金 峰 喬 寵 尚 濤 (中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院婦產科,沈陽 110004)

妊娠免疫耐受是正常妊娠時母體形成的一種特殊類型的外周免疫耐受,保護作為半同種移植物的胎兒不被母體免疫系統(tǒng)排斥而成功妊娠,這有賴于免疫活性細胞的分化及功能調整。趨化因子(Chemokine,CK)及其受體不但直接參與了淋巴細胞的增殖和活化,還促進母胎界面T淋巴細胞及NK細胞的游走和活化,可影響一系列的細胞活動,包括粘附、血管生成和擴散[1]。因此CK受體與配體結合后,不僅可趨化各種白細胞游走至局部發(fā)揮免疫作用,也可參與滋養(yǎng)細胞的浸潤及分化,影響胎盤的形成和發(fā)育,而滋養(yǎng)細胞侵潤等功能障礙則可導致相關病理妊娠的發(fā)生[2]。本研究采用免疫組化及RTPCR方法檢測正常足月妊娠婦女及子癇前期患者胎盤組織中趨化因子CXCL16,CXCR6,CCL2,CCR2的表達,旨在探討其在子癇前期發(fā)病中的作用。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選擇2008年1月～2009年2月在中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院產科收治并行剖宮產的子癇前期患者共55例(其中輕度20例,重度35例),孕35～38周,平均年齡(28±3)歲,診斷及分類標準參照文獻[3]。正常晚期妊娠組:選擇同期在我科行擇期剖宮產的正常晚期妊娠孕婦共40例為對照,孕38～40周,平均年齡(27±5)歲,本次妊娠經過正常,胎兒發(fā)育正常,無任何并發(fā)癥和合并癥,既往無不良妊娠史,無原發(fā)高血壓、糖尿病、慢性腎炎等病史。

1.2 研究方法 全部標本均在手術時采集,胎盤娩出后即刻取母面中間帶胎盤組織約2 cm×2 cm×2 cm,在生理鹽水中漂洗干凈后,置于10%中性甲醛溶液中固定8～24小時,低溫石蠟包埋,制成蠟塊,置-20攝氏度冰箱干燥保存,待切片及免疫組化染色。

1.3 檢測方法 免疫組織化學分析和染色均按照購得的ABC免疫組化試劑盒說明書操作,按規(guī)定步驟進行免疫組化染色,山羊抗人CCR2多克隆抗體,小鼠抗人CCL2單克隆抗體,小鼠抗人CXCR6單抗,山羊抗人CXCL16多抗購自北京金橋生物技術有限公司。結果判定:光鏡下觀察細胞質中有棕黃色著色為陽性染色,采用Biosen圖像分析系統(tǒng)對各組切片進行分析,用陽性反應平均灰度值(總灰度/掃面面積)代表組織中表達水平。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SSPS13.0行t檢驗,單因素方差分析。檢驗水準 α=0.05。

2 結果

2.1 三組胎盤組織中CXCL16、CXCR6、CCL2、CCR2 的免疫組化檢測結果 三組孕婦年齡、孕產次等一般資料比較無顯著性差異。三組孕婦胎盤組織中合體滋養(yǎng)細胞及細胞滋養(yǎng)細胞的胞質內均見CXCL16、CXCR6、CCL2、CCR2陽性染色,其平均灰度值比較見表1。

2.2 重度子癇前期組CXCL16、CXCR6的平均灰度值顯著低于正常晚期妊娠組(P＜0.05),子癇前期輕度組CXCL16、CXCR6雖低于正常晚期妊娠組,但

表1 各組孕婦胎盤組織表達 CXCL16、CXCR6、CCL2、CCR2的平均灰度值Tab.1 Expression of CXCL16,CXCR6,CCL2 and CCR2 in placenta in each group

