孫莎莎，張素榮，馬婧姣，游程皓，李澤盛，王貴強(qiáng)，龐海東，劉金華，林德貴

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 海淀 100193；2.北京市順義區(qū)仁和獸醫(yī)衛(wèi)生防疫站，北京 順義 101300）

早在20世紀(jì)70年代，Nikitin A等人通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)證明犬可以感染人H3N2流感病毒，并且在犬血清內(nèi)檢測(cè)到相應(yīng)的抗體［1］。之后Romvary J Kilbourne E D Onta T等人也證明了犬可以感染流感病毒，但是一直未從自然發(fā)病犬體內(nèi)分離到流感病毒，或者發(fā)現(xiàn)流感病毒在犬群中大量流行［2-7］。近10年，關(guān)于甲型流感病毒（influenza A virus）感染犬貓的報(bào)道頻繁出現(xiàn)，包括H3N8、H5N1、H3N2和H1N1共4種亞型流感病毒。

1 H3N8亞型犬流感病毒

2004年1月，美國(guó)福羅里達(dá)州的22只灰獵犬（Greyhound）暴發(fā)了呼吸道疾病。其中14只表現(xiàn)為中度發(fā)燒和咳嗽的呼吸道綜合征，而另外8只表現(xiàn)為嚴(yán)重的出血性氣管炎、支氣管肺炎、胸膜炎和高熱伴發(fā)脈管炎的癥狀，其中1只死亡。從死亡病例的肺組織勻漿中分離到了甲型H3N8流感病毒［8］。通過(guò)免疫組化方法，在這些犬的肺組織內(nèi)監(jiān)測(cè)到H3亞型流感病毒的抗體［8］?？祻?fù)犬血清內(nèi)可以監(jiān)測(cè)到相應(yīng)H3N8流感病毒的抗體。接觸過(guò)患犬的亞臨床癥狀犬中，約有50%的犬體內(nèi)可以檢測(cè)到相應(yīng)的抗體。將分離到的病毒接種健康的犬，可以引起有效的呼吸道感染，在其體內(nèi)可以分離到病毒，并且在血清中可以檢測(cè)到相應(yīng)的抗體，但是犬并沒(méi)有表現(xiàn)出臨床癥狀。上述論據(jù)符合科赫氏法則，證明了H3N8流感病毒能有效的感染犬［8-10］。

在此之后的2004年夏天、2005年上半年和2006年，美國(guó)共有17個(gè)州報(bào)道了賽犬群發(fā)呼吸道疾病的情況［9］。美國(guó)大范圍的血清流行病學(xué)調(diào)查顯示，H3N8流感病毒不僅在賽犬群中流行，而且已經(jīng)感染到了寵物犬群中。直至2009年6月，美國(guó)已經(jīng)有個(gè)30州報(bào)道了寵物犬感染H3N8流感病毒的病例［9，11］。

對(duì)分離出的H3N8流感病毒的HA基因的進(jìn)化分析表明，這些病毒非常相似，并且它們都同1990年間弗羅里達(dá)州流行的馬流感最接近。這種同源性暗示了最初的情況可能是由于接觸共同的競(jìng)賽場(chǎng)導(dǎo)致的馬流感跨越種間屏障感染狗的個(gè)例。對(duì)分離出的H3N8病毒的8個(gè)基因片段進(jìn)行分析表明，所有的片段均來(lái)源于馬。對(duì)儲(chǔ)存的血清進(jìn)行回顧性研究表明，最早的傳播應(yīng)該發(fā)生在1998年至2003年間。對(duì)犬H3N8病毒的HA片段和NA片段進(jìn)行分析表明，HA片段上至少有5處發(fā)生了特征性、適應(yīng)性突變，其中3處宿主特異性功能蛋白在加工處理時(shí)發(fā)生了變異，這造成該病毒在犬之間的廣泛傳播。雖然少數(shù)分離出的H3N8病毒的HA編碼氨基酸序列發(fā)生了一些突變，但是沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯的抗原漂移［8，10］。

