLER TOLEDO、美國）稱量蛹重。計算幼蟲死亡率、校正死亡率（成功化蛹前感染死亡數(shù)與6齡初處理數(shù)對比）、羽化率以及LC50。

校正死亡率=（處理死亡率-對照死亡率）/（1-對照死亡率）×100%;

羽化率=羽化數(shù)/成功化蛹數(shù)×100%。

1.2.3 成瘤的計數(shù)方法

首先將幼蟲放在冰面上30 min進行麻醉，然后用解剖剪將幼蟲腹部表皮從頭到尾剪開，使用昆蟲針展開固定在黑色蠟盤上，用PBS緩沖液輕輕洗滌內表面幾次，去除可能被誤認為結節(jié)的污染物。檢查消化道表面有無結節(jié)，之后取出丟棄。用體視鏡（Olympus，日本）觀察拍攝幼蟲內表面結瘤數(shù)。由于個體產(chǎn)生的結瘤大小存在明顯的差異，根據(jù)Zhang等[29]的解剖計數(shù)方法對瘤的大小進行測量時，每30 μm長作為一個單位IN（indexed nodule），不足30 μm記為一個IN。數(shù)據(jù)結果記錄為IN/頭。

1.2.4 成瘤反應的時間動態(tài)的測定

根據(jù)注射不同濃度球孢白僵菌后黏蟲的校正死亡率，選取106個/mL球孢白僵菌孢子懸浮液對幼蟲進行注射侵染，分別在注射后0、6、12、24、48、72、84、96 h時進行解剖觀察其成瘤反應。每組11頭幼蟲。

1.2.5 不同濃度球孢白僵菌免疫誘導下的成瘤反應

取1 μL不同濃度（104、5×104、105、5×105、106、5×106個/mL）孢子懸浮液注射幼蟲，幼蟲處理方法和注射方法同前。根據(jù)1.2.4時間動態(tài)試驗結果，選取成瘤不再增加的時間對處理過的幼蟲進行解剖拍照，計算成瘤數(shù)量。對照組注射相同體積的含0.05%吐溫-80的無菌水。每組10頭幼蟲。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗所得數(shù)據(jù)應用統(tǒng)計軟件SPSS 24.0進行方差分析。對于死亡率和羽化率等涉及百分率的數(shù)據(jù)先進行平方根反正弦轉換。采用單因素方差分析（ANOVA）和LSD檢驗比較不同濃度組別間的差異顯著性（P<0.05），所有數(shù)據(jù)采用平均值±標準誤（mean±SE）表示。

2 結果與分析

2.1 球孢白僵菌侵染對黏蟲生長發(fā)育的影響

根據(jù)預試驗結果，注射吐溫-80后黏蟲死亡率與不做任何處理的相比不存在顯著差異（|t|1，2=0500，P=0.667），故后續(xù)試驗不再設置空白對照，均以注射吐溫-80的處理作為對照組。由表1可以看出注射不同濃度球孢白僵菌孢子懸浮液對6齡黏蟲的死亡率及校正死亡率具有顯著影響（F8，18=477.983，P<0001;F7，16=111.125，P<0.001），表現(xiàn)為隨著注射濃度的增加，處理后黏蟲幼蟲死亡率與校正死亡率均隨之增加。但在104～105個/mL相對較低的濃度下，黏蟲幼蟲的校正死亡率沒有顯著差異（P>0.05），當孢子懸浮液濃度達到106個/mL時黏蟲幼蟲的校正死亡率相比低濃度處理顯著增加（P<0001）。107個/mL處理下校正死亡率達到7407%。最高濃度（108個/mL）下幼蟲全部死亡，根據(jù)校正死亡率得到毒力回歸方程y=-1.050+0876x （χ2=155.180，df=6，P<0.001），計算出LC50=8.03×106個/mL。由于107個/mL及108個/mL濃度下幼蟲死亡率過高，后續(xù)生長發(fā)育指標的測定不再設置此濃度。選擇104、5×104、105、5×105、106個/mL及5×106個/mL作為后續(xù)生長發(fā)育及成瘤反應試驗的濃度。

球孢白僵菌注射處理對黏蟲化蛹后的蛹重有顯著影響（F6，505=5.986，P<0.001，圖1）。但僅在高濃度，106個/mL及5×106個/mL下表現(xiàn)出顯著的抑制效應，蛹重減少至311.31 mg和300.63 mg，顯著低于注射吐溫-80的對照組32911 mg（P<005），但這兩個濃度之間不存在顯著差異（P>005）。而相對較低濃度的真菌侵染并不影響?zhàn)はx蛹的發(fā)育，體現(xiàn)在104～5×105個/mL濃度處理的黏蟲蛹重與對照以及各組之間均無顯著差異（P>0.05）。

球孢白僵菌侵染對黏蟲的羽化也具有顯著抑制作用（F6，14=23.406，P<0.001），隨著菌液濃度的升高黏蟲的羽化率表現(xiàn)出明顯下降的趨勢（圖2）。對照組以及104～105個/mL濃度處理之間均無顯著差異（P>0.05），而5×105～5×106個/mL處理黏蟲羽化率較對照組及其他低濃度處理顯著降低（P<0.05），其中最高濃度5×106個/mL處理的羽化率由對照組最高93.83%降至59.07%，降低了1/3左右。

