鐘厚強，余紅亞，丁茂杰

電化學發(fā)光是化學發(fā)光免疫分析中的新一代標記免疫技術(shù)，基本原理與化學發(fā)光相同，與普通化學發(fā)光技術(shù)的不同在于采用特殊的標記物:聯(lián)吡啶釕〔Ru(bpy)〕2+。在三丙胺陽離子的催化及脈沖電壓的激發(fā)下，此標記物可產(chǎn)生高效，穩(wěn)定的連續(xù)發(fā)光。同時，由于〔Ru(bpy)〕2+在反應(yīng)中可循環(huán)利用，使發(fā)光得以增強和穩(wěn)定。這種方法的主要優(yōu)點是標記物分子肖且穩(wěn)定性較好，發(fā)光強度高，發(fā)光時間長［1］。

根據(jù)美國臨床實驗室改進法案 (CLIA 88)對臨床實驗室質(zhì)量管理和實驗室認可的要求，每個實驗室必須對檢測系統(tǒng)進行性能評價，方可將檢測系統(tǒng)用于臨床分析，其中包括分析測量范圍 (analytic measurement range，AMR)和臨床可報告范圍 (climcal report range，CRR)盡管各大試劑廠家提供了相應(yīng)的參數(shù)，但此類參數(shù)在不同條件的實驗室是否適用仍需要驗證。因此，我們以β-HCG為例按照美國臨床實驗室標準化委員會 (NCCLS)EP6-A文件要求對本實驗室COBA E601電化學發(fā)光檢測系統(tǒng)檢測β-HCG進行AMR和CRR的驗證實驗［2］。

1 材料

改用血清來自常規(guī)臨床送檢血清標本，分別測定4次，取其均值為測定值，改用試劑為Roche公司提供的β-HCG試劑盒，分析儀器為Roche公司COBAS E601電化學免疫分析系統(tǒng)，按照操作說明書認真操作。

2 實驗與結(jié)果

2.1 功能及靈敏度驗證 用配套稀釋液將濃度為1.17MIU/ml的β-HCG標準品1∶10稀釋，檢測1次/d，連續(xù)檢測20次，由此得 =0.138MIU/ml，S=0.021MIU/ml，CV=15.2%，其CV=15.2%＜20%，故本實驗室檢測系統(tǒng)檢測β-HCG的功能及靈敏度可確認為0.117MIU/ml。

2.2 分析測量范圍驗證 取高值和低值混合血清各1份，分別胺4∶0，3∶1，2∶2，1∶3，0∶4的體積比例混合，獲得5 份不同濃度的混合血清，其理論濃度分別為 8763.0、6322.3、3881.6、1241.2、0.14MIU/ml均值分別為 8763.0、6311.2、3660.4、1340.5、0.14MIU/ml，對理論均值間的直線回歸方程為Y=0.885X-17.605，R=0.988。以B=1.00±0.03，R=0.975為判定標準，表明本實驗室Roche公司COBASE601檢測系統(tǒng)檢測β-HCG的臨床水平，此范圍也可作為β-HCG的臨床分析測量范圍。

3 動態(tài)監(jiān)測血β-HCG水平在先兆流產(chǎn)中有重要臨床意義

因β-HCG在不同孕期周間存在較大程度的差異，臨床一般主張連續(xù)測定兩次或兩次以上的值，以動態(tài)觀察其濃度上升幅度，如若β-HCG值上升緩慢，增幅小，高峰維持時間短，下降快，則胚胎發(fā)育異常，先兆流產(chǎn)難免發(fā)生，而如經(jīng)保胎治療后β-HCG值持續(xù)下降或常居低值，則流產(chǎn)不可避免?？梢娏鳟a(chǎn)與β-HCG的含量密切相關(guān)［3］，因此β-HCG可作為孕早期判斷胎兒胎盤功能的重要指標，其值及動態(tài)監(jiān)測對先兆流產(chǎn)患者的診斷以及療效觀察和預(yù)后估計都有重要價值。

4 臨床可報告范圍

取1份濃度為8763MIU/ML的混合血清按1∶10、1∶20、1∶50、1∶100、1∶200、1∶400 稀釋，理論值分別為 876.3、438.2、175.3、87.63、43.82、21.91MIU/ml，同時分別測量4 次， 其 均 值 為:872.1、382.3、106.2、98.6、46.2、25.9MIU/ml，以 (測定值/理論值) ×100%的方式計算稀釋回收率。結(jié)果相應(yīng)稀釋回收率分別為99%、87.2%、60.5%、112.2%、105.2%、118.1%。以其在 (100.0±20.0)%范圍內(nèi)為判定標準。可確定β-HCG最大稀釋度為1∶200，結(jié)合分析靈敏度為0.177MIU/ml，確認該檢測系統(tǒng)檢測β-HCG的可報告范圍，結(jié)合β-HCG的臨床水平，此范圍亦可作為β-HCG的CRR。

5 小結(jié)

目前，各實驗室均采用室內(nèi)質(zhì)控，室間質(zhì)評對儀器的精密度及準確度進行評估，很易忽視AMR及CRR的評價和驗證，而對于很多超出線性范圍的檢測值，實驗室可通過驗證項目的最大稀釋度結(jié)合功能靈敏度和AMR上限來計算該項目的臨床可報告范圍，但在確定臨床可報告范圍時，一定要結(jié)合實際臨床可能出現(xiàn)的濃度，以避免出差錯。同時建議實驗室在編寫SOP時，規(guī)范標本稀釋程序，確保檢測結(jié)果的可靠性，更好地為臨床服務(wù)。

1 王庸晉.現(xiàn)代臨床檢驗學［M］.北京:人民軍醫(yī)出版社，2007:608.

2 畢波，呂元.定量檢測系統(tǒng)的方法學性能驗證實驗結(jié)果的評價［J］.中華檢驗醫(yī)學雜志，2007，30(12):1332-1335.

3 吳國振，鐘園園，吳花葵.507例先兆流產(chǎn)β-HCG RIA檢測結(jié)果分析［J］.現(xiàn)代診斷與治療，1995，6(4):213-214.