郭艷霞 王志強(qiáng)

(河北省唐山市豐南區(qū)中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，河北 豐南 063300)

高效液相色譜法測(cè)定參麻通絡(luò)膠囊中芍藥苷的含量

郭艷霞 王志強(qiáng)1

(河北省唐山市豐南區(qū)中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，河北 豐南 063300)

目的 建立高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定參麻通絡(luò)膠囊中芍藥苷含量。方法 色譜柱為Diamonsil，C18，5 μm，4.6mm × 250 mm，甲醇 - 水 - 冰醋酸(32∶68∶0.2)，流速為 1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm。進(jìn)樣量為20 μL。結(jié)果 芍藥苷在0.0071～0.0427 mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。平均回收率為99.51%。結(jié)論 本品方法操作簡(jiǎn)便、可靠，重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，可作為參麻通絡(luò)膠囊的內(nèi)在質(zhì)量控制方法。

回收率;丹參;天麻;通絡(luò);膠囊;色譜法，高壓液相;芍藥甙

參麻通絡(luò)膠囊具有益氣活血、化瘀通絡(luò)、滋補(bǔ)肝腎功效，用于治療氣血兩虛、肝腎不足、瘀血阻絡(luò)所致頭暈健忘，肢體不遂。臨床上腦梗死及其后遺癥、腦動(dòng)脈硬化、老年性癡呆常見上述證候。參麻通絡(luò)膠囊由黃芪、丹參、天麻、半夏、赤芍藥、當(dāng)歸、桃仁、紅花、雞血藤、竹茹、石菖蒲、僵蠶、枸杞子、郁金、白芍藥、牛膝16味藥材組成。赤芍藥、白芍藥為該制劑主藥之一，其中芍藥苷是赤芍藥、白芍藥的主要有效成分。測(cè)定處方中的有效成分芍藥苷的含量對(duì)臨床合理用藥具有指導(dǎo)意義。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 高效液相色譜(HPLC)儀:泵-seriesⅢ型;檢測(cè)器:Model 500;色譜工作站:ANASTAR(美國SSI公司)色譜柱 Diamonsil，C18，5 μm，4.6 mm ×250 mm(美國熱電公司)。

1.1.2 試劑 甲醇(色譜純)(天津四友試劑廠);水(二次重蒸水);冰醋酸(分析純)(天津市盛奧化學(xué)試劑有限公司);對(duì)照品:芍藥苷對(duì)照品(含量測(cè)定用，批號(hào)0736-20011，中國藥品生物制品檢定所)。

1.2 溶液的制備

1.2.1 芍藥苷對(duì)照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒質(zhì)量的芍藥苷對(duì)照品8.9 mg，置25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，再精密量取2 mL置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得0.0285 mg/mL對(duì)照品溶液。

1.2.2 供試品溶液的制備

1.2.2.1 提取方法的選擇

1.2.2.1.1 方法1 取參麻通絡(luò)膠囊10粒，內(nèi)容物研細(xì)，稱取約0.4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入70%乙醇50 mL，稱定質(zhì)量，放置過夜，超聲提取30 min，放至室溫，再稱定質(zhì)量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過，藥渣及濾器用70%乙醇20 mL分?jǐn)?shù)次洗滌，洗液并入濾液中，蒸至近干，殘?jiān)崾谷芙?，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

1.2.2.1.2 方法2 取參麻通絡(luò)膠囊10粒，內(nèi)容物研細(xì)，稱取約0.4 g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，加入70%乙醇50 mL，稱定質(zhì)量，放置過夜，超聲提取30 min，放至室溫，再稱定質(zhì)量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

芍藥苷對(duì)照品溶液的濃度為0.028 5 mg/mL，分別精密量取20 μL，按擬定的色譜條件測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 提取方式的選擇

上述結(jié)果表明，2種方法提取結(jié)果無明顯差異。但方法1提取后蒸至近干再溶解的方式較繁瑣容易引起誤差，故采用方法2的提取方法。

1.2.2.2 提取時(shí)間的選擇 分別以20、30、40 min超聲提取，比較如下:取參麻通絡(luò)膠囊品10粒，研細(xì)，取約0.4 g，稱取3份，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，加入70%乙醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，放置過夜，分別超聲提取20、30、40 min，放至室溫，再稱定質(zhì)量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過，取續(xù)濾液即得。芍藥苷對(duì)照品溶液的濃度為0.028 5 mg/mL，分別精密量取20 μL，按擬定的色譜條件測(cè)定。結(jié)果見表2。

表2 提取時(shí)間的選擇

從上述數(shù)據(jù)可得，30 min與40 min提取芍藥苷無明顯差異，為了節(jié)能省耗，將提取時(shí)間定為30 min。

1.2.2.3 供試品溶液的制備方法 取參麻通絡(luò)膠囊10粒，內(nèi)容物研細(xì)，取約0.4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入70%乙醇50 mL，密塞，放置過夜，超聲處理(250 W，40 kHz)30 min，放至室溫，用70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過，取續(xù)濾液即得。

1.3 色譜條件的選擇

1.3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 取芍藥苷對(duì)照品溶液，在200～400 nm處掃描，掃描結(jié)果選擇230 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

