趙 平 張永平 趙 美 (內(nèi)蒙古自治區(qū)醫(yī)院心血管內(nèi)科，內(nèi)蒙古 呼和浩特 0007)

原發(fā)性高血壓(EH)是由遺傳和環(huán)境因素共同作用而引起的多基因病，流行病學(xué)調(diào)查和家系研究表明大約30%～40%的高血壓的危險(xiǎn)因素是遺傳性的〔1〕。在我國(guó)高血壓普遍存在著患病率高、死亡率高、殘疾率高的“三高”和知曉率低、治療率低、控制率低的“三低”特點(diǎn)，我國(guó)已經(jīng)成為世界上高血壓危害最嚴(yán)重的國(guó)家之一。目前，高血壓遺傳學(xué)研究的一個(gè)主要任務(wù)就是闡明血壓升高的遺傳機(jī)制，也就是尋找高血壓致病相關(guān)基因。蒙古族是我國(guó)高血壓患病率較高的民族之一，識(shí)別蒙古族EH的易感基因?qū)τ谄涓哐獕旱姆乐尉哂兄匾囊饬x。在眾多的高血壓相關(guān)基因中，其病理生理作用是不同的。其中人類心房利鈉肽(hANP)通過(guò)影響腎臟鈉水代謝，進(jìn)而影響血壓的調(diào)節(jié)，hANP被認(rèn)為是EH重要的候選基因。在本研究中我們將研究hANP與蒙古族EH的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 采用病例-對(duì)照研究。所有對(duì)象均為來(lái)自內(nèi)蒙古自治區(qū)杭錦后旗的蒙古族，在本地生活3代以上，無(wú)血緣關(guān)系，無(wú)異族通婚史，年齡20～70歲。調(diào)查650人，均經(jīng)知情同意。其中EH患者350例，高血壓的診斷標(biāo)準(zhǔn)按照1999年WHO/ISH標(biāo)準(zhǔn):收縮壓≥140 mmHg和(或)舒張壓≥90 mmHg，進(jìn)行高血壓藥物治療的患者也被列入高血壓組。常規(guī)檢查排除繼發(fā)性高血壓，排除過(guò)量飲酒，排除服用避孕藥史，無(wú)糖尿病及肝腎疾病史。對(duì)照組300例，入選標(biāo)準(zhǔn):查體健康者，3次測(cè)量血壓，收縮壓＜140 mmHg和/或舒張壓＜90 mmHg，無(wú)服用降壓藥史，無(wú)高血壓家族史及其他器質(zhì)性心臟病史。兩組性別、年齡匹配，無(wú)血緣關(guān)系。所有研究對(duì)象均記錄病史并且進(jìn)行常規(guī)檢查，包括測(cè)量血壓、身高、體重、血脂。

1.2 方法

1.2.1 血壓測(cè)量 采用國(guó)際通用方法，血壓測(cè)量?jī)x采用臺(tái)式毫米汞柱血壓儀。測(cè)壓前15 min不吸煙，不飲酒，不飲茶或者咖啡，避免勞累、緊張和興奮，背靠靜坐5 min。裸露右側(cè)上臂置于和心臟同一水平線位置。每次重復(fù)測(cè)血壓3次，間隔2 min，取平均值。血壓測(cè)量在標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下進(jìn)行，即每天同時(shí)間、同側(cè)臂、同血壓計(jì)，專人測(cè)量。

1.2.2 基因組DNA的提取 用2%EDTA抗凝真空管采清晨空腹外周靜脈血3 ml，置－20℃冰箱中儲(chǔ)存，應(yīng)用低滲溶血-鹽析法提取所有入選受試者的全血DNA，DNA純度達(dá)到 A260∶A280≥1.8。

1.2.3 基因多態(tài)性分析 采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)和瓊脂糖凝膠電泳方法鑒定hANP基因C2664G基因型，其引物由上海生工生物工程服務(wù)有限公司合成:上游序列5'-AACAGCAACGGAAGAAATGA-3，下游序列5'-ATCCAACCCCCAAATAGAAGTA-3'(由上海生工生物技術(shù)服務(wù)有限公司合成)。TaqMan(DNA聚合酶)5 U/μl為寶生物工程(大連)有限公司產(chǎn)品。PCR產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，紫外燈下觀察結(jié)果。CC型:僅有157 bp的帶型;GG型:有134 bp和23 bp兩種帶型;CG型具有157 bp、134 bp和23 bp三種帶型。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件分析。所得出的基因型及等位基因的頻率檢測(cè)是否符合 H-W平衡定律，計(jì)量資料用±s表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，兩個(gè)計(jì)量資料之間有無(wú)相關(guān)采用相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 臨床資料比較 蒙古族EH組與正常對(duì)照組一般臨床資料比較見表1，EH組收縮壓、舒張壓均高于正常對(duì)照組(P＜0.01)。兩組年齡、體重指數(shù)(BMI)、膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)及低密度脂蛋白(LDL-C)比較，有顯著差異(P＜0.01)。

