黃 偉,張文婷,趙維良
1.浙江中醫(yī)藥大學(xué),浙江杭州 310053;2.浙江省食品藥品檢驗(yàn)所,浙江杭州 310004
顛茄片是傳統(tǒng)抗膽堿制劑,主要含天仙子胺(hyoscyamine)、東莨菪堿(scopolamine)等莨菪類(lèi)生物堿成分,可用于平滑肌痙攣引起的疼痛、胃潰瘍等病癥[1]。天仙子胺又稱(chēng)莨菪堿,左旋,其散瞳作用比d-天仙子胺大100倍[2],且顛茄片藥效為其中多種莨菪烷類(lèi)生物堿協(xié)同作用的結(jié)果?!吨袊?guó)藥典》2010年版顛茄片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中TLC鑒別的指標(biāo)成分為阿托品(atropine)。雖然阿托品與天仙子胺在TLC中的比移值與在HPLC中的保留時(shí)間均相同,但阿托品為天仙子胺的外消旋體,一般為化學(xué)合成品,或是在富含莨菪堿植物中提取、消旋所得,因此顛茄片以阿托品作為T(mén)LC鑒別的指標(biāo)成分不甚合理。目前國(guó)內(nèi)對(duì)顛茄片的最新研究報(bào)道僅限于用RP-HPLC對(duì)硫酸阿托品等成分進(jìn)行定量測(cè)定[3-5],未曾報(bào)道顛茄片中非法添加阿托品的檢查方法,國(guó)外文獻(xiàn)有報(bào)道稱(chēng),可用以手性為基礎(chǔ)的高效液相色譜法[6]、核磁共振等[7]加以鑒別,但檢測(cè)成本高,再加上阿托品成本低廉,使得在顛茄片中非法添加阿托品的現(xiàn)象較為嚴(yán)重。因此,建立能快速區(qū)分阿托品與天仙子胺的經(jīng)濟(jì)的分析方法就顯得十分重要?;诖耍疚慕⒘颂禺愋缘陌⑼衅放c天仙子胺的鑒別方法,從而為評(píng)價(jià)顛茄片質(zhì)量控制提供技術(shù)依據(jù)。
硅膠G薄層板(青島海洋化工廠生產(chǎn)),雙槽展開(kāi)缸,薄層色譜儀(瑞士卡瑪公司ATS4型全自動(dòng)點(diǎn)樣儀),水為重蒸水,其他試劑均為分析純。
對(duì)照品硫酸阿托品(批號(hào):100040-200510)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所,硫酸天仙子胺(USP對(duì)照品,批號(hào):1335009),顛茄片為煙臺(tái)魯銀藥業(yè)有限公司、西安利君制藥有限公司、天津力生制藥股份有限公司等十家企業(yè)提供的20余批樣品。
取顛茄片20片,研細(xì),加濃氨試液1 ml和乙醚30 ml,超聲處理30 min,濾過(guò),濾液揮干,殘?jiān)蛹状?.5 ml使之溶解,作為供試品溶液。
取硫酸天仙子胺對(duì)照品、硫酸阿托品對(duì)照品,分別加甲醇制成每1 ml各含3 mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。
硅膠 G 薄層板;展開(kāi)劑:濃氨溶液-水-丙酮(3∶7∶90);顯色劑:稀碘化鉍鉀試液;亞硝酸鈉試液。
吸取上述兩種溶液各20 μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以濃氨溶液-水-丙酮(3∶7∶90)為展開(kāi)劑展開(kāi),展距 8 cm,取出,晾干,置100~105℃干燥5 min,放冷。第1次顯色:噴以稀碘化鉍鉀試液至斑點(diǎn)清晰;第2次顯色:在薄層板上噴以亞硝酸鈉試液,放置15 min顯色。
采用上述薄層檢查方法,以硫酸阿托品為陽(yáng)性對(duì)照,第一次顯色后,供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn),見(jiàn)圖1。第2次顯色后,供試品色譜中,在與天仙子胺對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上斑點(diǎn)顏色由橙色或棕色變?yōu)榧t棕色,不得出現(xiàn)灰藍(lán)色。如出現(xiàn)灰藍(lán)色,提示該樣品可能添加了阿托品,見(jiàn)圖2。結(jié)果在對(duì)10家企業(yè)28批顛茄片的檢查中,共出現(xiàn)11份陽(yáng)性樣品,判定其為非法添加阿托品。
圖1 稀碘化鉍鉀顯色(第一次顯色)
圖2 顛茄片的薄層色譜圖
分別考察了不同的展開(kāi)系統(tǒng):乙酸乙酯-甲醇-濃氨、濃氨溶液-水-丙酮、乙酸乙酯-氯仿-甲醇-氨水,并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了優(yōu)化,結(jié)果表明以濃氨溶液-水-丙酮(3∶7∶90)作為展開(kāi)劑得到的色譜分離度及斑點(diǎn)相對(duì)位置重現(xiàn)性好。
比較了國(guó)產(chǎn)普通硅膠G板(青島海洋化工廠)、國(guó)產(chǎn)高效硅膠G板(煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所)、進(jìn)口普通硅膠G板、進(jìn)口高效硅膠G板(德國(guó)默克公司),結(jié)果均可以對(duì)顛茄流浸膏中非法添加阿托品進(jìn)行定性鑒別。在保證重復(fù)性的前提下,以選擇價(jià)格易于接受為原則,推薦使用國(guó)產(chǎn)普通硅膠G板。
取一批按上述方法試驗(yàn)后呈陰性反應(yīng)的顛茄片,加入阿托品對(duì)照品,再按上述實(shí)驗(yàn)方案,結(jié)果斑點(diǎn)的位置和顏色與阿托品對(duì)照品所顯斑點(diǎn)一致。
取上述阿托品和天仙子胺對(duì)照品溶液,分別混合制備成含阿托品10%、20%、30%……90%、100%的溶液,照上述方法取20 μl點(diǎn)于硅膠G薄層板上,展開(kāi)后,按上述條件顯色。結(jié)果顯示含10%阿托品溶液可觀察到灰藍(lán)色。說(shuō)明在顛茄片生產(chǎn)過(guò)程中添加10%阿托品即可被檢出。
本文研究?jī)?nèi)容為2010年版《中國(guó)藥典》顛茄系列標(biāo)準(zhǔn)提高課題,是國(guó)內(nèi)首次運(yùn)用薄層色譜法鑒別添加阿托品的顛茄片,結(jié)果顯示28批樣品中11批樣品添加阿托品。對(duì)薄層色譜結(jié)果,采用指紋圖譜法進(jìn)一步作了驗(yàn)證,檢測(cè)結(jié)果完全吻合,檢出符合率100%,未出現(xiàn)誤判情況??梢?jiàn)本方法解決了此前難以快速檢查顛茄片中非法添加阿托品的實(shí)際問(wèn)題,且操作簡(jiǎn)便,對(duì)于顛茄片的質(zhì)量控制,具有很高的實(shí)用價(jià)值。
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