潘海敏，方慧華，嚴士海

(江蘇省中醫(yī)院1.藥劑科;2.科技處，南京 210029)

鬼針草藥材為菊科管狀花亞科鬼針屬植物的干燥全草，其藥用歷史悠久，始載于唐·陳藏器《本草拾遺》［1］。鬼針草有清熱解毒、散瘀消腫之功效，目前國內報道鬼針草具有抗菌、抗?jié)?、抗肝癌、降脂及降壓作用?-3］。文獻［4］報道，鬼針草中黃酮類化合物含有金絲桃苷、奧卡寧、海生菊苷等，是鬼針草中的主要有效成分。為揭示其心血管藥理效應，筆者在本實驗采用比濁法，以二磷酸腺苷(adenosine diphosphate，ADP)及凝血酶(thrombase，Thr)作誘導劑，考察鬼針草總黃酮對ADP及Thr誘導的兔血小板聚集的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 血小板聚集及血凝測定儀(北京世帝科學儀器公司)，二磷酸腺苷(ADP，Sigma公司)，凝血酶(Thr，Sigma公司)，枸櫞酸鈉(BDH公司)。鬼針草總黃酮(南京中醫(yī)藥大學提供，批號:20090604)，丹參注射液(正大青春寶藥業(yè)有限公司，批號:0907082)。

1.2 實驗動物 日本大耳白家兔，體質量1.8～2.2 kg，由南京青龍山實驗動物繁殖廠提供，動物許可證號SCXK(蘇)2007-2008。

1.3 實驗方法

1.3.1 血漿樣品的制備 取日本大耳白家兔6只，頸總動脈放血，3.8%枸櫞酸鈉抗凝全血，600 r·min-1離心10 min，吸取上層富血小板血漿(PRP)。再將所剩血液3 500 r·min-1，10 min離心，吸取上清液為貧血小板血漿(PPP)。

1.3.2 動物分組及血小板聚集率測定 用PPP調零，以PRP為血小板供體，實驗分為6組，分別為空白對照組，溶媒對照組(給予二甲亞砜溶液)，低、中、高劑量藥物組(給予25，50，100 mg·mL-1鬼針草總黃酮溶液)，丹參注射液組，每組6個平行樣。分別取PRP250 μL，與不同濃度的藥物溶液10 μL 混合，空白對照組給予0.9%氯化鈉溶液。37℃溫育3 min后，分別加入 20 μmol·L-1的 ADP 20 μL、15 U·mL-1的Thr 20 μL，按文獻［1］方法，用血小板聚集及血凝測定儀測定血小板聚集率，并計算抑制率。抑制率(%)=(溶媒對照組最大聚集率－給藥組最大聚集率)/溶媒對照組最大聚集率×100%［5-6］。

2 結果

2.1 對ADP誘導的血小板聚集最大聚集率的影響結果見表1。鬼針草總黃酮對ADP誘導的血小板聚集具有較好的抑制作用。

表1 6組ADP誘導的血小板聚集最大聚集率的檢測值Tab.1 The detection values of the maximum platelet agglutination induced by ADP in six groups %，±s

表1 6組ADP誘導的血小板聚集最大聚集率的檢測值Tab.1 The detection values of the maximum platelet agglutination induced by ADP in six groups %，±s

與溶媒對照組比較，*1P＜0.01Compared with vehicle control group，*1P＜0.01

組別 樣本/份濃度/(mg·mL-1)最大聚集率 抑制率鬼針草總黃酮提取物高劑量藥物組 6 100 26.40±4.27*1 45.82中劑量藥物組 6 50 34.77±4.56*1 28.65低劑量藥物組 6 25 45.88±4.43 5.85丹參注射液組 6 10 μL 37.05±6.24*1 23.97空白對照組 6 51.67±6.06 …溶媒對照組 6 48.73±4.02…