英國(guó)Daly等人，通過(guò)血清學(xué)、免疫組化和有限的分子學(xué)證據(jù)證明了H3N8流感病毒在英國(guó)犬群中存在，但是并沒(méi)有像美國(guó)那樣廣泛傳播［12］。2002年秋季，英國(guó)一個(gè)獵狐犬犬舍發(fā)生了嚴(yán)重的呼吸道疾病，當(dāng)時(shí)并沒(méi)有分離到病毒。之后對(duì)康復(fù)犬的血清進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其體內(nèi)存在馬H3N8流感病毒的抗體。有趣的是，這些犬在得病前1周食入生的馬肉和馬內(nèi)臟。與美國(guó)的情況不同，H3N8病毒在英國(guó)并未表現(xiàn)出傳播態(tài)勢(shì)，雖然同年另一群獵狐犬的血清抗體檢測(cè)為陽(yáng)性，但是并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)兩者之間有任何聯(lián)系［12］。

澳大利亞也報(bào)道了相似的情況。2007年澳大利亞馬流感暴發(fā)期間，人們注意到同感染馬接觸的犬也出現(xiàn)了流感癥狀，并且在其體內(nèi)分離到了H3N8流感病毒。對(duì)病毒的核酸序列分析表明與馬流感相一致。但是并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)犬之間的傳播或者該病毒持續(xù)在犬群中存在［13］。

Deshpande等人的動(dòng)物試驗(yàn)表明，單獨(dú)的H3N8流感病毒感染，即可引起嚴(yán)重的呼吸道癥狀，包括咳嗽、打噴嚏、流鼻涕，但主要的癥狀還是咳嗽［14］。24只接種病毒的犬，接種1d后即有表現(xiàn)出呼吸道癥狀的，2d后即有33%的犬出現(xiàn)臨床癥狀，4d內(nèi)96%的犬表現(xiàn)出癥狀。接種10～11d時(shí)，臨床癥狀達(dá)到高峰期，12d后癥狀開(kāi)始消失。在接種病毒的第1天，共2只犬出現(xiàn)發(fā)燒的癥狀（≥39.6℃），但只持續(xù)了1d，之后一直未發(fā)現(xiàn)接種犬出現(xiàn)發(fā)燒的癥狀。接種犬第2～5天在其鼻腔分泌物中可以檢測(cè)到排毒高峰，但直至10d仍可檢測(cè)到病毒［14］。

2 H3N2亞型犬流感病毒

2007年5～9月，韓國(guó)Kyunggi省的3個(gè)動(dòng)物診所和Jeolla省的1個(gè)犬舍的犬群暴發(fā)了嚴(yán)重的呼吸道疾病。從最初3個(gè)病例的鼻分泌物中，分離到了H3N2型流感病毒，但是并未分離到犬瘟、副流感病毒和支氣管敗血型博代氏桿菌。序列分析表明，該病毒所有的8個(gè)基因片段，均與禽H3N2流感病毒有最大的相似度。對(duì)Jeolla省暴發(fā)了流感的犬舍進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查顯示，第1次采樣時(shí)52只犬中有47只犬（90%）的血清中檢測(cè)出了H3N2流感病毒的抗體，而第2次檢測(cè)的血清學(xué)抗體陽(yáng)性率為100%［15］。

Daesub Song等人將分離到的病毒接種于10周齡的比格犬進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)，動(dòng)物在接種后的2～7 d內(nèi)均表現(xiàn)出流鼻涕、打噴嚏的臨床癥狀［16］。接種病毒的24h后，所有動(dòng)物出現(xiàn)高燒的癥狀（平均溫度40.14℃），此癥狀延續(xù)了5d。接種第6天，動(dòng)物體內(nèi)可以檢測(cè)到升高的血清抗體。對(duì)感染后的犬進(jìn)行病理學(xué)檢查，肉眼可見(jiàn)病變只局限于肺臟，表現(xiàn)為多點(diǎn)或融合的粉紅色實(shí)質(zhì)性病變。將接種后第3、6天和第9天采集的組織進(jìn)行組織病理學(xué)檢查，可見(jiàn)氣管和肺部的病變，肺以外的組織未見(jiàn)病變。組織學(xué)檢查可見(jiàn)病毒引起的嚴(yán)重的上呼吸道和下呼吸道的炎癥和壞死［17］。