2.2 基因型頻率和等位基因頻率的比較 hANP基因C2664G基因型頻率和等位基因的頻率符合H-W平衡定律。EH組和正常血壓組間hANP基因C2664G基因型頻率和等位基因頻率分布比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 EH組與對(duì)照組臨床資料比較(±s)

表1 EH組與對(duì)照組臨床資料比較(±s)

與對(duì)照組比較:1)P＜0.01;HDL-C:高密度脂蛋白膽固醇

組別 n 年齡(歲)男/女(n) BMI SBP(mmHg)DBP(mmHg)TG(mmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)TC(mmol/L)EH組 350 51.0±18.0 166/184 24.9±4.41)160.3±281)104.5±161)1.86±1.411)1.52±0.94 3.65±1.061)5.48±2.321)對(duì)照組 300 42.0±16.0 130/170 22.5±5.5 109.±12 71.4±9.0 1.23±1.00 1.54±0.66 2.45±1.02 3.34±1.47

表2 EH組和對(duì)照組hANP基因C2664G基因型頻率和等位基因頻率比較

3 討論

EH的病因和發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，目前認(rèn)為與遺傳易感基因和多種環(huán)境因素相互作用有關(guān)。已經(jīng)證實(shí)多種基因的多態(tài)性與EH相關(guān)。流行病學(xué)調(diào)查表明，蒙古族是原發(fā)性高血壓高發(fā)民族之一〔2〕。目前已有研究報(bào)道，EH與鹽敏感性相關(guān)基因的變異有關(guān)〔3〕;但是 hANP基因多態(tài)性是否參與了蒙古族EH的發(fā)病機(jī)制尚未見報(bào)道。本研究選擇內(nèi)蒙古自治區(qū)杭錦后旗，寒冷氣候，遠(yuǎn)離工業(yè)發(fā)達(dá)地區(qū)，交通不便，很少與外界通婚，人口流動(dòng)性小，遺傳背景單一;在飲食上蒙古族居民肉類、食鹽攝入均相對(duì)較高，蔬菜攝入量較低;當(dāng)?shù)氐尼t(yī)療衛(wèi)生水平及人們?nèi)罕姷男l(wèi)生知識(shí)水平相對(duì)較低，對(duì)高血壓的知曉率及治療率低，特別適于進(jìn)行EH的遺傳流行病學(xué)和分子流行病學(xué)研究，是一個(gè)較為理想的人群。

心房利鈉肽又稱心鈉素，具有強(qiáng)大的利鈉利尿、擴(kuò)張血管的作用。當(dāng)機(jī)體血容量增加或血壓升高時(shí)，ANP可直接或間接地通過(guò)改變腎臟血流動(dòng)力學(xué)及中樞與外周神經(jīng)體液因子使腎臟的排鈉作用發(fā)生改變，從而維持水鹽平衡，降低血壓。

ANP基因位于染色體1P36.21，由3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子組成。已有多項(xiàng)研究顯示ANP基因與鹽敏感性高血壓相關(guān)，但來(lái)自不同地區(qū)、不同人群的研究結(jié)果并不一致，在阿拉伯人群的研究中〔4〕顯示ANP第2個(gè)內(nèi)含子的基因變異不是阿拉比人群高血壓的關(guān)鍵因素。在日本人群的研究中〔5〕揭示5'非翻譯區(qū)的C2664G與高血壓有顯著性相關(guān)(P＜0.05)，在該人群中C等位基因者患高血壓的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)率高于G等位基因者。

在本研究中，我們隨機(jī)選擇了650例內(nèi)蒙古自治區(qū)杭錦后旗的牧民為研究對(duì)象。基因型頻率和等位基因頻率在EH組和正常對(duì)照組之間差異無(wú)顯著性。本研究結(jié)果未發(fā)現(xiàn)hANP C2664G多態(tài)性和蒙古族EH明顯相關(guān)。hANP和EH的相關(guān)性需要在更多人群中進(jìn)行驗(yàn)證。

1 Longini IM，Higgins MW，Hinton PC，et al.Environmental and genetic sources of familial aggregation of blood pressure in Tecumseh，Michigan〔J〕.Am J Epidemiol，1984;120(1):131-44.

2 全國(guó)血壓抽樣調(diào)查協(xié)作組.中國(guó)各民族高血壓患病情況調(diào)查〔J〕.高血壓雜志，1995;3(增刊):24-30.

3 Li T，Liang H，Lu J，et al.Transplantation of atrial natriuretic peptide-expressing fibroblasts reduces blood pressure and increases urine volume in spontaneously hypertensive rats〔J〕.Sheng Wu Gong Cheng Xue Bao，2010;26(5):643-8.

4 Frossard PM，Obineche EN，Lestringant GG，et al.Association study be-tween the ANF gene and hypertension in a Gulf Arab population〔J〕.Am J Hypertens，1997;10(11):1308-10.

5 Kato N，Sugiyama T，Morita H，et al.Genetic analysis of the atrial natriuretic peptide gene in essential hypertension〔J〕.Clin Sci(Lond)，2000;98(3):251-8.