2.2 對Thr誘導的血小板聚集最大聚集率的影響結果見表2。鬼針草總黃酮對Thr誘導的血小板聚集具有較好的抑制作用。

表2 6組Thr誘導的血小板聚集最大聚集率的檢測值Tab.2 The detection values of the maximum platelet agglutination induced by Thr in six groups %，±s

表2 6組Thr誘導的血小板聚集最大聚集率的檢測值Tab.2 The detection values of the maximum platelet agglutination induced by Thr in six groups %，±s

與溶媒對照組比較，*1P＜0.01;與空白對照組比較，*2P＜0.05Compared with vehicle control group，*1P＜0.01;Compared with blank control group，*2P＜0.05

組別 樣本/份濃度/(mg·mL-1)最大聚集率 抑制率鬼針草總黃酮提取物高劑量藥物組 6 100 29.73±4.74*1 48.36中劑量藥物組 6 50 38.10±5.84*1 33.82低劑量藥物組 6 25 47.55±5.36 17.40丹參注射液組 6 10 μL 38.72±5.64*1 32.74空白對照組 6 63.33±3.94 …溶媒對照組 6 57.57±3.36*2…

3 討論

血小板聚集指血小板被活化后互相之間黏附并形成聚集物的現象，是形成血栓的重要原因。ADP和Thr等誘導劑均能誘導血小板的活化，但其誘導強度和機制不同。ADP屬于中等強度血小板聚集誘導劑，主要通過作用于血小板膜使有限的顆粒內容物釋放，經G蛋白連接受體，促進細胞外鈣內流而達到促進血小板聚集的作用。而Thr則是一種強誘導劑，可引起不依賴于血小板顆粒分泌的聚集反應，通過凝血酶-血小板膜蛋白糖相互作用誘導聚集反應。

鬼針草是我國常用的中藥，具有較大的開發(fā)和應用前景。目前，對鬼針草藥材及其提取物已經有較多的研究，其化學成分也不斷得到闡明。鬼針草總黃酮是保肝作用與降低血壓的有效成分［7-9］，鬼針草提取物還具有對抗脂質過氧化反應與降低血脂的作用［10］。本研究結果提示，鬼針草總黃酮具有較好的抗血栓作用，能夠抑制ADP和凝血酶所誘導的血小板聚集，劑量效應明顯。

［1］宋立人，洪恂，丁緒亮，等.現代中藥學大詞典(下冊)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2005:1564－1565.

［2］陳曉虎，唐蜀華，李燕，等.鬼針草顆粒劑治療高血壓、高胰島素血癥的臨床研究［J］.南京中醫(yī)藥大學學報，1998，14(1):19－20.

［3］錢岳晟，張偉，周懷發(fā)，等.鬼針草對血壓影響的臨床研究［J］.浙江中醫(yī)學院學報，2003，27(1):23－25.

［4］李帥，匡海學，岡田嘉仁，等.鬼針草有效成分的研究Ⅱ［J］.中草藥，2004，35(9):972－975.

［5］張曉林，張相年，楊安平.阿藿烯對兔血小板聚集抑制作用［J］.中國公共衛(wèi)生，2010，26(7):872－873.

［6］夏泉，董婷霞，詹華強.莪術二酮對ADP誘導的兔血小板聚集的抑制作用［J］.中國藥理學通報，2006，22(9):1151－1152.

［7］陳飛虎，袁麗萍，鐘明媚，等.鬼針草總黃酮抗大鼠肝纖維化的實驗研究［J］.中國臨床藥理學與治療學，2006，11(12):1369－1374.

［8］ZHONG M M，CHEN F H，YUAN L P，et al.Protective effect of total flavonoids from Bidens bipinnata L.against carbon tetrachloride-induced liver injury in mice［J］.J Pharm Pharmacol，2007，59(7):1017－1025.

［9］李儀奎.中藥藥理研究方法學［M］.2版.上海:上?？茖W技術出版社，2006.

［10］黃川鋒，馬瑜紅，周新，等.鬼針草提取物對實驗性高脂血癥大鼠血脂和NO及NOS的影響［J］.中國現代藥物應用，2009，29(17):14－16.