2006年5月至2007年9月，中國(guó)廣東也報(bào)道了4只犬感染H3N2流感病毒的病例。分離出的病毒同韓國(guó)分離的H3N2病毒有很大的相似度［18］。除了這兩個(gè)報(bào)道外，到2010年底，其他地區(qū)未發(fā)現(xiàn)H3N2流感病毒感染犬的病例。

3 H5N1亞型流感病毒

2006年，泰國(guó)Songserm等人報(bào)道了1例犬感染高致病性H5N1流感病毒的病例，這只犬在食用感染H5N1流感病毒死雞肉之后發(fā)病死亡［19］。對(duì)泰國(guó)首都629只犬的血清進(jìn)行研究表明，約25%的犬體內(nèi)含有H5特異性抗體，但是這個(gè)結(jié)果至今未得到其他證明。為了證明H5N1流感病毒在犬之間的傳播，尤其是對(duì)人傳染的可能性，Giese等人用兩種不同的高致病性H5N1禽流感接種試驗(yàn)動(dòng)物，除了結(jié)膜炎和2d的體溫升高外，沒(méi)有其他的臨床癥狀［20］。Maas等人在攻毒犬的鼻腔內(nèi)分離到了較低滴度的病毒［21］，但是Giese等人沒(méi)有分離到感染性病毒［20］。所有的攻毒犬均發(fā)生了血清轉(zhuǎn)化。同居組的犬并未發(fā)現(xiàn)被傳染。因此，并不認(rèn)為犬在傳播高致病性H5N1流感病毒中起重要作用［22］。

然而中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所陳化蘭等人2010年卻證明了犬可能在傳播高致病性H5N1流感病毒中起重要作用［23］。陳化蘭等人將12只45日齡的比格犬分為兩組，分別通過(guò)鼻腔和氣管對(duì)其接種從野生鳥(niǎo)類中分離出的H5N1禽流感病毒。接種病毒1d后，所有犬均表現(xiàn)出食欲不振，之后出現(xiàn)發(fā)燒、結(jié)膜炎、咳嗽、呼吸困難等癥狀，其中一只經(jīng)氣管接種病毒的比格犬在接種后第4天死亡。在接種病毒后2～4d，從鼻腔攻毒組的6只犬的鼻拭子和糞拭子中都分離到了流感病毒。在接種病毒后14d，兩組各存活的2只犬的血清中，都可以檢測(cè)到H5N1流感病毒的抗體。鑒于犬對(duì)H5N1禽流感病毒的高度易感性，以及犬和人類的親密性，因此不排除犬成為H5N1流感病毒傳播中介的可能性［23］。

4 H1N1亞型流感病毒

2009年，一種人禽豬三源重排的甲型H1N1流感病毒在全球范圍的人群內(nèi)廣泛傳播。作為人類最親密的伴侶動(dòng)物，中國(guó)、美國(guó)和日本相繼報(bào)道了寵物犬感染H1N1流感病毒的病例。2009年10～12月，意大利William等人在964份犬血清中檢測(cè)出29份H1N1流感抗體陽(yáng)性血清［24］。但至今為止，尚未有關(guān)于此次甲流病毒在犬群之間傳播或者犬感染甲流與人之間的關(guān)系的報(bào)道。

過(guò)去，人們一直認(rèn)為犬不是流感病毒的宿主，但現(xiàn)在越來(lái)越多的研究證明犬群中已經(jīng)存在流感病毒感染。這應(yīng)該引起獸醫(yī)工作者的關(guān)注，當(dāng)犬群中群發(fā)傳染性呼吸道疾病時(shí)，應(yīng)考慮到感染流感病毒的可能性，及時(shí)的控制其傳播，對(duì)公共衛(wèi)生的安全應(yīng)予以重視，并進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。

［1］Nikitin T，Cohen D，Todd J D，et al.Epidemiological studies of A／Hong Kong／68virus infection in dogs［J］.Bulletin of the World Health Organization，1972，47（4）：471.

［2］Paniker C，Nair C.Infection with A2Hong Kong influenza virus in domestic cats［J］.Bulletin of the World Health Organization，1970，43（6）：859.

［3］Romvary J，Rozsa J，F(xiàn)arkas E.Infection of dogs and cats with the Hong Kong influenza A（H3N2）virus during an epidemic period in Hungary［J］.Acta veterinaria Academiae Scientiarum Hungaricae，1975，25（2-3）：255.

