王 浩，張 霞，秦文濤

(山東省日照市藥品檢驗所，山東 日照 276826)

康膚霜具有抗菌消炎、抗寄生蟲的作用，用于治療皮膚炎癥、痤瘡及毛囊蟲、螨蟲引起的皮膚感染，是本地區(qū)醫(yī)院常用的一種外用復(fù)方制劑。為控制制劑質(zhì)量，確保臨床療效，筆者建立了高效液相色譜法測定康膚霜中甲硝唑與氯霉素的含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

LC－20AT島津高效液相色譜儀，SPD－20A紫外檢測器，SIL－20自動進(jìn)樣器?？的w霜(日照市皮膚病防治所自制，批號為080503，080502);甲硝唑?qū)φ掌?批號為100191－200305)、氯霉素對照品(批號為130555－200501，含量為99.5%)購自中國藥品生物制品檢定所;乙腈(色譜純)，水為重蒸餾水，其他化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[1]與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:VP －ODS C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:0.1%庚烷磺酸鈉溶液(取0.1%庚烷磺酸鈉溶液500 mL與二甲基甲酰胺 5 mL、冰醋酸 0.5 mL，混勻)－乙腈(75∶25);流速為1.0 mL/min;檢測波長:272 nm;柱溫:室溫;進(jìn)樣量:20 μL。在此條件下，甲硝唑峰、氯霉素峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于2.0，理論板數(shù)按氯霉素峰計大于3 000。色譜圖見圖1及圖2。

圖1 甲硝唑與氯霉素二醇物、氯霉素的分離度高效液相色譜圖

圖2 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

稱取氯霉素與甲硝唑?qū)φ掌犯骷s50 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加甲醇5 mL溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL含甲硝唑與氯霉素各50 μg的對照品溶液。稱取本品約5 g(約相當(dāng)于甲硝唑與氯霉素各100 mg)，精密稱定，加甲醇10 mL使溶解，定量轉(zhuǎn)移至200 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得供試品的貯備液;精密量取續(xù)濾液5 mL置50 mL量瓶中，加流動相至刻度，即得每1 mL含甲硝唑與氯霉素各50 μg的供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密量取對照品貯備液 0.25，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50 mL，分別置 10 mL 量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程甲硝唑 A=7 249.06+7 833.55C，r=0.999 8(n=6);氯霉素 A=11 423.85+17 853.84C，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，甲硝唑與氯霉素進(jìn)樣量分別在50～500 μg和25～250 μg范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗:精密量取對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果峰面積的 RSD=0.2%(n=5)，表明方法精密度好。

穩(wěn)定性試驗:精密量取同一供試品(批號為080503)溶液，分別于配制 0，2，4，6，8，12，24 h 時進(jìn)樣。結(jié)果甲硝唑與氯霉素峰面積的RSD分別為0.8%和0.5%(n=7)，表明供試品溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:取同一批號的樣品(批號為080503)6份，依法測定。結(jié)果甲硝唑與氯霉素的平均含量分別為99.58%和98.76%，RSD分別為0.7%和0.5%(n=6)，表明方法的重復(fù)性好。

加樣回收試驗:稱取甲硝唑?qū)φ掌?2.26 mg與氯霉素對照品25.18 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，加入甲醇5 mL溶解，加流動相至刻度，制成每1 mL含甲硝唑2 mg和氯霉素1 mg的貯備液;另精密量取已知含量的供試品溶液5 mL，置50 mL量瓶中，分別加入甲硝唑與氯霉素對照品混合的貯備液2.0，3.0，4.0 mL，用流動相分別稀釋至刻度，制備溶液并測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 甲硝唑與氯霉素加樣回收試驗結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測定

取樣品，依法制備供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積分別計算甲硝唑與氯霉素的含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

康膚霜以甲硝唑(20 mg/g)、氯霉素(20 mg/g)、硝酸咪康唑為主藥。在擬訂的色譜條件下，能使制劑中甲硝唑與氯霉素得到很好的分離，且峰形對稱。方法學(xué)考察結(jié)果表明，該方法可用于康膚霜的質(zhì)量控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:776－778.