徐衛(wèi)華，符生苗，趙 英

(海南省人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)部，海南 ?？?570311)

·綜 述·

親權(quán)鑒定方法概述

徐衛(wèi)華，符生苗*，趙 英

(海南省人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)部，海南 ?？?570311)

本文主要對(duì)目前親權(quán)鑒定所采用的常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列、單核苷酸多態(tài)性分析、性染色體短聯(lián)重復(fù)序列以及線粒體測(cè)序等幾種技術(shù)進(jìn)行比較，總結(jié)特點(diǎn)和優(yōu)缺點(diǎn)，便于實(shí)際工作中借鑒應(yīng)用。

親權(quán)鑒定；常染色體短串聯(lián)重復(fù)序列；單核苷酸多態(tài)性分析；性染色體短串聯(lián)重復(fù)序列；線粒體測(cè)序

所謂親權(quán)鑒定，是通過(guò)對(duì)人類遺傳標(biāo)記的檢測(cè)，根據(jù)遺傳規(guī)律分析，對(duì)個(gè)體之間血緣關(guān)系的鑒定[1]，通俗地說(shuō)，就是親子鑒定。親子鑒定的說(shuō)法和試驗(yàn)在我國(guó)三國(guó)時(shí)期就已經(jīng)存在，由于中國(guó)封建思想中倫理道德對(duì)血緣關(guān)系相當(dāng)看重，三國(guó)時(shí)代出現(xiàn)的以血認(rèn)親的事情，即兩人血液滴在一起能相溶就具有親子關(guān)系。雖然“滴血認(rèn)親”的做法在我國(guó)古代流行過(guò)很長(zhǎng)時(shí)間，但以現(xiàn)代技術(shù)分析，這種做法沒(méi)有科學(xué)依據(jù)。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)的發(fā)展，有關(guān)親子鑒定的方法越來(lái)越完善，結(jié)果也越來(lái)越準(zhǔn)確。

現(xiàn)代親子鑒定技術(shù)是遺傳學(xué)、分子遺傳學(xué)、群體遺傳學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)、生物統(tǒng)計(jì)學(xué)和計(jì)算機(jī)學(xué)等多門學(xué)科的交叉和綜合應(yīng)用。需要做親子鑒定的情況有下面幾種：①已婚男方懷疑孩子不是親生；②非婚生育中男方懷疑孩子非親生或女方為了證明誰(shuí)是孩子生父；③強(qiáng)奸致孕案件女方指控某男為嫌疑人；④抱養(yǎng)認(rèn)親、移民需要、繼承財(cái)產(chǎn)公證、出生證明或父母信息不全等原因?qū)е律蠎艨谛枰b定；⑤懷疑孩子在醫(yī)院出生時(shí)抱錯(cuò)；⑥計(jì)生委確認(rèn)孩子是否超生或領(lǐng)養(yǎng)；⑦被拐騙兒童或失散家庭成員的確認(rèn)；⑧尸體(碎尸塊、尸骨等)身份(尸源)確定；⑨其他刑事案件需要鑒定。因此親子鑒定是一項(xiàng)十分嚴(yán)肅的工作，稍有不慎就會(huì)造成當(dāng)事人精神上的痛苦和經(jīng)濟(jì)上的損失，甚至刑事案件的錯(cuò)判。

關(guān)于親子鑒定的方法，從最初的ABO血型鑒定、血清型鑒定，到現(xiàn)在的短串聯(lián)重復(fù)序列(Short tandem repeat，STR)、單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism，SNP)分析及線粒體測(cè)序等，鑒定結(jié)論的準(zhǔn)確率越來(lái)越高。ABO血型和血清型鑒定由于準(zhǔn)確度不高，已被淘汰，現(xiàn)就常用的常染色體STR、SNP分析、性染色體STR和線粒體測(cè)序做如下綜述。

1 STR應(yīng)用

STR又稱微衛(wèi)星DNA，STR是一種可遺傳的不穩(wěn)定的并且具有高度多態(tài)性的短的核苷酸重復(fù)序列，STR多態(tài)性具有種類多、分布廣、高度多態(tài)性等特點(diǎn)，并按孟德?tīng)栠z傳規(guī)律在人群中遺傳[2]。目前STR作為一個(gè)重要的遺傳標(biāo)記系統(tǒng)，已廣泛應(yīng)用于腫瘤生化研究、法醫(yī)學(xué)個(gè)體識(shí)別、親權(quán)鑒定和群體遺傳學(xué)分析等領(lǐng)域。

