黃山，江春艷，龍飛

(1.青島科技大學(xué)化工學(xué)院藥學(xué)系，青島 266042;2.西藏天知藥業(yè)有限責(zé)任公司，日喀則 857000;3.成都中醫(yī)藥大學(xué)生藥學(xué)教研室，611137)

藏荊芥(藏藥名薩都那保)為唇形科植物藏荊芥Nepeta angustifolia C.Y.Wu的全草，味苦，性涼，開竅醒神，主治神昏驚厥、卒中、癲、出血性腦梗死、創(chuàng)傷及疼痛等癥［1］。藏荊芥與荊芥為同科同屬的植物，但是為西藏獨有的藥材，主要產(chǎn)于西藏拉薩、江孜等地。作為藏醫(yī)常用藥之一，藏荊芥在臨床上有著良好的療效。但是，目前對該藥的研究仍較少，這也妨礙對該藥的進(jìn)一步開發(fā)，限制了其應(yīng)用。筆者以藏荊芥揮發(fā)油為研究對象，對其抗炎、鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行實驗研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試藥 藏荊芥(Nepeta angustifolia C.Y.Wu)，西藏日喀則地區(qū)天知藥業(yè)有限責(zé)任公司提供，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)生藥學(xué)教研室龍飛博士鑒定符合藥用。藏荊芥揮發(fā)油按《中華人民共和國藥典》2010年版一部甲法提取，得淡黃色、透明油狀液體，無水硫酸鈉充分脫水后，密閉貯存于棕色瓶中，4℃ 保存?zhèn)溆?。實驗時用0.5%聚山梨酯80溶液配制使用。二甲苯、冰醋酸均為市售化學(xué)純試劑。潑尼松(天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司，批號:080825)、阿司匹林(山東新華制藥股份有限公司，批號:20090610)。角叉菜膠(Sigma公司，批號:122K1444)。

1.1.2 動物 昆明種小鼠(清潔級)，體質(zhì)量18～22 g，雌雄兼用，隨機(jī)分組，每組10只，動物合格證號:醫(yī)動字第0214-07號。SD大鼠(清潔級)，雄性，體質(zhì)量150～170 g，隨機(jī)分組，每組10只，動物合格證:醫(yī)動字第0158-07號。以上實驗動物均由成都中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，在自由攝食、飲水環(huán)境中適應(yīng)1～2 d后，用于實驗。

1.1.3 儀器 JA1203型電子天平(上海天平儀器廠)，YLS-6A型智能熱板儀(山東醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站)，YLS-7A型足跖容積測量儀(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站)。

1.2 方法

1.2.1 對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 小鼠50只，隨機(jī)分為5組，即空白對照組(給予純化水)、潑尼松組(給予潑尼松溶液5 mg)，藏荊芥低、中、高劑量組(給予藏荊芥揮發(fā)油0.125，0.250，0.500mL·kg-1)，分別灌胃給藥，連續(xù)5 d，第5天給藥1 h后，將二甲苯涂于小鼠右耳前后兩面，每鼠0.1mL，左耳作對照。1 h后處死動物，用直徑8mm打孔器分別在兩耳同一部位打下圓耳片，用電子天平稱定質(zhì)量。計算耳廓腫脹率和腫脹抑制率。腫脹率(%)=(右耳質(zhì)量－左耳質(zhì)量)/左耳質(zhì)量×100%［2］;腫脹抑制率(%)=(對照組耳腫脹率－給藥組耳腫脹率)/對照組耳腫脹率×100%［2-3］。

1.2.2 對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響 大鼠50只，分組及給藥同“1.2.1”項。分別灌胃給藥連續(xù)5 d，第5天給藥1 h后，將1%的角叉菜膠0.1mL注入大鼠右后足跖皮下，然后用足跖容積測量儀分別測量致炎前、致炎后1，2，3，4，6 h大鼠足跖至踝關(guān)節(jié)部的容積，計算足跖腫脹率和腫脹抑制率。腫脹率(%)=(致炎后足跖容積－致炎前足跖容積)/致炎后足跖容積×100%［4-5］。

1.2.3 對小鼠棉球肉芽腫的影響 小鼠50只，分組及給藥同“1.2.1”項。乙醚麻醉后，在每只小鼠左側(cè)腹股溝處埋入高壓滅菌棉球3 mg，手術(shù)過程嚴(yán)格無菌操作，并在局部注入16萬U·mL-1青霉素0.1mL。術(shù)后灌胃給藥，連續(xù)7 d。第8天處死小鼠，取出棉球，剔除脂肪組織，稱定質(zhì)量，60℃烘干24 h，稱定質(zhì)量，并計算抑制率。抑制率(%)=(對照組肉芽腫干質(zhì)量－給藥組肉芽腫干質(zhì)量)/對照組肉芽腫干質(zhì)量×100%［6］。

