陳光華

(中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081)

1 應(yīng)用動物進(jìn)行獸用生物制品檢驗(yàn)和研發(fā)的基本情況

1.1 動物在獸用生物制品質(zhì)量檢驗(yàn)和研發(fā)中普遍應(yīng)用，歷史悠久

由于獸用生物制品(包括疫苗、抗血清、微生態(tài)制劑等，不包括診斷試劑)直接應(yīng)用于動物，因此，在考察這類產(chǎn)品對動物的安全性和效力時(shí)，理所當(dāng)然地會選用動物作為試驗(yàn)平臺。在我國所有獸用生物制品生產(chǎn)企業(yè)的建設(shè)過程中，設(shè)計(jì)和建設(shè)檢驗(yàn)用動物舍，是必不可少的內(nèi)容。獸用生物制品出廠檢驗(yàn)中，動物試驗(yàn)是所有獸用生物制品生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量檢驗(yàn)員最重要的檢驗(yàn)工作。隨著獸用生物制品企業(yè)生產(chǎn)的產(chǎn)品品種越來越多，批量越來越大，以及在新產(chǎn)品研發(fā)方面的投入不斷增加，大部分獸用生物制品企業(yè)在通過第一輪GMP檢查驗(yàn)收后，都不同程度地?cái)U(kuò)建了動物舍，尤其是大動物試驗(yàn)舍。獸用生物制品企業(yè)中最大規(guī)模的動物舍面積已經(jīng)達(dá)到7000平方米左右。在新的獸用生物制品研發(fā)過程中，進(jìn)行動物試驗(yàn)也是廣大研發(fā)人員試驗(yàn)研究工作的最重要內(nèi)容，也是耗資最大的工作內(nèi)容。獸用生物制品新產(chǎn)品申報(bào)資料中的技術(shù)數(shù)據(jù)，大部分是根據(jù)動物試驗(yàn)獲得的數(shù)據(jù)。

在我國的獸用生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，規(guī)定用動物進(jìn)行終產(chǎn)品安全和效力檢驗(yàn)的歷史由來已久。在我國解放后制定的第一版《獸醫(yī)生物藥品制造及檢驗(yàn)規(guī)程》中收載的31個(gè)獸用疫苗和抗血清質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，無一例外地均采用動物進(jìn)行安全或效力檢驗(yàn)。如狂犬病滅活疫苗安全和效力檢驗(yàn)中需使用小鼠、豚鼠和兔，羊痘活疫苗的檢驗(yàn)中需用小鼠、豚鼠、兔和綿羊。2011年7月1日開始實(shí)施的《中國獸藥典(2010年版)》中收載的82個(gè)獸用疫苗和抗血清(40個(gè)活疫苗、40個(gè)滅活疫苗和2個(gè)抗血清)中，用動物進(jìn)行安全或效力檢驗(yàn)的產(chǎn)品為100%；用靶動物進(jìn)行安全或效力檢驗(yàn)的產(chǎn)品有58個(gè)，占71%；用非標(biāo)準(zhǔn)化試驗(yàn)動物(鼠、雞、豚鼠、兔以外的動物)進(jìn)行安全或效力檢驗(yàn)的產(chǎn)品有36個(gè)，占44%。

應(yīng)用動物試驗(yàn)進(jìn)行獸用生物制品安全或效力評價(jià)，在全世界范圍內(nèi)都是十分普遍的現(xiàn)象。在《美國聯(lián)邦法規(guī)》中公布的73個(gè)獸用生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，用動物進(jìn)行安全或效力檢驗(yàn)的產(chǎn)品達(dá)到65個(gè)，占89%；用靶動物進(jìn)行安全或效力檢驗(yàn)的產(chǎn)品有39個(gè)，占54%；用非標(biāo)準(zhǔn)化動物進(jìn)行安全或效力檢驗(yàn)的產(chǎn)品有23個(gè)，占32%。

由此可見，在獸用生物制品的質(zhì)量評價(jià)中，動物試驗(yàn)發(fā)揮著不可替代的作用。尤其是，在評價(jià)獸用疫苗免疫效力的各種方法中，盡管用于檢測有效抗原含量的化學(xué)方法、生物化學(xué)方法已經(jīng)經(jīng)常應(yīng)用于獸用疫苗生產(chǎn)過程的中間控制，但是，基于動物免疫學(xué)原理的疫苗抗原相對含量測定法、免疫抗體效價(jià)測定法、替代動物免疫攻毒法及靶動物免疫攻毒法等仍然是(也仍將是)最令人信服的獸用生物制品成品免疫效力評價(jià)方法。

