李海燕，康 建

(1.河南省食品藥品檢驗(yàn)所，河南 鄭州 450003; 2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450052)

冠心生脈口服液被收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)(第十冊(cè))》，具有益氣生津、活血通脈的功效，用于治療心氣不足、心陰虛引起的心悸氣短、胸悶作痛、自汗乏力、脈微結(jié)代。全方由人參、麥冬、五味子(醋炙)、丹參、赤芍、郁金、三七等藥材組成。原標(biāo)準(zhǔn)中的質(zhì)量控制方法較簡(jiǎn)單且操作煩瑣，不能有效控制藥品質(zhì)量。筆者根據(jù)處方所含藥味的化學(xué)成分及劑型特點(diǎn)，研究制訂了赤芍、麥冬、人參及三七、五味子的薄層色譜鑒別及赤芍中芍藥苷的含量測(cè)定[1]方法。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2690型高效液相色譜儀;Waters 996型二極管陣列檢測(cè)器;硅膠G預(yù)制薄層板(青島海洋化工廠(chǎng)，批號(hào)為030507);超聲波清洗機(jī)(功率250 W，頻率40 kHz)。麥冬、人參、三七對(duì)照藥材(批號(hào)分別為 121013－200607，120917－200609，120941－200506)及芍藥苷對(duì)照品(批號(hào)為 110736－200731，供含量測(cè)定用，以97.9%計(jì)算)、五味子醇甲對(duì)照品(批號(hào)110857－200608)均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;冠心生脈口服液(批號(hào)分別為081001，081002，081003，河南省宛西制藥股份有限公司);甲醇、乙腈為色譜純，水為樂(lè)百氏純凈水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

赤芍:取本品10 mL，置分液漏斗中，用正丁醇10 mL振搖提取，將正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液;按冠心生脈口服液制備工藝制備不含赤芍的陰性對(duì)照品溶液;另取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸(40 ∶5 ∶10 ∶0.2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以 5% 香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液無(wú)干擾(圖 1 A)。

麥冬:取本品10 mL，加鹽酸溶液(18→100)1 mL，置水浴上濃縮至約5 mL，用三氯甲烷10 mL振搖提取，將三氯甲烷液濃縮至2 mL，作為供試品溶液;按冠心生脈口服液制備工藝制備不含麥冬的陰性對(duì)照品溶液;另取麥冬對(duì)照藥材1 g，加水30 mL，加熱回流30 min，濾過(guò)，濾液濃縮至10 mL，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－丙酮(4∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液無(wú)干擾(圖1 B)。

人參及三七:取本品30 mL，用乙酸乙酯30 mL振搖提取，水液用水飽和的正丁醇提取振搖2次，每次30 mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次30 mL，正丁醇液用正丁醇飽和的水30 mL洗滌，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液;按冠心生脈口服液制備工藝制備不含人參和三七的陰性對(duì)照品溶液;另取人參、三七對(duì)照藥材各1 g，分別加甲醇25 mL，加熱回流1 h，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，分別同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5 μL、人參對(duì)照藥材溶液及三七對(duì)照藥材溶液各1 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以10℃下放置的三氯甲烷－甲醇－水(13∶7∶2)的下層溶液為展開(kāi)劑，在2～10℃展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上分別顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液無(wú)干擾(圖1 C)。

五味子:取本品50 mL，用三氯甲烷振搖提取2次，每次30 mL，將三氯甲烷液蒸干，殘?jiān)尤燃淄? mL使溶解，作為供試品溶液;按冠心生脈口服液制備工藝制備不含五味子的陰性對(duì)照品溶液;另取五味子醇甲對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液10 μL，對(duì)照品溶液1 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(10∶5∶1)的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液無(wú)干擾(圖1 D)。

圖1 薄層色譜圖

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Agilent Eclipse XDBC18柱 (250 mm ×4.6 mm，5 μm);柱溫:35℃;檢測(cè)波長(zhǎng):230 nm;流動(dòng)相:乙腈－水(14∶86)[2];流速:1 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。在此色譜條件下的色譜圖見(jiàn)圖2。

圖2 高效液相色譜圖

2.2.2 溶液制備

精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的對(duì)照品溶液;精密量取本品 10 mL，置 100 mL量瓶中，加30%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液;按冠心生脈口服液制備工藝和供試品溶液制備方法制備不含赤芍的陰性對(duì)照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

線(xiàn)性關(guān)系考察:精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液(406.5 μg/mL)1，3，5，7，10，13 μL，按上述色譜條件測(cè)定。以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)、峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程 Y=1 445 284X－47 609，r=0.999 3(n=6)。結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量在 0.406 5 ～5.284 5 μg范圍內(nèi)與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一供試品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD為0.09%(n=6)。

重復(fù)性試驗(yàn):對(duì)同一批(批號(hào)為081001)樣品5份進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果的 RSD為0.33%(n=5)，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，按上述色譜條件分別于0，2，4，6，8，10 h時(shí)測(cè)定芍藥苷峰峰面積積分值。結(jié)果的 RSD為0.34%(n=6)，表明供試品溶液在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的同一批(批號(hào)為081001)樣品6份各5 mL，每份加對(duì)照品貯備液適量，按供試品溶液制備方法制備加樣供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 芍藥苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.2.4 樣品含量測(cè)定

分別取批號(hào)為 081001，081002，081003的 3批樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果 3 批樣品中芍藥苷含量分別為 1.126，1.135，1.126 g/L。

3 討論

本品既含人參又含三七，用普通硅膠G薄層板無(wú)法對(duì)二者進(jìn)行鑒別。筆者曾嘗試鑒別三七，以三七皂苷R1和三七對(duì)照藥材為對(duì)照，使用高效硅膠G薄層板(青島海洋化工廠(chǎng))，用10℃以下放置的三氯甲烷－甲醇－水(13∶7∶2)的下層溶液為展開(kāi)劑，在2～10℃展開(kāi)，還做了二次展開(kāi)試驗(yàn)，但分離效果和重現(xiàn)性不佳。因此，以人參、三七對(duì)照藥材同時(shí)作為對(duì)照，用普通硅膠G薄層板做鑒別試驗(yàn);試驗(yàn)中曾以五味子對(duì)照藥材為對(duì)照，結(jié)果供試品溶液色譜中在與缺五味子的陰性對(duì)照的相應(yīng)位置上有相同顏色的主斑點(diǎn)出現(xiàn)，陰性對(duì)照有干擾。

含量測(cè)定選用溶液直接稀釋的方法，操作簡(jiǎn)易。比較了30%甲醇溶液、50%甲醇溶液、70%甲醇溶液及甲醇的提取效果。用甲醇作溶劑時(shí)，樣品液渾濁，用30%甲醇溶液、50%甲醇溶液及70%甲醇溶液提取時(shí)，樣品液澄清，因此選用30%甲醇溶液為提取溶劑。

[1]王亞林.HPLC測(cè)定宮炎康顆粒中芍藥苷的含量[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，29(4):41.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:405.