STR的核心序列基本為2～7bp，堿基呈10～60次不等的串聯(lián)重復(fù)排列，其總長(zhǎng)度一般小于400bp，以一、二、三、四核苷酸重復(fù)序列最為常見(jiàn)，總數(shù)占真核生物基因組的5%左右，人類基因組的STR以polyA，polyT單核苷酸重復(fù)多見(jiàn)，其中用作DNA標(biāo)記物的三核苷酸重復(fù)以(CXG)n類型常見(jiàn)。

1.1 親子鑒定對(duì)STR基因座的要求 在親子鑒定中，常染色體STR基因座應(yīng)符合以下要求：(1)經(jīng)過(guò)群體遺傳學(xué)檢查，多態(tài)性高，非父排除率在0.7以上。(2)經(jīng)過(guò)500次以上減數(shù)分裂的家系調(diào)查，基因座的突變率在0.002以下，檢測(cè)系統(tǒng)的累計(jì)非父排除率應(yīng)達(dá)到99.99%以上。依據(jù)DNA分型結(jié)果對(duì)是否存在親權(quán)關(guān)系作出的判斷，一般分為“排除存在親權(quán)關(guān)系”和“支持存在親權(quán)關(guān)系”兩種情形。經(jīng)過(guò)累計(jì)非父排除率大于99.99%的多個(gè)基因座的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)有3個(gè)以上的基因座不符合遺傳規(guī)律，可以排除親權(quán)關(guān)系；經(jīng)過(guò)累計(jì)非父排除率大于99.99%的多個(gè)基因座的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)基因座均符合遺傳規(guī)律，必須計(jì)算親權(quán)指數(shù)PI，如果累積親權(quán)指數(shù)(Cumulative paternity index，CPI)大于10000，則支持存在親權(quán)關(guān)系[1]。CPI=PI1×PI2×PI3×…×PIn(1、2、3…n代表第1、2、3…n個(gè)基因座的親權(quán)指數(shù)(Paternity index，PI)值。

1.2 STR在法醫(yī)學(xué)個(gè)體識(shí)別和親權(quán)鑒定中的應(yīng)用 法醫(yī)檢案中，經(jīng)常會(huì)遇到僅有極少量血跡、分泌物或已大部分降解的生物材料，最準(zhǔn)確的方法是用PCR擴(kuò)增STR。人體的血液、精液、精斑、毛發(fā)、指(趾)甲、骨骼和牙齒等均可提取DNA用于STR分析。由于STR廣泛存在人類基因組中，而且具有穩(wěn)定性、雜合性和高度多態(tài)性，當(dāng)把幾個(gè)STR位點(diǎn)聯(lián)合分析后，根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)可以得到非常高的累積個(gè)體識(shí)別率和父權(quán)排除率。據(jù)統(tǒng)計(jì)，如果兩個(gè)個(gè)體沒(méi)有親緣關(guān)系，那么他們的基因型完全一致的概率小于10-12。近年建立的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)中，THO1、D13S317、VWA、CSF1PO、D21S11、TPOX、D3S1358、D3S820、D8S1179、D5S181、D16S539、D18S51和FGA等13個(gè)位點(diǎn)必須檢測(cè)[1]，筆者所在的實(shí)驗(yàn)室所檢測(cè)的21個(gè)位點(diǎn)中已包含這13個(gè)個(gè)體識(shí)別能力強(qiáng)而有效的位點(diǎn)。當(dāng)用常染色體STR因突變或其他原因不能判斷親權(quán)關(guān)系時(shí)，就需要檢驗(yàn)性染色體STR來(lái)協(xié)助確定。