1.3.2 流動(dòng)相的選擇 甲醇-水-冰醋酸(25∶75∶0.2)，結(jié)果:芍藥苷峰與其他組分峰完全分離，保留時(shí)間稍長(zhǎng)，故調(diào)節(jié)流動(dòng)相比例，最終確定流動(dòng)相為甲醇-水-冰醋酸(32∶68∶0.2)。

2 含量測(cè)定

2.1 陰性對(duì)照溶液的制備及干擾情況 取缺赤芍藥、白芍藥的陰性樣品，按1.2.2.3方法制成缺赤芍藥、白芍藥的陰性對(duì)照溶液。精密量取陰性對(duì)照溶液20 μL進(jìn)樣，觀察陰性對(duì)照溶液在芍藥苷峰的保留時(shí)間處是否有雜質(zhì)峰。

結(jié)果:在芍藥苷峰保留時(shí)間處無雜質(zhì)峰干擾(見圖1～3)。

圖1 缺赤芍藥、白芍藥的陰性對(duì)照溶液HPLC圖

圖2 參麻通絡(luò)膠囊供試品溶液HPLC圖

圖3 芍藥苷對(duì)照品溶液HPLC圖

2.2 測(cè)定方法及結(jié)果

2.2.1 線性關(guān)系考察 取濃度為 0.007 1、0.014 2、0.028 5、0.035 6、0.042 7 mg/mL 的芍藥苷對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣20 μL，按擬定的色譜條件測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，芍藥苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程:y=705 335x+13 036 R2=0.999 9。結(jié)果見表3、圖 4。

表3 線性關(guān)系考察結(jié)果

結(jié)果:實(shí)驗(yàn)表明芍藥苷濃度在 0.007 1～0.042 7 mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2.2 精密度試驗(yàn) 取參麻通絡(luò)膠囊10粒，內(nèi)容物研細(xì)，取約 0.4 g，精密稱定，按 1.2.2.3 方法制成供試品溶液。取同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次20 μL，測(cè)定芍藥苷峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果見表4。

2.2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 將同一份供試品溶液于室溫下放置，分別于第0、2、4、6、8 h 按上述色譜條件檢測(cè)，各進(jìn)樣20 μL，記錄芍藥苷峰面積，考察樣品溶液的穩(wěn)定性，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果見表5。

圖4 芍藥苷濃度線性關(guān)系

表4 精密度試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果:實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，儀器的精密度良好。

表5 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果:實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶液至少在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.4 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取已知含量的參麻通絡(luò)膠囊(批號(hào)110401)，稱取約0.4 g，精密稱取6份，置具塞錐形瓶中，加入70%乙醇25 mL，再分別精密添加已配制好的芍藥苷對(duì)照品溶液(0.285 mg/mL)2.5 mL，揮干溶劑，按1.2.2.3方法制成供試品溶液。按擬定的色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表6。

2.2.5 樣品芍藥苷含量測(cè)定 取參麻通絡(luò)膠囊成品10批，分別按 1.2.2.3 方法制成供試品溶液;按 1.2.1 方法制成芍藥苷對(duì)照品溶液。分別精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μL，按上述色譜條件測(cè)定，以面積外標(biāo)法計(jì)算含量。測(cè)定結(jié)果見表7。

表6 回收率試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果:從以上試驗(yàn)可知，本方法的回收率良好。

表7 成品含量測(cè)定結(jié)果

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào) (110401)的供試品適量，內(nèi)容物研細(xì)，稱取 6份，取約 0.4 g，精密稱定，按 1.2.2.3方法制成供試品溶液，按擬定的色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表8。

表8 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果:從以上數(shù)據(jù)可知，本方法的重復(fù)性良好。

3 結(jié)論

以上結(jié)果可見，參麻通絡(luò)膠囊10批成品的芍藥苷含量結(jié)果均在1.32～1.44 mg/粒之間，本品每粒含赤芍藥、白芍藥以芍藥苷(C20H28O4)計(jì)，不得低于0.80 mg。

Determination of paeoniflorin content in Shenma Tongluo capsule by High-performance liquid chromatog-raphy

GUO Yanxia*，WANG Zhiqiang.*Fengnan District Hospital of Traditional Chinese Medicine of Tangshan，Hebei，F(xiàn)engnan063300

ObjectiveTo establish a method for Determination of paeoniflorin content in Shenma Tongluo capsule by High-performance liquid chromatography(HPLC).MethodsChromatographic conditions of paeoniflorin determination are as follows:column(Diamonsil，C18，5 μm 4.6 mm ×250 mm)，mobile phase［Methanol-waterglacial acetic acid(32∶68∶0.2)］，flow(1.0 mL/min)，detection wavelength(230 nm)and sample volume(20 μL).ResultsPaeoniflorin in 0.007 1 ～ 0.042 7 mg/mL range was a good linear relationship.The average recovery was 99.51%.ConclusionThe method is simple，reliable，reproducible，specific，and can be used as intrinsic quality control of Shenma Tongluo capsule.

Recovery;Salvia;Gastrodia;Meridians;Capsule;Chromatography;High-pressure liquid;Paeoniflorin

R284.1;R944.5

A

1002-2619(2011)10-1548-03

1 河北省唐山市豐南區(qū)中醫(yī)醫(yī)院外科，河北 豐南 063300

郭艷霞(1975—)，女，主管藥師。從事藥劑工作。

2011-06-22)