姜洪芳，顏恒毅，趙立

（中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院 1.老年病科；2.呼吸內(nèi)科 沈陽110004）

吸煙是慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）的重要致病因素，而戒煙被認(rèn)為是改善肺功能、減緩COPD進(jìn)程的有效手段［1］。然而近期有文獻(xiàn)報(bào)道，COPD患者在戒煙后其氣道炎癥反應(yīng)并不能迅速停止，且可能持續(xù)加重［2，3］。這將引發(fā)人們的思索，是否某些“健康”吸煙者在戒煙后，病情可發(fā)展至COPD；抑或已發(fā)展至COPD病情的患者在戒煙后，其病情轉(zhuǎn)歸并不如我們所預(yù)期的樂觀。鑒于此，我們的研究以被動(dòng)吸煙大鼠為研究對象，制作不同煙齡大鼠模型，觀察其戒煙后肺組織病理及炎性介質(zhì)變化，以期對不同吸煙人群戒煙做出正確指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組：選用Wistar雄性大鼠170只，體質(zhì)量150~230 g（中國醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供），隨機(jī)分為吸煙30 d組（80只）、吸煙70 d組（80只）及對照組（10只）。其中吸煙組按戒煙時(shí)相0 d、3 d、1周、2周、4周、6周、8周、12周，再次隨機(jī)分為8個(gè)亞組，每亞組均10只大鼠。各組飼料、飲水相同，均予自由飲水和攝食。

1.1.2 吸煙組模型構(gòu)建：將吸煙組大鼠以120只/m3密度放入100 cm×50 cm×50 cm的有機(jī)玻璃制成的染毒箱內(nèi)。每天被動(dòng)吸煙2次，每次間隔4 h，每次30 min、吸煙10支，連續(xù)吸煙30 d或70 d后戒煙。香煙為沈陽卷煙廠生產(chǎn)的藍(lán)翎牌香煙，焦油量：14 mg，煙氣煙堿量：12 mg，烤煙型 84 mm。

1.2 方法

1.2.1 血清IL-8濃度的測定：對照組及吸煙組大鼠分別于實(shí)驗(yàn)結(jié)束次日，以2%戊巴比妥鈉（50 mg/kg）腹腔注射麻醉后，腹主動(dòng)脈放血致死。血樣以3500 r/min離心，取血清，－80℃凍存。采用酶聯(lián)免疫吸附方法測定血清中IL-8的蛋白質(zhì)含量。試劑盒購于美國的BioSource Europe S-A公司。

1.2.2 病理學(xué)觀察：各組大鼠均取左側(cè)靠肺門處組織0.5 cm×0.5 cm大小，10%甲醛溶液固定，石蠟切片常規(guī)脫蠟、梯度乙醇下行入水，行HE染色，脫水，透明，樹膠封片。光鏡觀察HE染色切片，按文獻(xiàn)［4］所述方法對各組大鼠肺組織炎癥進(jìn)行病理學(xué)評分。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比較采用方差分析法檢驗(yàn)，各組間兩兩比較用q檢驗(yàn)完成。P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 對照組及戒煙組大鼠血清IL-8濃度測定及比較

2.1.1 對照組：（26.16±3.00）pg/ml

2.1.2 戒煙組各時(shí)相大鼠血清IL-8濃度變化及比較見表1：

表1 戒煙組各時(shí)相大鼠血清I L-8濃度變化及比較（pg/ml）T ab.1 Seurm level of I L-8 at each time point after smo k ing cessation in two smo k e exposure groups（pg/ml）

2.2 對照組及戒煙組大鼠肺組織病理變化及炎癥評分比較

2.2.1 對照組肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，未見明顯炎癥細(xì)胞侵潤；吸煙30 d組大鼠多數(shù)可見氣道上皮細(xì)胞纖毛發(fā)生粘連、倒伏，上皮細(xì)胞空泡變形、壞死、增生，炎性細(xì)胞浸潤；而吸煙70 d大鼠在此基礎(chǔ)上，還可見腺體增生肥大，分泌功能亢進(jìn)，肺泡壁變薄、脹大、破裂或形成肺大泡等，符合肺氣腫病理表現(xiàn)。見圖1。

圖1 肺組織病理 H E×200Fig.1 L ung pathology H E×200

2.2.2 對照組及戒煙組各時(shí)相大鼠肺組織病理炎癥評分及比較：

2.2.2.1 對照組：10.50±1.78

2.2.2.2 戒煙組各時(shí)相大鼠肺組織病理炎癥評分及比較見表2。

由表1、2可見各吸煙組大鼠在戒煙后各時(shí)相點(diǎn)較對照組血清IL-8的濃度高，肺組織病理炎癥反應(yīng)重，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；吸煙30 d組在戒煙后8周血清IL-8的濃度達(dá)到高峰，肺組織病理炎癥評分最高，隨后可見IL-8的濃度有下降趨勢，病理炎性反應(yīng)有所減輕；吸煙70 d組戒煙后，在所觀測時(shí)間點(diǎn)內(nèi)，血清IL-8的濃度持續(xù)升高，未見肺組織病理炎癥反應(yīng)減輕，且持續(xù)加重；吸煙70 d組在戒煙后各時(shí)相點(diǎn)可見血清IL-8濃度及肺組織病理炎癥反應(yīng)評分明顯高于吸煙30 d組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。