1.2.4 小鼠醋酸扭體法鎮(zhèn)痛實驗 小鼠50只，隨機(jī)分為5組，即空白對照組(給予純化水)、阿司匹林組(給予阿司匹林8 mg)，藏荊芥低、中、高劑量組(給予藏荊芥揮發(fā)油溶液 0.125，0.250，0.500mL·kg-1)。各組均灌胃給藥1 h后腹腔注射0.7%的醋酸溶液，每只0.2mL，記錄10 min內(nèi)各組小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)［7］。

1.2.5 小鼠熱板法鎮(zhèn)痛實驗 將篩選合格的雌性小鼠50只隨機(jī)分為5組，分組及給藥同“1.2.4”項，分別測定給藥前痛閾值。各組分別于灌胃給藥后30，60，90，120 min測定痛閾值。若小鼠超過60 s仍無反應(yīng)，按 60 s計算［8］。

2 結(jié)果

2.1 藏荊芥揮發(fā)油對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

結(jié)果見表1。藏荊芥揮發(fā)油對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有明顯的抑制作用。

2.2 藏荊芥揮發(fā)油對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響 結(jié)果見表2。藏荊芥揮發(fā)油能抑制角叉菜膠致大鼠足跖腫脹，減輕腫脹程度，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義;而且，隨著致炎時間的延長，空白對照組足跖腫脹程度不斷顯著增加，而藏荊芥揮發(fā)油各劑量組足跖腫脹程度均未明顯增加。

2.3 藏荊芥揮發(fā)油對小鼠棉球肉芽腫的影響 結(jié)果見表3。給藥組均具有抑制小鼠肉芽腫生長的作用，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。

2.4 小鼠醋酸扭體法鎮(zhèn)痛實驗 結(jié)果見表4。藏荊芥低、中、高劑量組醋酸所致小鼠扭體次數(shù)均明顯減少，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。

2.5 小鼠熱板法鎮(zhèn)痛實驗 結(jié)果見表5。藏荊芥高、中、低劑量組均能在給藥后30，60，90，120 min延長小鼠的痛閾值，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。

3 討論

藏荊芥揮發(fā)油高、中、低劑量對二甲苯致小鼠耳廓腫脹及角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的炎癥反應(yīng)均有明顯的抑制作用，對小鼠棉球肉芽腫慢性炎癥模型也有明顯的抑制作用。說明藏荊芥揮發(fā)油對炎癥早期毛細(xì)血管通透性增加、炎癥物質(zhì)滲出、組織水腫，以及炎癥后期肉芽組織增生均有較強(qiáng)的拮抗作用，提示該藥對炎癥有較強(qiáng)的防治作用。

表1 5組小鼠二甲苯致耳廓腫脹情況Tab.1 Results of xylene－induced ear edema in 5 groups of mice ±s

表1 5組小鼠二甲苯致耳廓腫脹情況Tab.1 Results of xylene－induced ear edema in 5 groups of mice ±s

與空白對照組比較，*1P＜0.01Compared with blank control group，*1P＜0.01

組別 劑量/(mL·kg－1)小鼠/只左耳質(zhì)量 右耳質(zhì)量 差值mg腫脹率 抑制率%藏荊芥揮發(fā)油低劑量組 0.125 10 16.05±1.72 31.80±2.12 15.75±1.85 99.54±17.93 15.83中劑量組 0.250 10 16.13±1.41 30.98±3.14 14.85±2.95 92.89±21.08*1 21.45高劑量組 0.500 10 16.04±1.22 30.23±2.53 14.19±2.32*1 89.02±16.07*1 24.73潑尼松組 5 mg 10 15.81±1.50 29.15±4.29 13.34±4.21*1 85.59±31.62*1 27.63空白對照組 … 10 15.47±1.21 33.65±3.24 18.18±3.02 118.26±22.18…

表2 5組大鼠角叉菜膠致足跖腫脹率測定結(jié)果Tab.2 Results of carrageena-induced paw edema in 5 groups of rats %，±s

表2 5組大鼠角叉菜膠致足跖腫脹率測定結(jié)果Tab.2 Results of carrageena-induced paw edema in 5 groups of rats %，±s