1.2 獸用生物制品檢驗(yàn)中所用動物品種多、數(shù)量大

在獸藥領(lǐng)域中應(yīng)用動物的工作主要包括國內(nèi)獸用生物制品生產(chǎn)企業(yè)對其產(chǎn)品進(jìn)行的出廠檢驗(yàn)、各企業(yè)和有關(guān)科研單位從事的獸用生物制品新藥研發(fā)、監(jiān)管部門根據(jù)國家計(jì)劃開展的監(jiān)督檢驗(yàn)、有關(guān)單位根據(jù)農(nóng)業(yè)部授權(quán)對國內(nèi)新生物制品和進(jìn)口生物制品進(jìn)行的復(fù)核檢驗(yàn)等，此外，在菌毒種鑒定、部分化學(xué)藥品和中獸藥的檢測和研發(fā)、生物制品檢測方法研究、動物疫病診斷試劑研發(fā)、各企業(yè)中間產(chǎn)品質(zhì)量控制中也可能使用動物。其中，獸用生物制品出廠檢驗(yàn)和新生物制品研發(fā)中使用的動物數(shù)量遠(yuǎn)高于其他。用動物進(jìn)行出廠檢驗(yàn)的項(xiàng)目包括安全檢驗(yàn)、效力檢驗(yàn)，有時(shí)在外源病毒檢驗(yàn)中也會使用動物。研發(fā)過程中的菌毒種鑒定、工藝研究、實(shí)驗(yàn)室安全、效力、免疫期和保存期試驗(yàn)等幾乎研發(fā)全過程中的所有試驗(yàn)項(xiàng)目均需使用動物。

到目前為止，我國已經(jīng)批準(zhǔn)的國產(chǎn)獸用疫苗、抗血清等共319個(gè)，其中，用量大、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較為成熟、被2010年版《中國獸藥典》三部收載的82個(gè)獸用疫苗和抗血清(40個(gè)活疫苗、40個(gè)滅活疫苗和2個(gè)抗血清)中，涉及到的檢驗(yàn)用動物包括雞、豬、牛、羊、鴨、鵝、兔、小鼠、豚鼠、馬、魚、貂等。其中，用豬進(jìn)行安全或效力檢驗(yàn)的產(chǎn)品達(dá)到16個(gè)；用牛羊進(jìn)行安全或效力檢驗(yàn)的產(chǎn)品有18個(gè)；總體上來看，用非標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動物(鼠、雞、兔以外的動物)進(jìn)行安全或效力檢驗(yàn)的產(chǎn)品有36個(gè)。

經(jīng)對我國各獸用生物制品企業(yè)近某年生產(chǎn)的約160種獸用疫苗和抗血清約12000批、1100億頭份(羽份)產(chǎn)品出廠檢驗(yàn)中所用動物種類和數(shù)量(除小鼠、豚鼠、兔外)進(jìn)行測算，我國各企業(yè)每年用于獸用生物制品出廠檢驗(yàn)的動物數(shù)量約為：雞240000只、豬30000頭、牛6000頭、犬300只、貂400只、羊2400只、鵝200只、鴨800只。

在獸用生物制品研發(fā)方面，由于參與研發(fā)的單位較多，每個(gè)產(chǎn)品的研發(fā)周期有所差別，不同品種的試驗(yàn)要求和研發(fā)進(jìn)度可能不同，難以準(zhǔn)確統(tǒng)計(jì)每年用于研發(fā)的動物種類和數(shù)量，但從每年約100個(gè)新產(chǎn)品的申報(bào)進(jìn)度看，用于研發(fā)的動物數(shù)量也非?？捎^。因?yàn)椋孕庐a(chǎn)品研發(fā)的初期到最終的臨床試驗(yàn)階段，均需使用動物，且農(nóng)業(yè)部對每個(gè)試驗(yàn)中所用樣品的批數(shù)和動物數(shù)量均有基本要求。從近幾年的研發(fā)動向看，在禽病疫苗研發(fā)積極性越發(fā)高漲的基礎(chǔ)上，在豬病疫苗、水禽疫苗、犬用疫苗的研究方面也越來越活躍，有關(guān)試驗(yàn)中豬、鴨、犬的用量越來越大。

2 存在問題

2.1 動物供應(yīng)不足

從動物品種看，用于獸用生物制品檢驗(yàn)和研發(fā)的小型實(shí)驗(yàn)動物(如兔、鼠、雞)在數(shù)量上基本上能夠得到滿足。但其他動物，如豬、牛、羊、犬、鴨、鵝、