表2 戒煙組各時(shí)相大鼠肺組織病理炎癥評分及比較T ab.2 Inflammation score at each time point after smo k ing cessation in two smo k e exposure groups

3 討論

慢性阻塞性肺疾?。–OPD）是一種具有氣流受限特征的肺部疾病，與慢性支氣管炎及肺氣腫疾病密切相關(guān)。在吸煙者中可發(fā)展為有明顯癥狀的COPD患者占15%～20%，有慢性呼吸道癥狀而無氣流受限者占50%，約30%的吸煙者無慢性呼吸道癥狀及氣流受限，即所謂的“正常吸煙者”，后兩者隨著煙齡和煙量的與日俱增，也極有可能發(fā)展為COPD患者［5］。本實(shí)驗(yàn)中設(shè)計(jì)吸煙30 d組及吸煙70 d組大鼠，可分別代表不同煙齡所致的嚴(yán)重程度不同的病情，其中吸煙30 d組大鼠肺臟可見明顯的炎癥反應(yīng)，病理類似人類慢性支氣管炎表現(xiàn)，而吸煙70 d組大鼠肺組織病理已符合典型肺氣腫表現(xiàn)。COPD的主要特征是氣道阻塞和氣道炎癥。中性粒細(xì)胞可通過釋放各種蛋白酶參與氣道壁的受損和肺組織的破壞，是影響COPD病程的主要炎癥細(xì)胞。而IL-8對中性粒細(xì)胞具有趨化活性［6］，可在感染、污染等因素刺激時(shí)由巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和上皮細(xì)胞產(chǎn)生，在氣道炎癥中起著直接的介導(dǎo)作用，并與氣流受限程度相匹配。因此，本實(shí)驗(yàn)通過監(jiān)測不同煙齡大鼠在戒煙后血清IL-8及肺組織病理變化，可了解不同煙齡患者在戒煙后病情的進(jìn)展和預(yù)后。

目前有研究報(bào)導(dǎo)認(rèn)為戒煙后肺部癥狀可以得到緩解，肺功能下降速度有所減緩［7］，但這是否與肺部炎癥病情緩解有關(guān)，尚不清楚。同時(shí)也有其它的研究認(rèn)為戒煙不能逆轉(zhuǎn)COPD病情，且隨戒煙時(shí)間延長，氣道內(nèi)炎癥細(xì)胞數(shù)增多［8］。因此，關(guān)于戒煙如何影響炎癥進(jìn)程及戒煙時(shí)間點(diǎn)的選擇，目前還不十分清楚。本實(shí)驗(yàn)通過探討不同累積量的煙草吸入對肺臟及全身的炎癥后遺效應(yīng)，以此對不同吸煙人群的戒煙指導(dǎo)和干預(yù)治療提供理論依據(jù)。研究結(jié)果表明，累計(jì)吸煙時(shí)間越長，戒煙后肺組織及全身炎性反應(yīng)越重，持續(xù)時(shí)間越長。而病情發(fā)展至COPD嚴(yán)重階段，單純戒煙不能逆轉(zhuǎn)病情。戒煙益處的體現(xiàn)明顯決定于戒煙時(shí)病情的嚴(yán)重程度，這與國外一些研究結(jié)論相同［9］。輕-中度COPD患者戒煙可以明顯提高生存率，減少入院率，減緩肺功能的下降［10］。因此，要提倡及早戒煙，唯有早期戒煙可以將COPD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)降低，同時(shí)延緩肺功能的損害。

吸煙所致COPD病變過程十分復(fù)雜，戒煙后肺組織的炎性介質(zhì)和炎性細(xì)胞發(fā)揮作用的路徑和機(jī)制還需要深入研究。目前已有報(bào)導(dǎo)提出，COPD患者戒煙后持續(xù)存在的炎性反應(yīng)可能是一個(gè)綜合性部分維修過程，炎性介質(zhì)及炎性細(xì)胞的增多可能起到運(yùn)輸和消除炎性反應(yīng)的作用［11］。因此，建議以后的研究應(yīng)該注重于觀察戒煙者更長時(shí)間炎性介質(zhì)及肺組織病理變化，進(jìn)一步將炎性介質(zhì)及炎性細(xì)胞分類，探討其發(fā)揮作用的機(jī)制。

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