曾祥永，周錫國，裴太蓉

1.重慶市南岸區(qū)中醫(yī)院骨科，重慶 400060；2.重慶市中藥研究院，重慶 400065

痛風性關(guān)節(jié)炎是一種常見的代謝性疾病，臨床以關(guān)節(jié)紅、腫、熱、痛，血清尿酸鹽增高為特點。近年來，隨著生活水平的提高，發(fā)病率有明顯增加，已成為當今世界中老年男性的常見病。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 雄性Wistar大鼠40只，體重140～160 g。普通飼料喂養(yǎng)，自由飲水。

1.1.2 主要試劑 痛風舒浸膏粉（1 g浸膏粉相當于5 g生藥；批號：000306，由重慶南岸區(qū)中醫(yī)院骨科提供）臨用前用生理鹽水配制成所需濃度；雙氯芬酸鈉腸溶片，25mg/片，由大連百利天華制藥有限公司生產(chǎn)。5-羥色胺 （5-HT）、鉀離子（K+）、多巴胺（DA）、去甲腎上腺素（NE）標準品及尿酸鈉結(jié)晶均購自Sigma公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 尿酸鈉溶液的制備 取194 ml蒸餾水加6 ml NaOH（1 mol/L）。 煮沸后加 1 g尿酸，用 1 mol/L HCl，調(diào) pH 至 7.2，攪拌冷卻，貯存于4℃冰箱中24 h，去上清液，用濾紙將沉淀物水分吸干，干燥即可得尿酸鈉結(jié)晶。取1 250 mg尿酸鈉結(jié)晶，加入45 ml生理鹽水，同時加入5 ml吐溫80，加熱攪拌，配成50 ml尿酸鈉溶液備用。

1.2.2 模型制作 參照Coderre等[1]的經(jīng)典造模方法略作改進。用6號注射針在受試大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)背側(cè)從45°方向插入脛骨肌肌腱內(nèi)側(cè)，將0.2 ml尿酸鈉溶液（濃度為2.5 g/100 ml）注入踝關(guān)節(jié)腔。正常組動物用生理鹽水代替尿酸鈉溶液。

1.2.3 動物分組 將動物隨機分成4組（10只/組）：正常組、模型組、雙氯芬酸組、痛風舒浸膏粉組。各組連續(xù)灌胃給藥5 d，每日1次，正常組和模型組給予生理鹽水灌胃，雙氯芬酸組給予雙氯芬酸3 mg/kg，痛風舒浸膏粉組給予痛風舒浸膏粉1.2 g/kg（為60 kg體重成人臨床日用量的4倍）。給藥體積均為1 ml/100 g體重。

1.3 觀察指標

1.3.1 關(guān)節(jié)腫脹度測量 各組大鼠在造模后3 h（用藥前），及用藥后5 d，分別在受試踝關(guān)節(jié)相同部位，用無彈性軟尺測量其周徑，觀察造模大鼠治療前后各組受試關(guān)節(jié)周徑的變化。

1.3.2 受試關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)腔滑液的涂片觀察 各組大鼠用藥5 d后處死，取受試踝關(guān)節(jié)，清洗干凈，用手術(shù)刀剖開關(guān)節(jié)腔，取關(guān)節(jié)滑液涂于載玻片上，瑞氏染色，顯微鏡下觀察各組大鼠關(guān)節(jié)滑液的白細胞，觀察5個100倍視野，計算白細胞平均數(shù)。

1.3.3 致痛物質(zhì)K+、DA、5-HT含量的測定 各組大鼠處死后，取受試關(guān)節(jié)周圍軟組織，制成勻漿，比色法檢測K+，熒光分光光度法檢測DA、5-HT的含量。

1.4 統(tǒng)計學處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行方差分析及t檢驗，各組數(shù)據(jù)行單因素方差分析，組間變量行兩兩比較的SNK法分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 藥物對關(guān)節(jié)周徑的影響

見表1。

表1 用藥前后受試關(guān)節(jié)周徑的變化（x±s，cm）

由表1可知，用藥前正常組大鼠關(guān)節(jié)周徑顯著小于其他各組（P＜0.05），其他各組間無明顯差異（P＞0.05）。 用藥后正常組大鼠關(guān)節(jié)周徑仍顯著小于其他各組（P＜0.05），模型組關(guān)節(jié)周徑顯著大于雙氯芬酸組和痛風舒浸膏粉組（P＜0.05）。正常組和模型組用藥前后關(guān)節(jié)周徑無明顯差異（P＞0.05），雙氯芬酸組和痛風舒浸膏粉組用藥后關(guān)節(jié)周徑縮小（P＜0.05）。