魚、貂、狐等，市場上基本不能供應(yīng)。這些動物絕大部分來源于養(yǎng)殖場，與法規(guī)中的實(shí)驗(yàn)動物定義相去甚遠(yuǎn)，根本不能稱之為“實(shí)驗(yàn)動物”(本文中籠統(tǒng)地稱為“動物”)。為了獲得這些動物，只能根據(jù)有關(guān)試驗(yàn)要求由試驗(yàn)人員臨時(shí)從外觀健康的動物群中篩選敏感動物。由于國家對部分重大動物疫病(如豬口蹄疫、?？谔阋?、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病)實(shí)行強(qiáng)制免疫政策，要從規(guī)模養(yǎng)殖場或個(gè)體養(yǎng)殖戶家中篩選到符合要求的敏感動物，極其困難。有的檢驗(yàn)或研發(fā)中所需特殊標(biāo)準(zhǔn)的動物(如狂犬病、犬細(xì)小病毒、犬瘟熱、犬腺病毒、犬副流感抗體陰性犬)，就更加無法得到滿足。

2.2 動物標(biāo)準(zhǔn)不完善，監(jiān)管不到位，質(zhì)量得不到保證

為加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)動物管理、保證實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量，國家先后發(fā)布并實(shí)施了雞、兔、豚鼠、倉鼠、大鼠、小鼠國家標(biāo)準(zhǔn)，但對獸用生物制品質(zhì)量檢驗(yàn)和研發(fā)中大量使用的豬、犬、牛、羊、馬、鴨、鵝等，尚未發(fā)布國家標(biāo)準(zhǔn)。由于這些動物的使用范圍基本上只局限于獸用生物制品生產(chǎn)企業(yè)和科研單位，其他部門和行業(yè)的管理人員和專家很少關(guān)注，因此，這些動物的標(biāo)準(zhǔn)制定問題料將難以在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域以外的更大范圍內(nèi)引起共鳴。由于缺乏標(biāo)準(zhǔn)，在這些動物的生產(chǎn)許可、質(zhì)量檢測、試驗(yàn)場所建設(shè)和認(rèn)證、動物試驗(yàn)的監(jiān)管等方面存在一系列空白。

即便是已經(jīng)有了國家標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動物，也比較普遍地存在質(zhì)量問題。有的單位所用實(shí)驗(yàn)動物系譜不清，來源復(fù)雜，有的生產(chǎn)條件簡陋、飼養(yǎng)管理粗放。缺少實(shí)驗(yàn)動物檢測試劑和權(quán)威質(zhì)量檢測部門，對試驗(yàn)動物的生產(chǎn)管理，重審批，輕監(jiān)管。近年來，眾多獸用生物制品生產(chǎn)企業(yè)普遍反映因因SPF雞胚質(zhì)量問題導(dǎo)致獸用疫苗質(zhì)量不過關(guān)的現(xiàn)象越來越多。

2.3 動物試驗(yàn)過于頻繁，動物福利未得到有效關(guān)注

在絕大多數(shù)獸用疫苗檢驗(yàn)和研發(fā)中均需進(jìn)行動物試驗(yàn)。近幾年來，我國獸用生物制品生產(chǎn)行業(yè)處于規(guī)模擴(kuò)張期，各企業(yè)為了提高市場競爭力，不得不增加產(chǎn)品種類，更是導(dǎo)致檢驗(yàn)中所需動物種類和數(shù)量不斷增加。2005年以來，大部分企業(yè)擴(kuò)建了動物舍。各生產(chǎn)企業(yè)的動物試驗(yàn)已經(jīng)成為動物疫苗檢驗(yàn)和研發(fā)的主要工作內(nèi)容。動物用量較大的項(xiàng)目包括安全性試驗(yàn)、動物免疫抗體效價(jià)測定試驗(yàn)和免疫攻毒試驗(yàn)。其中，動物試驗(yàn)已經(jīng)成為安全性評價(jià)的不二選擇。采用動物試驗(yàn)方法進(jìn)行免疫效力評價(jià)，也是較為普遍應(yīng)用的方法，在我國尤甚。頻繁的動物試驗(yàn)中，動物福利未受到足夠關(guān)注，尤其是我國對部分試驗(yàn)用大動物的飼養(yǎng)環(huán)境、衛(wèi)生、營養(yǎng)等方面缺乏嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)，對大動物的試驗(yàn)缺少監(jiān)管。