2 SNP分析應(yīng)用

2.1 SNP特點(diǎn) 單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphisms，SNP)是第三代遺傳診斷標(biāo)記，近幾年被廣泛應(yīng)用于生物以及醫(yī)學(xué)研究的諸多領(lǐng)域。隨著人類基因組測(cè)序工作的完成和后基因組時(shí)代的到來(lái)，越來(lái)越多的SNP位點(diǎn)被發(fā)現(xiàn)。SNP具有以下特點(diǎn)：(1)數(shù)量多、覆蓋密度大，約每1000bp就會(huì)出現(xiàn)一個(gè)；(2)SNP一般是二等位多態(tài)性，不用分析片段的長(zhǎng)度即可進(jìn)行基因分型，利于發(fā)展自動(dòng)化技術(shù)；(3)遺傳穩(wěn)定性強(qiáng)，與STR等技術(shù)相比，SNP的遺傳穩(wěn)定性更好；(4)SNP多態(tài)性豐富，是最常見(jiàn)的遺傳變異類型，包含了目前己知的DNA多態(tài)性的80%以上；(5)位于基因內(nèi)部的部分SNP位點(diǎn)可能是疾病遺傳機(jī)制的候選改變基因座。由于SNP具有以上幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)，因此其對(duì)癌癥及遺傳性疾病、制藥業(yè)、群體遺傳學(xué)、法醫(yī)學(xué)甚至人類進(jìn)化的研究都將產(chǎn)生巨大的影響。

2.2 SNP在親子鑒定中的應(yīng)用 SNP只涉及到單個(gè)堿基的變化，因而SNP檢驗(yàn)就代表從單核苷酸層面對(duì)每個(gè)個(gè)體的DNA序列多態(tài)性進(jìn)行本質(zhì)的鑒別區(qū)分，這在法醫(yī)學(xué)的個(gè)體識(shí)別和親子鑒定中具有重要意義。通過(guò)Y-SNP單倍型分析，可以進(jìn)行單親的父子對(duì)親子鑒定，以及兄弟、叔侄、爺孫等的親權(quán)關(guān)系鑒定[3]。同前兩代遺傳標(biāo)記相比，SNP具有數(shù)量大、容易分型、擴(kuò)增效果好、分析方法多和個(gè)體識(shí)別率高的優(yōu)點(diǎn)。這些優(yōu)點(diǎn)應(yīng)用在法醫(yī)物證鑒定領(lǐng)域，可以補(bǔ)充現(xiàn)有DNA分析方法的不足，并提高對(duì)降解檢材DNA的分析能力[4]。目前已經(jīng)篩選出數(shù)量比較大的SNP位點(diǎn)用于親權(quán)關(guān)系鑒定[5]。

3 性染色體STR應(yīng)用

性染色體的遺傳特性可以在缺少雙親的兄弟(姐妹)認(rèn)親、同父異母的半兄弟(姐妹)認(rèn)親、隔代認(rèn)親等親權(quán)鑒定和發(fā)生突變基因座的親權(quán)鑒定中發(fā)揮很大的優(yōu)勢(shì)[6]。Y-染色體上遺傳標(biāo)記按父系遺傳方式傳遞，可以確定樣品是否來(lái)源于同一父系。適用于男性同胞之間、隔代或旁系的親緣關(guān)系鑒定，如再結(jié)合孟德?tīng)栠z傳的遺傳標(biāo)記檢驗(yàn)，可以正確確定樣品間的親緣關(guān)系。Y染色體特異的STR基因座具有父系遺傳、呈單倍型遺傳、多態(tài)信息含量和個(gè)體識(shí)別率高、分型簡(jiǎn)單和應(yīng)用方便、不同種族民族及不同地域人群的STR差異明顯等特點(diǎn)，與常染色體STR基因座相比在法醫(yī)鑒定上具有獨(dú)特性[7]，在缺少雙親的兄弟鑒定或男性個(gè)體識(shí)別中對(duì)鑒定結(jié)果起決定性作用。利用Y-STR遺傳標(biāo)記對(duì)陰道分泌物與精液構(gòu)成的混合體進(jìn)行分析，可直接精確檢驗(yàn)出男性成份，提高犯罪案件中的個(gè)體識(shí)別率。在無(wú)法獲得嫌疑人檢材的情況下，只要有嫌疑人父系血樣標(biāo)本，同樣可以與現(xiàn)場(chǎng)檢材比對(duì)，得出結(jié)論。Y-STR不僅可以排除嫌疑者本人，還排除了同一父系的其他親屬，為大面積篩查嫌疑人提供了簡(jiǎn)單快捷的方法。筆者在日常工作中曾遇到如下情況：父子兩人21個(gè)常染色體STR基因座中有2個(gè)位點(diǎn)不符合，不能肯定親權(quán)關(guān)系，后加做9個(gè)Y-STR基因座，最后排除親權(quán)關(guān)系。