3 討論

子癇前期病理研究顯示:子癇前期胎盤存在生理性血管重鑄障礙、絨毛面積減少、密度低等改變,其中生理性血管重鑄障礙被稱為子癇前期的特征性病理改變。胎盤灌注不足導致胎盤缺血和代謝障礙,引起胎盤源性毒性因子的產生,并進而造成血管內皮損傷、血管活性物質平衡失調[4]。生理性血管重鑄依靠于滋養(yǎng)細胞的增殖、分化、融合及侵蝕能力,且需要局部微環(huán)境的精密調節(jié),而子癇前期滋養(yǎng)細胞的功能顯著下降,因此滋養(yǎng)細胞的功能障礙是其發(fā)病的主要原因。近年來,免疫活性細胞對滋養(yǎng)細胞的調控日益受到人們的重視。

趨化性細胞因子家族是迄今為止發(fā)現的最大的細胞因子亞群,是一組相對分子量為8 000～10 000的分泌型單鏈蛋白質組合,是細胞因子家族中唯一作用于G蛋白偶聯(lián)受體超家族的成員,包括四個亞家族:CXC型、CC型、C型、CX3C型[5]。趨化因子受體屬七次跨膜受體家族,與異源三聚體G蛋白連接,決定配體結合的特異性,膜內側受體與GTP蛋白偶聯(lián),啟動信號轉導。根據與不同趨化因子結合,趨化因子受體分為 CXCR、CCR、CR、CX3CR四型。趨化因子受體可表達于多種免疫活性細胞如淋巴細胞、樹突狀細胞、中性粒細胞、單核細胞以及其他炎癥細胞表面[6]。趨化因子配受體的結合可引發(fā)胞內復雜的信號轉導級聯(lián)反應,調節(jié)靶細胞的生物活性,包括特異性趨化作用,行使調控免疫細胞定向遷移和相互作用的生物學功能,在免疫系統(tǒng)分化成熟、免疫監(jiān)視、免疫自穩(wěn)、造血及機體發(fā)育過程中發(fā)揮重要調節(jié)作用,還可表達于上皮細胞、血管內皮細胞及腫瘤細胞,參與血管生成及腫瘤轉移等病理生理過程。

本實驗證實孕晚期胎盤合體滋養(yǎng)細胞及細胞滋養(yǎng)細胞均表達 CXCL16、CXCR6、CCL2、CCR2,子癇前期重度患者胎盤組織CXCL16、CXCR6顯著下降,正常妊娠婦女和子癇前期患者胎盤組織CCL2、CCR2的表達無明顯變化。胎盤絨毛組織主要由滋養(yǎng)細胞組成,是唯一與母體蛻膜密切接觸的胎兒部分,構成了獨特的母胎界面免疫微環(huán)境,不僅承擔著內分泌功能還對胎盤的形成至關重要。CXCL16、CXCR6、CCL2、CCR2在滋養(yǎng)細胞中表達說明胎盤絨毛組織可能通過共表達趨化因子及其相應受體調節(jié)自身功能,又可通過旁分泌趨化因子調控臨近組織,從而建立組織間及自身的聯(lián)系。CXCL16與其受體CXCR6結合后,可經異三聚體G蛋白、磷脂酰肌醇3激酶、蛋白激酶B等途徑促進細胞增殖、分化,抑制細胞凋亡,提高細胞的侵襲能力[7]。人動脈粥樣硬化損傷部位的平滑肌細胞表達CXCL16和CXCR6,應用外源性的CXCL16處理后,不僅能夠加強細胞間的牢固黏附,還能促進細胞的增殖,延緩細胞凋亡[8]。滋養(yǎng)細胞也能通過自分泌或旁分泌CXCL16及自身表達的CXCR6調節(jié)和促進滋養(yǎng)細胞的增殖、分化和侵襲[9]。子癇前期重度患者胎盤組織CXCL16、CXCR6顯著下降,提示可能引起滋養(yǎng)細胞侵入缺陷而導致子宮螺旋動脈重鑄障礙。

綜上所述,趨化因子及其受體可能參與滋養(yǎng)細胞的調控,在胎盤形成和發(fā)育中其重要作用,其異常表達可能是子癇前期重度患者發(fā)病的主要原因之一。

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