2.4 免疫攻毒試驗(yàn)過于頻繁，生物安全存在隱患

免疫攻毒方法是評價(jià)獸用疫苗免疫效力的最直觀方法，但因標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)動物(尤其是大動物)來源困難，特別是免疫攻毒試驗(yàn)中存在病原體擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)，發(fā)達(dá)國家多采用免疫抗體效價(jià)測定、有效抗原含量測定等替代方法。但在我國，由于各新產(chǎn)品研發(fā)單位為了避免在尋找替代方法過程中必須完成的平行關(guān)系試驗(yàn)，而放棄尋找免疫攻毒效力檢驗(yàn)的替代方法；對已經(jīng)采取免疫攻毒方法進(jìn)行效力檢驗(yàn)的產(chǎn)品，在修訂標(biāo)準(zhǔn)的過程中，更沒有人愿意嘗試尋找替代效力檢驗(yàn)方法。因此，我國獸用疫苗質(zhì)量控制中采取免疫攻毒方法的數(shù)量和比例明顯高于發(fā)達(dá)國家。強(qiáng)毒攻擊試驗(yàn)中，如果不能加強(qiáng)空氣、人員、動物、廢棄物和動物尸體等環(huán)節(jié)的管理，控制病原體外泄就難以實(shí)現(xiàn)。

3 幾點(diǎn)意見和建議

3.1 加強(qiáng)部門間協(xié)調(diào)，進(jìn)一步強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)動物管理

《實(shí)驗(yàn)動物管理?xiàng)l例》規(guī)定：國家科技管理部門主管全國實(shí)驗(yàn)動物工作；各省、自治區(qū)、直轄市科技管理部門主管本地區(qū)的實(shí)驗(yàn)動物工作；國務(wù)院各有關(guān)部門負(fù)責(zé)管理本部門的實(shí)驗(yàn)動物工作。由于實(shí)驗(yàn)動物的標(biāo)準(zhǔn)制定、認(rèn)證、生產(chǎn)、使用、進(jìn)出口和質(zhì)量監(jiān)督等涉及到多個(gè)管理部門，要做好實(shí)驗(yàn)動物的各項(xiàng)管理工作，需要各部門加強(qiáng)協(xié)調(diào)，分工合作。

目前，在對各部門共用的實(shí)驗(yàn)動物(如雞、鼠、兔)的管理中，未明確實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量檢測職能，缺少專業(yè)檢測單位、實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量檢測方法、標(biāo)準(zhǔn)和試劑；對獸用生物制品行業(yè)中專門使用的動物(如豬、牛、羊等)，盡管這些動物并不符合法律法規(guī)中“實(shí)驗(yàn)動物”的嚴(yán)格定義，但因其具有與標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動物相同的屬性和意義，農(nóng)業(yè)部應(yīng)根據(jù)《實(shí)驗(yàn)動物管理?xiàng)l例》規(guī)定，結(jié)合農(nóng)業(yè)領(lǐng)域所用動物的具體情況，制定實(shí)施辦法，并成立有關(guān)機(jī)構(gòu)，開展農(nóng)業(yè)行業(yè)實(shí)驗(yàn)動物管理工作(制定動物標(biāo)準(zhǔn)、微生物檢測方法和標(biāo)準(zhǔn)等，組織開展質(zhì)量檢測工作)。

3.2 加強(qiáng)動物研究，建立大動物供應(yīng)基地，保證質(zhì)量

對目前獸用生物制品領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的非標(biāo)準(zhǔn)化試驗(yàn)動物(如豬、牛、羊等大動物)，由于其來源越來越困難，質(zhì)量極不穩(wěn)定，且其質(zhì)量對重大動物疫病疫苗的質(zhì)量檢測和新產(chǎn)品研發(fā)的重要性越來越大，因此應(yīng)加大對這些動物的研究力度，盡快扶持建立質(zhì)量較為穩(wěn)定的健康敏感動物基地，進(jìn)而建立標(biāo)準(zhǔn)化的大型實(shí)驗(yàn)動物群。