X染色體STR基因座為性連鎖遺傳，由于其遺傳標(biāo)記的定向性，使X-STR分型在法醫(yī)實(shí)踐中具有獨(dú)特的應(yīng)用價(jià)值，在父母不全的同父異母姐妹鑒定、祖母-孫女關(guān)系鑒定、父女關(guān)系鑒定案件以及個(gè)體識(shí)別中性別的輔助鑒定、混合樣本的判定等案件中發(fā)揮著重要的作用[8]，還可作為常染色體STR基因座檢驗(yàn)的重要補(bǔ)充，特別是在姐妹親緣關(guān)系鑒定中，兩結(jié)果之間相互印證，能提高鑒定結(jié)論的可靠性。目前已有較多應(yīng)用X染色體STR進(jìn)行祖母與孫女鑒定[8]、姐妹關(guān)系鑒定[9]的成功案例。

4 線粒體DNA多態(tài)性鑒定

人類線粒體DNA(Mitochondrial DNA，mtDNA)是獨(dú)立于細(xì)胞核染色體外的另一基因組，其獨(dú)特的遺傳學(xué)特點(diǎn)在系統(tǒng)進(jìn)化、群體遺傳、人類學(xué)及法醫(yī)學(xué)鑒定等研究領(lǐng)域有著重要的應(yīng)用價(jià)值[10]。由于線粒體是按母系遺傳方式傳遞，可以確定檢驗(yàn)樣品是否來(lái)自于同一母系，適用于同胞之間、隔代或旁系親緣鑒定，如再結(jié)合孟德?tīng)栠z傳的遺傳標(biāo)記檢驗(yàn)，可以正確確定樣品間的親緣關(guān)系。如鑒定外祖母和外孫女的關(guān)系，可以直接提取線粒體DNA，如果線粒體DNA結(jié)果完全一致，就可以基本確定祖孫關(guān)系，但是在檢測(cè)結(jié)果有1～2個(gè)位點(diǎn)不同的時(shí)候，就達(dá)不到排除親權(quán)關(guān)系的條件，因?yàn)榫€粒體DNA比細(xì)胞核DNA更容易發(fā)生突變，所以這種差異和不同有可能是突變?cè)斐傻?，也有可能是?shí)際上的不同。線粒體DNA一般只用來(lái)鑒定外祖母與外孫女、姨與外甥女或同胞兄妹間等比較特殊的親緣關(guān)系，則因此在實(shí)際案例中應(yīng)用很少。

Y-STR呈父系連鎖遺傳，僅適用于男性間的鑒別；線粒體是母系遺傳，多數(shù)用于女性間的鑒別，且存在高突變率和異質(zhì)性；SNP檢測(cè)技術(shù)方法復(fù)雜，費(fèi)用昂貴；因此這幾種技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中受限。目前親子鑒定主要應(yīng)用STR測(cè)序的方法，當(dāng)STR鑒定結(jié)果不能確定時(shí)，可用以上方法輔助檢測(cè)。

親子鑒定作為一項(xiàng)特殊的檢測(cè)，涉及養(yǎng)父、生父、母親和孩子等角色，也就映射出父親的知情權(quán)與相關(guān)經(jīng)濟(jì)利益、母親的隱私權(quán)及尊嚴(yán)、孩子的利益以及婚姻家庭的穩(wěn)定等內(nèi)容，因此在倫理方面必須重視。關(guān)于我國(guó)親子鑒定法律的完善，社會(huì)輿論應(yīng)堅(jiān)持保護(hù)女性合法權(quán)益和孩子利益最大化，以及促進(jìn)家庭婚姻關(guān)系和諧穩(wěn)定的原則，繼承我國(guó)優(yōu)良的社會(huì)倫理道德和風(fēng)俗，借鑒世界司法先進(jìn)國(guó)家的的經(jīng)驗(yàn)和法律，建立一套完善的親權(quán)鑒定的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)和親權(quán)關(guān)系推定的法律制度。

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徐衛(wèi)華(1982—)，男，廣東省韶關(guān)市人，研究實(shí)習(xí)員，碩士。*

符生苗。E-mail:smfu2000@126.com。

2011-07-28)