不同濃度球孢白僵菌侵染后6齡幼蟲至成蟲羽化的發(fā)育歷期有顯著差異（F6，423=46.524，P<0001，圖3）。黏蟲6齡幼蟲至成蟲羽化的發(fā)育歷期隨濃度的升高而逐漸延長，105～5×106個/mL處理的發(fā)育歷期較對照組均顯著延長（P<0.05），其中5×106個/mL處理的歷期最長，達19.98 d，較對照組（18.07 d）延長近2 d。106個/mL與5×106個/mL兩個高濃度處理的歷期無顯著差異（P>005），但較低濃度處理均顯著延長（P<0.05）。

球孢白僵菌侵染對黏蟲雌、雄成蟲的壽命均有顯著影響（雌F6，124=6.253，P<0.001;雄F6，124=2862，P=0.012）（圖4）。孢子懸浮液濃度的提高顯著抑制了成蟲的正常發(fā)育，縮短了成蟲的

壽命。5×105～5×106個/mL濃度處理后雌、雄蟲的壽命均顯著低于對照組（P<0.05），其中最高濃

度（5×106個/mL）的處理組，雌蟲壽命8.09 d，較對照縮短近1/3;而雄蟲的壽命為11 d較對照組縮短近1/4。

2.2 成瘤反應的時間動態(tài)及形態(tài)變化

選取對黏蟲生長發(fā)育有顯著抑制作用但致死率不是太高的106個/mL孢子懸浮液注射黏蟲。

圖5為黏蟲體內結瘤形態(tài)隨時間推移發(fā)生的變化。注射后6 h黏蟲體內形成小黑點狀結瘤，數(shù)量少，多附著在葉狀脂肪體邊緣，邊界清晰（圖5a），且體積通常不超過2 IN。隨著時間延長，結瘤數(shù)量逐漸增多，且體積變大，多在2～3 IN，并且開始出現(xiàn)以團狀結瘤為中心，外圍褐色散點分布的較大的結瘤團（圖5b）。將結瘤團放大觀察，可以看到褐色的結瘤被白色透明狀的膠質層包裹，周圍散布的小型結瘤呈衛(wèi)星狀環(huán)繞（圖5c）。隨后出現(xiàn)凝聚成團的結瘤，但邊緣不規(guī)則且顏色較中間部分淺淡（圖5d）。72 h時在黏蟲氣孔附近出現(xiàn)大量散點狀結瘤團，且邊緣模糊顏色呈黃褐色，膠質團出現(xiàn)不規(guī)則的形狀且相互連接（圖5e）。84 h后小型的結瘤幾乎消失，而這些散點結瘤凝聚成大的團狀黑瘤散布在氣管周圍（圖5f），且形態(tài)不再變化，趨于穩(wěn)定。

圖6可看出，隨時間增加黏蟲體內成瘤數(shù)量隨之遞增。注射后即刻解剖（0 h）作為對照，結瘤數(shù)量僅有6.18 IN/頭，此時黏蟲體內還未發(fā)生強烈的細胞免疫，其免疫響應需要一定的時間，在注射6 h后黏蟲體內結瘤數(shù)量增加為32.64 IN/頭。在6～12 h時間段內黏蟲成瘤數(shù)量顯著提升（F7，80=151942，P<0.001），隨后放緩。在注射后24 h至84 h內的幾個時間節(jié)點，黏蟲體內的結瘤數(shù)量顯著增加。而在處理84 h后黏蟲體內的結瘤數(shù)量不再大幅增加，趨于平穩(wěn)，與96 h的數(shù)量無顯著差異（P>0.05）。

2.3 不同濃度球孢白僵菌侵染后黏蟲成瘤反應的變化

根據(jù)前面成瘤反應時間動態(tài)的結果，選擇在注射處理后84 h進行解剖，觀察測量不同濃度間黏蟲體內結瘤數(shù)量的差異。可以看出，隨著菌液濃度的升高，黏蟲體內結瘤數(shù)量隨之增加（F6，63=133988，P<0.001，圖7）。其中，注射濃度5×104～106個/mL時，結瘤數(shù)隨著注射濃度的增加而顯著上升，但至106個/mL濃度后不再顯著增長（P>0.05）。