3.3 改變觀念，改進(jìn)獸用生物制品檢驗(yàn)方法，減少實(shí)驗(yàn)動物用量

應(yīng)用動物進(jìn)行獸用生物制品質(zhì)量檢驗(yàn)和研發(fā)已有很長歷史，且已證明多數(shù)動物模型有助于評價(jià)獸用生物制品的質(zhì)量。但是，大量使用動物，存在經(jīng)濟(jì)、科學(xué)和倫理方面的限制。當(dāng)我們使用家畜(如牛、馬)進(jìn)行免疫攻毒試驗(yàn)時(shí)，勞動量大，花費(fèi)高，費(fèi)時(shí)。當(dāng)我們使用標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)動物替代靶動物進(jìn)行免疫攻毒試驗(yàn)時(shí)，由于實(shí)驗(yàn)動物發(fā)病機(jī)理、毒力特征、免疫反應(yīng)的誘導(dǎo)以及保護(hù)性免疫反應(yīng)均不可能和靶動物相同，實(shí)驗(yàn)動物與靶動物之間的相關(guān)性存在諸多不確定性。動物試驗(yàn)結(jié)果的差異性遠(yuǎn)高于用實(shí)驗(yàn)儀器獲得的數(shù)據(jù)，這種差異性不僅存在于不同實(shí)驗(yàn)室之間，也存在于同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部。據(jù)報(bào)道，狂犬病疫苗NIH效力檢驗(yàn)結(jié)果的差異可達(dá)到1～10倍。動物試驗(yàn)在倫理上處于進(jìn)退兩難境地，近年來尤其如此。

在制定獸用生物制品標(biāo)準(zhǔn)、研發(fā)和評審新產(chǎn)品的過程中，我們有必要更新現(xiàn)有觀念，即：每批疫苗都要經(jīng)過靶動物的免疫攻毒效力檢驗(yàn)合格，才能確認(rèn)其為質(zhì)量合格產(chǎn)品。必要時(shí)，應(yīng)通過法律法規(guī)或技術(shù)指導(dǎo)原則的形式規(guī)定：凡規(guī)定用大型靶動物免疫攻毒方法進(jìn)行效力檢驗(yàn)的產(chǎn)品，均須另行規(guī)定一種替代檢驗(yàn)方法。尋求替代檢驗(yàn)方法時(shí)，尤其應(yīng)關(guān)注體外檢驗(yàn)方法，因?yàn)檫@是能夠顯著減少動物使用數(shù)量的唯一途徑?？偟膩碚f，制定獸用疫苗效力檢驗(yàn)方法時(shí)，應(yīng)遵循以下原則：首選體外法測定抗原含量(不用動物)，其次選用實(shí)驗(yàn)動物體內(nèi)法測定抗原含量(抗原相對含量測定法)，再次選用實(shí)驗(yàn)動物免疫攻毒法，最后選用靶動物免疫攻毒法。

3.4 加強(qiáng)安全管理，確保動物試驗(yàn)中的生物安全

安全問題正成為世界范圍內(nèi)公眾關(guān)注度越來越高的話題，生物安全問題也同樣是動物試驗(yàn)管理中的首要問題。我國大部分獸用生物制品生產(chǎn)企業(yè)和部分專業(yè)研究機(jī)構(gòu)都建有免疫攻毒動物舍，并正在開展大量的動物攻毒試驗(yàn)，這是由我國動物疫病現(xiàn)狀以及全國獸用生物制品研發(fā)和生產(chǎn)行為空前活躍決定的。盡管我們在對全國獸用生物制品企業(yè)實(shí)施監(jiān)管的過程中，高度重視生物安全的監(jiān)管，但只要有人在開展攻毒試驗(yàn)，生物安全隱患就始終不能排除。因此，我們應(yīng)在國家層面就獸用生物制品生產(chǎn)企業(yè)和研發(fā)機(jī)構(gòu)的生物安全管理工作制定近期和長期目標(biāo)。建議在近期要切實(shí)加強(qiáng)動物攻毒試驗(yàn)的管理，對存在安全隱患的，禁止開展動物攻毒試驗(yàn)工作；逐步建立動物攻毒試驗(yàn)基地，逐步限制分散于各地的攻毒試驗(yàn)，規(guī)定在指定地點(diǎn)和設(shè)施內(nèi)開展攻毒試驗(yàn)，最終達(dá)到有效減少攻毒試驗(yàn)、確保生物安全的目標(biāo)。

［1］陳連頤.獸用生物制品的安全性問題與應(yīng)對對策［C］.2010年學(xué)術(shù)年會論文集，長沙：中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會生物制品學(xué)分會，2010年9月.5-7.

［2］獸醫(yī)生物藥品制造及檢驗(yàn)規(guī)程［S］.中央人民政府農(nóng)業(yè)部.1952.

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［5］寧宜寶等.獸用疫苗學(xué)［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2008.220-227.

［6］實(shí)驗(yàn)動物管理?xiàng)l例［S］.北京：中華人民共和國國家科學(xué)技術(shù)委員會，1988.

［7］P.P.Pastoret，J.Blancou，P.Vannier，et al.Veterinary Vaccinology［M］.Elsevier Science B.V.， Amsterdam，The Netherlands.1997.

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