［4］Chang C P，New A E，Taylor J F，et al.Influenza virus isolations from dogs during a human epidemic in Taiwan［J］.Zoonoses，1976，3：61-64

［5］Onta T，Kida H，Kawano J，et al.Distribution of antibodies against various influenza A viruses in animals［J］.Nippon juigaku zasshi.The Japanese journal of veterinary science，1978，40（4）：451.

［6］Houser R E，Heuschele W P.Evidence of prior infection with influenza A／Texas／77（H3N2（virus in dogs with clinical parainfluenza［J］.Canadian Journal of Comparative Medicine，1980，44（4）：396.

［7］Hinshaw V S，Webster R G，Easterday B C，et al.Replication of avian influenza A viruses in mammals［J］.Infection and Immunity，1981，34（2）：354.

［8］Crawford P C，Dubovi E J，Castleman W L，et al.Transmission of equine influenza virus to dogs［J］.Science，2005，310（5747）：482.

［9］Harder T C，Vahlenkamp T W.Influenza virus infections in dogs and cats［J］.Veterinary Immunology and Immunopathology，2010，134（1-2）：54-60.

［10］Payungporn S，Crawford P C，Kouo T S，et al.Influenza A virus（H3N8）in dogs with respiratory disease，F(xiàn)lorida［J］.E-merging Infectious Diseases，2008，14（6）：902.

［11］Holt D E，Mover M R，Brown D C.Serologic prevalence of antibodies against canine influenza virus（H3N8）in dogs in a metropolitan animal shelter［J］.Journal of the American Veterinary Medical Association，2010，237（1）：71-73.

［12］Daly J M，Blunden A S，Macrae S，et al.Transmission of equine influenza virus to English foxhounds［J］.Emerging Infectious Diseases，2008，14（3）：461.

［13］Kirkland P D，F(xiàn)inlaison D S，Crispe E，et al.Influenza virus transmission from horses to dogs，Australia［J］.Emerging Infectious Diseases，2010，16：699-702.

［14］Deshpande M S，Abdelmagid O，Tubbs A，et al.Experimental reproduction of canine influenza virus H3N8infection in young puppies［J］.Vet Ther，2009，10：29-39.

［15］Song D，Kang B，Lee C，et al.Transmission of avian influenza virus（H3N2）to dogs［J］.Emerging Infectious Diseases，2008，14（5）：741.

［16］Song D，Lee C，Kang B，et al.Experimental infection of dogs with avian-origin canine influenza A virus（H3N2）［J］.Emerging Infectious Diseases，2009，15（1）：56.

［17］Jung K，Lee C S，Kang B K，et al.Pathology in dogs with experimental canine H3N2influenza virus infection［J］.Research in veterinary science，2010，88（3）：523-527.

［18］Li S，Shi Z，Jiao P，et al.Avian-origin H3N2canine influenza A viruses in Southern China［J］.Infection，Genetics and Evolution，2010，10（8）：1286-1288.

［19］Songserm T，Amonsin A，Jam-On R，et al.Fatal avian influenza A H5N1in a dog［J］.Emerging Infectious Diseases，2006，12（11）：1744.

［20］Giese M，Harder T C，Teifke J P，et al.Experimental infection and natural contact exposure of dogs with avian influenza virus（H5N1）［J］.Emerging Infectious Diseases，2008，14（2）：308.

［21］Maas R，Tacken M，Ruuls L，et al.Avian influenza（H5N1）susceptibility and receptors in dogs［J］.Emerging Infectious Diseases，2007，13（8）：1219.

［22］Amonsin A，Songserm T，Chutinimitkul S，et al.Genetic analysis of influenza A virus（H5N1）derived from domestic cat and dog in Thailand［J］.Archives of virology，2007，152（10）：1925-1933.

［23］Y Chen，G Zhong，G Wang，et al.Dogs are highly susceptible to H5N1avian influenza virus［J］.Virology，2010，405：15-19.

［24］Dundon W G，De Benedictis P，Viale E，et al.Serologic Evidence of Pandemic（H1N1）2009Infection in Dogs，Italy［J］.Emerging infectious diseases，2010，16（12）：2019.