3 討論

昆蟲在受到外界寄生物侵染時，會迅速產(chǎn)生免疫反應來做出響應，在昆蟲對真菌感染的免疫防御中，細胞免疫中的包囊作用和形成結瘤并黑化的過程常體現(xiàn)為昆蟲的免疫防御反應。昆蟲主要是通過在自身和寄生物之間形成物理屏障來限制入侵生物造成損害[30-32]。成瘤反應也被證實廣泛存在于昆蟲中，對昆蟲的生存具有重要的意義，同時常被用于昆蟲免疫能力的評估。在進行細胞免疫相關試驗時通常通過注射接種直接刺激血腔誘導成瘤反應，這樣可以在確保試蟲受到感染的同時對蟲體內的感染物定量[33-34]。為了便于解剖和觀察黏蟲受到真菌侵染后血腔內的細胞免疫現(xiàn)象，本試驗選取黏蟲6齡幼蟲作為試驗對象并以結瘤數(shù)量作為指標，試驗證明了球孢白僵菌侵染會誘導黏蟲體內的成瘤反應，且無論注射的孢子懸浮液濃度高還是低，黏蟲體內都會產(chǎn)生免疫反應來抵御外來病原物的侵染。昆蟲種類不同或同一物種內的血細胞數(shù)量不同，結瘤的數(shù)量上限也不同[35]，這種限制體現(xiàn)在結瘤反應的時間進程和注射真菌孢子數(shù)量對總結瘤數(shù)量的影響。黏蟲體內的結瘤數(shù)量在注射球孢白僵菌孢子后開始增加，到84 h時數(shù)量穩(wěn)定，不再增長，且在注射濃度達到106個/mL時黏蟲體內產(chǎn)生的結瘤數(shù)量也不再顯著增加。同時，在104～5×106個/mL濃度范圍內感染強度越大結瘤數(shù)量越多，幼蟲死亡率也越高，幸存?zhèn)€體的生長發(fā)育也受到影響。這說明成瘤反應所代表的黏蟲體內免疫反應是其生存必需的，并且這種免疫防御的維持需要生物成本，體現(xiàn)在對黏蟲的生長發(fā)育的抑制上。

研究表明，昆蟲的免疫防御在消耗自身能量的同時往往會造成進化過程中表現(xiàn)出生存適合度下降[36]。煙草天蛾Manduca sexta被寄生蜂寄生后或者注射滅活的細菌后血細胞的數(shù)量均會減少且取食行為受到顯著抑制[37]，東亞飛蝗 Locusta migratoria manilensis 受到侵染后，其取食量、蝻期近似消化率及食物轉化率也都出現(xiàn)顯著變化[38]，熊蜂Bombus terrestris在注入脂多糖（LPS）后其整個種群的存活率下降[39]。本試驗對黏蟲6齡幼蟲注射不同濃度的球孢白僵菌孢子懸浮液，來探究6齡黏蟲生長發(fā)育對注射真菌的濃度響應。結果表明，隨著免疫脅迫強度的增加，黏蟲的各項生長指標表現(xiàn)出明顯的抑制效應，包括死亡率的升高、羽化率的降低、蛹重的降低、發(fā)育歷期的延長，成蟲壽命的縮短。首先黏蟲幼蟲死亡率隨注射孢子的濃度升高而增加，但在105個/mL后才顯著增加，而各個濃度處理下黏蟲體內都發(fā)生成瘤反應，這是由于黏蟲在受到外界病原物入侵時其免疫防御系統(tǒng)有一定的抵抗力，大多數(shù)幼蟲可以從相對較弱的感染（104、5×104個/mL）中恢復，表現(xiàn)為死亡率較低、蛹重、發(fā)育歷期、羽化均不受影響。蛹期是昆蟲變態(tài)的重要時期，免疫反應的過度消耗可能使其無法正常完成這一轉化，表現(xiàn)在蛹重、羽化率及發(fā)育速度受到影響。注射白僵菌對黏蟲蛹重及發(fā)育歷期的抑制效應與草地貪夜蛾注射細菌后蛹重減少及發(fā)育速度降低的結果相一致[29]，但這種現(xiàn)象也僅在相對高濃度處理下出現(xiàn)。強的感染（106個/mL以及5×106個/mL）會導致各項生存指標受到抑制，107個/mL濃度處理后黏蟲死亡率達50%以上，108個/mL處理后全部死亡，由此推斷，雖然強烈的感染刺激下能夠誘導產(chǎn)生結瘤并激活其他免疫功能，但這些功能不足以克服和恢復昆蟲機體所受的損傷與能源消耗，這與野外受感染昆蟲免疫研究的結果一致[40]。

以結瘤反應為代表的細胞免疫證實了黏蟲對白僵菌侵染具有一定的免疫防御能力，但昆蟲的免疫防御機制十分復雜，僅以結瘤反應作為衡量標準可能不足以完全解釋昆蟲體內復雜的免疫活動，不少研究會配合體外暴露接種的方式來共同評估昆蟲的免疫能力[41-42]。考慮到田間實際應用中多在低齡幼蟲期通過噴施菌液來進行防治，本試驗采用注射方法避開了昆蟲的體壁防御，需進一步完善使其對田間的防治起到直接的指導作用。

綜上所述，球孢白僵菌可以有效誘導黏蟲體內免疫反應且病原物的侵染對于黏蟲的生長發(fā)育造成了一定的影響，但由于昆蟲免疫防御系統(tǒng)的運作與物質能源的分配，誘發(fā)這種生存水平上的抑制效應需要有足夠量的病原物的刺激。本文為研究黏蟲對真菌感染的免疫防御和免疫代價提供了科學依據(jù)。

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（責任編輯：楊明麗）