2.2 藥物對受試關(guān)節(jié)滑液涂片白細胞計數(shù)的影響

見表2。

表2 各組治療后關(guān)節(jié)滑液中白細胞計數(shù)（x±s，個/HP）

由表2可知，與正常組比較，其他各組關(guān)節(jié)滑液中白細胞數(shù)均有顯著升高（P＜0.05）。與模型組比較，雙氯芬酸組和痛風舒浸膏粉組治療后關(guān)節(jié)滑液中白細胞數(shù)均有顯著降低（P＜0.05），而雙氯芬酸組和痛風舒浸膏粉組間無明顯差異（P＞0.05）。

2.3 關(guān)節(jié)周圍軟組織中疼痛介質(zhì)的含量

見表3。由表3可知，模型組受試關(guān)節(jié)周圍軟組織中致痛物質(zhì) K＋、DA、5-HT 的含量均顯著高于其他三組（P＜0.05），氯芬酸組和痛風舒浸膏粉組受試關(guān)節(jié)周圍軟組織中K＋含量顯著高于正常組（P＜0.05）。

3 討論

大量研究表明，痛風性關(guān)節(jié)炎是炎癥介質(zhì)尿酸鈉沉積于局部關(guān)節(jié)組織引起的炎癥反應[1-3]。故直接注射尿酸鈉溶液于模型動物的關(guān)節(jié)腔內(nèi)造成痛風性關(guān)節(jié)炎是最直接的方法。本實驗采用Coderre等[1]設(shè)計的尿酸鈉局部關(guān)節(jié)注射的經(jīng)典造模方法，采用0.2 ml尿酸鈉溶液注入大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)腔造成急性痛風性關(guān)節(jié)炎模型，觀察到治療前正常組大鼠受試關(guān)節(jié)周徑顯著小于其他各組（P＜0.05），說明痛風性關(guān)節(jié)炎造模成功。本方法具有操作簡便、成功率高的特點。

表3 受試關(guān)節(jié)周圍軟組織中疼痛介質(zhì)的含量（x±s）

痛風性關(guān)節(jié)炎是因體內(nèi)嘌呤代謝物紊亂，血中尿酸合成增多和（或）排出減少致血中尿酸濃度增高，尿酸鈉針狀微結(jié)晶體沉積在關(guān)節(jié)囊及其周圍組織所致。祖國醫(yī)學認為痛風屬風寒濕三氣雜致，后期久病入絡(luò)，瘀血凝滯，關(guān)節(jié)肥厚，活動受限[4]。中醫(yī)治療在急性期以清熱利濕、祛風通絡(luò)為主，后期治療除利濕通絡(luò)外，佐以活血化瘀[5]。

痛風舒浸膏粉是由牛膝、忍冬藤、黃柏、赤芍等成分組成的中藥復方制劑，具有利尿、改善血瘀模型大鼠的血液黏滯性及活血化瘀的作用。本實驗研究其對痛風性關(guān)節(jié)炎的治療作用及機制。實驗結(jié)果顯示痛風舒浸膏粉能明顯縮小受試關(guān)節(jié)周徑，減少關(guān)節(jié)滑液中白細胞數(shù)量，說明痛風舒浸膏粉能抑制尿酸鈉所致大鼠關(guān)節(jié)腫脹和局部炎癥反應。

關(guān)節(jié)疼痛是痛風性關(guān)節(jié)炎的主要表現(xiàn)。引起痛風關(guān)節(jié)疼痛的內(nèi)源性致痛物質(zhì)主要有：無機離子，如K＋、H＋等；某些單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，如5-HT、NE、組織胺等；肽類，如P物質(zhì)、前列腺素、緩激肽等。這些物質(zhì)在體內(nèi)產(chǎn)生過多，通過刺激局部感受神經(jīng)末梢外周感受器產(chǎn)生很強的致痛效應。本實驗顯示造模后受試關(guān)節(jié)周圍軟組織中K＋、DA、5-HT濃度均明顯升高，而應用痛風舒浸膏粉能明顯降低K＋、DA、5-HT的濃度，說明痛風舒浸膏粉對急性痛風性關(guān)節(jié)炎具有鎮(zhèn)痛的作用。

[1]Coderre TJ,Wall PD.Ankle joint urate arthritis(AJUA)in rats:an alternative animal model of arthritis to that produced by Freund's adjuvant[J].Pain,1987,28(12):379-393.

[2]時樂,徐立.痛風性關(guān)節(jié)炎動物模型的研究現(xiàn)狀與展望[J].中國實驗動物學報,2006,14(1):71-74.

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[4]張莉梅,李佩臣.痛風性關(guān)節(jié)炎中醫(yī)治療新進展[J].中醫(yī)藥信息,2000,17(5):16-17.

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