與空白對照組比較，*1P＜0.01Compared with blank control group，*1P＜0.01

組別 劑量/(mL·kg－1)大鼠/只1 h 2 h 3 h 4 h 6 h藏荊芥揮發(fā)油低劑量組 0.125 10 32.10±11.10 40.08±12.36 51.64±13.86 62.32±13.62*1 67.49±12.95*1中劑量組 0.250 10 27.75±6.35 39.24±9.92 48.82±9.95*1 57.27±14.49*1 63.46±17.40*1高劑量組 0.500 10 22.70±6.35*1 34.06±19.14*1 43.01±13.15*152.97±17.95*1 58.27±12.57*1潑尼松組 5.00 mg 10 19.76±6.39*1 30.26±6.95*1 41.21±7.84*1 51.89±8.49*1 58.72±9.57*1空白對照組 … 10 35.45±10.94 53.91±18.76 65.63±17.56 80.72±14.96 92.78±15.32

表3 5組小鼠棉球肉芽腫測定值Tab.3 Results of tampon－induced granuloma in 5 groups of mice ±s

表3 5組小鼠棉球肉芽腫測定值Tab.3 Results of tampon－induced granuloma in 5 groups of mice ±s

與空白對照組比較，*1P＜0.01Compared with blank control group，*1P＜0.01

組別 劑量/(mL·kg－1)小鼠/只肉芽腫濕重 肉芽腫干重mg抑制率/%藏荊芥揮發(fā)油低劑量組 0.125 10 76.87±9.53*118.80±3.66*125.37中劑量組 0.250 10 62.15±14.66*116.45±2.86*134.70高劑量組 0.500 10 52.73±12.70*114.43±2.80*142.72潑尼松組 5.00 mg 10 40.35±7.91*111.10±3.26*155.93空白對照組 … 10 97.57±18.98 25.19±3.63…

表4 5組小鼠醋酸所致扭體次數(shù)測定值Tab.4 Results of writhing times of mouse induced by acetic acid in 5 groups of mice ±s

表4 5組小鼠醋酸所致扭體次數(shù)測定值Tab.4 Results of writhing times of mouse induced by acetic acid in 5 groups of mice ±s

與空白對照組比較，*1P＜0.01Compared with blank control group，*1P＜0.01

組別 劑量/(mL·kg－1)小鼠/只扭體次數(shù)/次藏荊芥揮發(fā)油低劑量組 0.125 10 17.75±4.35中劑量組 0.250 10 14.83±6.03*1高劑量組 0.500 10 13.08±4.64*1阿司匹林組 8.00 mg 10 5.17±2.52*1空白對照組 …10 21.92±4.14

表5 5組小鼠對熱板所致疼痛潛伏期的測定值Tab.5 Results of the pain latency of mouse induced by hot plate in 5 groups of mice ±s

表5 5組小鼠對熱板所致疼痛潛伏期的測定值Tab.5 Results of the pain latency of mouse induced by hot plate in 5 groups of mice ±s

與空白對照組比較，*1P＜0.01Compared with blank control group，*1P＜0.01

組別 劑量/(mL·kg－1)小鼠/只 給藥前 給藥后30 min 60 min 90 min 120 min藏荊芥低劑量組 0.125 10 15.26±3.83 17.57±2.92 17.82±2.73 22.12±2.82*1 26.10±3.62*1中劑量組 0.250 10 15.31±2.66 18.56±2.94 22.83±3.86*1 25.75±5.35*1 28.91±4.04*1高劑量組 0.500 10 15.27±3.18 21.17±2.78*1 25.27±3.51*1 28.53±2.74*1 30.77±8.94*1阿司匹林組 8 mg 10 15.30±4.30 18.06±2.73 23.19±3.35*1 28.41±5.49*1 34.78±5.32*1空白對照組 … 10 15.14±3.03 15.25±3.33 15.09±2.36 15.86±3.49 15.56±3.33

藏荊芥揮發(fā)油對小鼠醋酸扭體反應(yīng)有明顯的抑制作用，并能明顯延長熱刺激小鼠痛閾值。說明藏荊芥揮發(fā)油對化學(xué)和物理刺激引起的疼痛均有良好的鎮(zhèn)痛效果，可緩解臨床炎癥反應(yīng)引起的疼痛。

上述實驗結(jié)果表明，藏荊芥揮發(fā)油有良好的抗炎鎮(zhèn)痛作用，為其臨床應(yīng)用提供了藥效學(xué)基礎(chǔ)，而藏荊芥的其他藥理作用也有待于進(jìn)一步研究。

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